現(xiàn)代生物科技

吳久宏

一、近三年高考回眸

二、考綱解讀

（一）2017年考試大綱對(duì)本部分內(nèi)容的考試范圍和要求

（二）2017年考試大綱對(duì)選修3模塊內(nèi)容的調(diào)整

對(duì)能力要求的一些表述進(jìn)行調(diào)整：將“關(guān)注對(duì)科學(xué)、技術(shù)和社會(huì)發(fā)展有重大影響和意義的生物學(xué)新進(jìn)展以及生物科學(xué)發(fā)展史上的重要事件”調(diào)整為“關(guān)注對(duì)科學(xué)、技術(shù)和社會(huì)發(fā)展有重大影響的、與生命科學(xué)相關(guān)的突出成就及熱點(diǎn)問(wèn)題”。

特別提醒：選修3中“基因工程的原理及技術(shù)”調(diào)整成“基因工程的原理及技術(shù)（含PCR技術(shù)）”。

三、構(gòu)建知識(shí)網(wǎng)絡(luò)圖

四、高頻考點(diǎn)精析

（一）基因工程及其安全性

1.提取目的基因的常用方法

2.目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的常用方法

3.目的基因的檢測(cè)與鑒定方法

【例1】（2016·全國(guó)Ⅰ卷·40）某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活（Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因）。有人將此質(zhì)粒載體用BamHⅠ酶切后，與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有______________ （答出兩點(diǎn)即可），而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。

（2）如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的，其原因是 ______________ ；并且 ______________ 和______________ 的細(xì)胞也是不能區(qū)分的，其原因是 ______________ 。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落，還需使用含有______________ 的固體培養(yǎng)基。

（3）基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自 ______________ 。

【解析】（2）在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，只有具有Ampr的大腸桿菌才能夠生長(zhǎng)。而Ampr位于質(zhì)粒上，故未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的大腸桿菌細(xì)胞中均無(wú)Ampr，僅含有質(zhì)粒載體的和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌中均具有Ampr。目的基因的插入破壞了質(zhì)粒載體的Tetr，故含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌不能在含有四環(huán)素的平板上生長(zhǎng)，從而能與僅含有質(zhì)粒載體的大腸桿菌區(qū)分開(kāi)來(lái)。 （3）噬菌體是病毒，無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，無(wú)法自主合成DNA，需借助受體細(xì)胞完成DNA的復(fù)制。

【答案】（1）能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因（答出兩點(diǎn)即可） （2）二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng) 含有質(zhì)粒載體 含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒 二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng) 四環(huán)素 （3）受體細(xì)胞

【易錯(cuò)提醒】（1）基因工程中有3種工具，但工具酶只有2種。其中，限制酶指一類酶，而不是一種酶。限制酶的化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)，其作用的發(fā)揮需要適宜的理化條件，高溫、強(qiáng)酸或強(qiáng)堿均易使之變性失活。

（2）在切割含目的基因的DNA分子時(shí)，需用限制酶切割兩次此DNA分子，產(chǎn)生4個(gè)末端。

（3）限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶的作用部位都是脫氧核苷酸之間形成的磷酸二酯鍵（不是氫鍵），只是一個(gè)切開(kāi)，一個(gè)連接。限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已經(jīng)被修飾。

（4）限制酶切割位點(diǎn)所處的位置必須是在所需的標(biāo)記基因之外，這樣才能保證標(biāo)記基因的完整性，有利于對(duì)目的基因的檢測(cè)。

（5）為使目的基因與載體形成相同的DNA片段末端以方便連接，通常使用同一種限制酶將二者切割，但如果不同的限制酶切割DNA分子所產(chǎn)生的末端存在互補(bǔ)關(guān)系時(shí)，兩末端也可連接。

4.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因

（1）原理：利用DNA雙鏈復(fù)制的原理，在體外將基因的核苷酸序列不斷地加以復(fù)制，使其數(shù)量呈指數(shù)形式增加。

（2）條件：

（3）解題規(guī)律總結(jié)

【例2】RT-PCR是將RNA逆轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增反應(yīng)相結(jié)合的技術(shù)，具體過(guò)程如下圖所示。請(qǐng)分析回答：

（1）過(guò)程Ⅰ需要加入緩沖液、原料、______________ 、______________ 和引物A等。

（2）過(guò)程Ⅱ首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95 ℃，其目的是______________ ，該反應(yīng)體系中所用的Taq酶至少應(yīng)能耐受 ______________ ℃。

（3）過(guò)程Ⅱ擬對(duì)單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，理論上至少需要 ______________ 個(gè)引物B。

（4）利用RT-PCR技術(shù)獲取的目的基因 ______________（填“能”或“不能”）在物種之間交流；該技術(shù)還可用于對(duì)某些微量RNA病毒的檢測(cè)，可提高檢測(cè)的靈敏度，原因是______________ 。

（5）RT-PCR過(guò)程中主要借助對(duì)______________的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)有序高效地進(jìn)行。

【解析】（1）過(guò)程Ⅰ表示逆轉(zhuǎn)錄，除了需要緩沖液、原料和引物A之外，還需要RNA作為模板，逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行催化。（2）過(guò)程Ⅱ先將反應(yīng)體系的溫度升高到95 ℃，使逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活，mRNA-cDNA雜合雙鏈解開(kāi)，再在Taq酶的作用下合成雙鏈DNA，由于該反應(yīng)體系中溫度升高到95 ℃，所以所用的Taq酶至少應(yīng)能耐受95 ℃。（3）DNA復(fù)制時(shí)，子鏈的延伸需要引物，單鏈cDNA進(jìn)行1次擴(kuò)增得到雙鏈DNA，需要0個(gè)引物A和1個(gè)引物B。若單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，雙鏈DNA進(jìn)行了（n-1）次擴(kuò)增，則理論上至少需要（2n-1-1）個(gè)引物A和2n-1個(gè)引物B。（4）利用RT-PCR技術(shù)獲取的目的基因能通過(guò)基因工程在物種之間交流；該技術(shù)增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于對(duì)某些微量RNA病毒進(jìn)行檢測(cè)，并可提高檢測(cè)的靈敏度。（5）RT-PCR過(guò)程中主要借助對(duì)溫度的控制，影響酶的活性，即高溫變性→低溫復(fù)性→中溫延伸，從而使得化學(xué)反應(yīng)有序高效地進(jìn)行。

【答案】（1）RNA提取物 逆轉(zhuǎn)錄酶 （2）讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活、使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開(kāi)（答對(duì)一點(diǎn)即可） 95 （3）2n-1

（4）能 增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測(cè) （5）溫度

（二）細(xì)胞工程

1.植物組織培養(yǎng)與植物體細(xì)胞雜交的區(qū)別與聯(lián)系

2.動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備

（1）制備單克隆抗體時(shí)，選用一種抗原處理的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特性——在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。

（2）進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的誘導(dǎo)融合時(shí)，形成的雜種細(xì)胞有三種，即AA型、BB型、AB型。只有AB型才是我們所需要的雜種細(xì)胞，所以需要用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

（3）單克隆抗體制備過(guò)程中的兩次篩選：

第一次篩選：用特定的選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，即AB型細(xì)胞（A為漿細(xì)胞，B為骨髓瘤細(xì)胞），篩選掉A、B、AA、BB型細(xì)胞。

第二次篩選：用多孔板法和抗原—抗體雜交法篩選，獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。

【例3】（2016·江蘇卷·9） 下列有關(guān)細(xì)胞工程的敘述，正確的是（ ）

A.PEG是促細(xì)胞融合劑，可直接誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合

B.用原生質(zhì)體制備人工種子，要防止細(xì)胞破裂

C.骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)免疫處理，可直接獲得單克隆抗體

D.核移植克隆的動(dòng)物，其線粒體DNA來(lái)自供卵母體

【解析】PEG是促細(xì)胞融合劑，但植物細(xì)胞不能直接融合，需先去壁形成原生質(zhì)體才能融合，A項(xiàng)錯(cuò)誤；制備人工種子應(yīng)用完整的植物細(xì)胞，而不應(yīng)用原生質(zhì)體，B項(xiàng)錯(cuò)誤；骨髓瘤細(xì)胞不能產(chǎn)生抗體，C項(xiàng)錯(cuò)誤；核移植克隆的動(dòng)物，其線粒體DNA來(lái)自供卵母體，D項(xiàng)正確。

【答案】D

（三）胚胎工程與生物技術(shù)的安全性和倫理問(wèn)題

1.受精過(guò)程中的“三大反應(yīng)”與防止多精入卵的“兩道屏障”

（1）頂體反應(yīng)：精子膜和頂體外膜發(fā)生一系列改變，并釋放頂體酶的過(guò)程即為頂體反應(yīng)。頂體反應(yīng)的主要作用是形成精子穿越放射冠的通道，是精子和卵子結(jié)合必不可少的條件。

（2）透明帶反應(yīng)：精子觸及卵細(xì)胞膜的瞬間，會(huì)產(chǎn)生阻止后來(lái)的精子進(jìn)入透明帶的生理反應(yīng)，稱為透明帶反應(yīng)，這是防止多精入卵的第一道屏障。

（3）卵黃膜封閉作用：精子入卵后，卵黃膜會(huì)立即發(fā)生一種生理反應(yīng)，拒絕其他精子再進(jìn)入卵內(nèi)，稱為卵黃膜封閉作用，這是防止多精入卵的第二道屏障。

2.胚胎分割

（1）材料：發(fā)育良好，形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚。

（2）實(shí)質(zhì)：胚胎分割可增加動(dòng)物后代，其實(shí)質(zhì)是動(dòng)物的無(wú)性生殖或克隆。

（3）分割要求：對(duì)囊胚分割時(shí)，注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。

3.胚胎干細(xì)胞

（1）來(lái)源：早期胚胎或原始性腺。

（2）特點(diǎn)：[①形態(tài)：體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯。][②功能：具有發(fā)育的全能性。][③體外培養(yǎng)：可增殖而不分化。] [④可以冷凍保存，也可以進(jìn)行遺傳改造。]

【例4】（2016·全國(guó)Ⅱ卷·40）下圖表示通過(guò)核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物（二倍體）的流程。

回答下列問(wèn)題：

（1）圖中A表示正常細(xì)胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可為 ______________ 。過(guò)程①表示去除細(xì)胞核，該過(guò)程一般要在卵母細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)期再進(jìn)行，去核時(shí)常采用______________ 的方法。②代表的過(guò)程是______________ 。

（2）經(jīng)過(guò)多次傳代后，供體細(xì)胞中 ______________ 的穩(wěn)定性會(huì)降低。因此，選材時(shí)必須關(guān)注傳代次數(shù)。

（3）若獲得的克隆動(dòng)物與供體動(dòng)物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是 ______________ 。

（4）與克隆羊“多莉（利）”培養(yǎng)成功一樣，其他克隆動(dòng)物的成功獲得也證明了______________。

【解析】（1）提供體細(xì)胞的供體可能為雌性，也可能為雄性，因此圖中A（正常細(xì)胞核）的性染色體組成為XX或XY。常采用顯微操作去核法來(lái)去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核。②過(guò)程表示將早期胚胎移入受體，該過(guò)程稱為胚胎移植。（2）取供體動(dòng)物的體細(xì)胞培養(yǎng)，一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，因?yàn)?0代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型，保證了供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。若超過(guò)10代繼續(xù)培養(yǎng)，則其遺傳物質(zhì)（或核型）的穩(wěn)定性會(huì)降低。（3）克隆動(dòng)物的細(xì)胞核基因來(lái)自供體，因此大部分性狀與供體相同，但細(xì)胞質(zhì)基因來(lái)源于受體（或提供卵母細(xì)胞的個(gè)體），即卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響，所以克隆動(dòng)物的性狀與供體不完全相同。（4）克隆動(dòng)物的培育采用的是核移植技術(shù)，核移植技術(shù)的原理是已經(jīng)分化的動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性。

【答案】（1）XX或XY 顯微操作 胚胎移植 （2）遺傳物質(zhì) （3）卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響 （4）已經(jīng)分化的動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性

（四）生態(tài)工程的基本原理

1.物質(zhì)循環(huán)再生原理：物質(zhì)在生態(tài)系統(tǒng)中循環(huán)往復(fù)、分層分級(jí)利用。

2.物種多樣性原理：物種繁多而復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)具有較高的抵抗力穩(wěn)定性。

3.協(xié)調(diào)與平衡原理：處理好生物與環(huán)境的協(xié)調(diào)與平衡，需要考慮環(huán)境承載力。

4.整體性原理：進(jìn)行生態(tài)工程建設(shè)時(shí)，不僅要考慮自然生態(tài)系統(tǒng)的規(guī)律，更重要的是，還要考慮經(jīng)濟(jì)和社會(huì)等系統(tǒng)的影響力。

5.系統(tǒng)學(xué)和工程學(xué)原理：包括系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)決定功能原理和系統(tǒng)整體性原理。

【歸納總結(jié)】幾種典型生態(tài)工程的原理歸納：

（1）單一人工林比天然混交林穩(wěn)定性低，易爆發(fā)蟲(chóng)害——物種多樣性原理。

（2）草原確定合理載畜量，不能過(guò)度放牧——協(xié)調(diào)與平衡原理。

（3）引種考慮適應(yīng)環(huán)境——協(xié)調(diào)與平衡原理。

（4）林業(yè)生態(tài)工程建設(shè)，既要考慮種樹(shù)問(wèn)題又要考慮生活問(wèn)題——整體性原理。

五、找準(zhǔn)角度、突破難點(diǎn)

（一）與DNA有關(guān)的酶的比較歸納

（二）“工程?！敝R(shí)大盤(pán)點(diǎn)

1.不同“工程?！钡膮^(qū)別

2.不同“工程牛”的共同點(diǎn)：都需將發(fā)育后的早期胚胎移入受體子宮內(nèi)發(fā)育成后代。

（三）克隆動(dòng)物、試管動(dòng)物與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物遺傳特性的比較

（四）胚胎工程中八個(gè)有關(guān)“兩”的問(wèn)題

1.受精過(guò)程中防止多精入卵的兩道屏障——第一道屏障為精子穿越透明帶后的“透明帶反應(yīng)”，第二道屏障為精子入卵后的“卵細(xì)胞膜反應(yīng)”。

2.體外受精時(shí)精子獲能的兩種常用方法——培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法。

3.胚胎工程中兩次使用促性腺激素——對(duì)供體使用促性腺激素，以促其“多排卵”；對(duì)供、受體使用促性腺激素以作“同期發(fā)情處理”。

4.胚胎移植時(shí)把握兩個(gè)發(fā)育期——桑椹胚期和囊胚期。

5.胚胎移植過(guò)程中的兩次檢查——對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查（此時(shí)應(yīng)發(fā)育到桑椹胚或囊胚階段）；對(duì)受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查。

6.胚胎早期培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中的三個(gè)“兩”——兩鹽（無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)鹽）；兩素（激素、維生素）；兩酸（氨基酸、核苷酸）。

7.胚胎分割中需關(guān)注的兩個(gè)部位——滋養(yǎng)層（可用于取樣用作DNA分析以鑒定性別）、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（需將其均等分割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育）。

8.引發(fā)倫理爭(zhēng)論的兩大技術(shù)——生殖性克隆技術(shù)、設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)。

六、強(qiáng)化訓(xùn)練

1.（2014·江蘇卷·23）下列關(guān)于基因工程技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（ ）

A.切割質(zhì)粒的限制性核酸內(nèi)切酶均特異性地識(shí)別6個(gè)核苷酸序列

B.PCR反應(yīng)中溫度的周期性改變是為了DNA聚合酶催化不同的反應(yīng)

C.載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標(biāo)記基因

D.抗蟲(chóng)基因即使成功地插入到植物細(xì)胞染色體上也未必能正常表達(dá)

2.下列關(guān)于胚胎工程的敘述，錯(cuò)誤的 是（ ）

A.胚胎移植的供體和受體必須是同種生物

B.對(duì)收集的胚胎、移植后是否妊娠都要進(jìn)行檢查

C.胚胎干細(xì)胞在體外培養(yǎng)能增殖但不能被誘導(dǎo)分化

D.為了提高已有胚胎的利用率，可采用胚胎分割技術(shù)

3.下列關(guān)于生態(tài)工程的相關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是（ ）

A.生態(tài)工程是實(shí)現(xiàn)循環(huán)經(jīng)濟(jì)的最重要手段之一

B.農(nóng)村綜合發(fā)展型生態(tài)工程實(shí)現(xiàn)了物質(zhì)和能量的循環(huán)利用

C.“平堤行洪、退田還湖、移民建鎮(zhèn)”是濕地恢復(fù)工程的重要方針

D.城市環(huán)境生態(tài)工程建設(shè)的主要原理：協(xié)調(diào)與平衡原理、整體性原理

4.現(xiàn)代生物技術(shù)應(yīng)用廣泛，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）

A.由于生殖隔離，轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物不會(huì)將目的基因傳給雜草

B.反對(duì)設(shè)計(jì)試管嬰兒的原因之一是有人濫用此技術(shù)選擇性設(shè)計(jì)嬰兒

C.若轉(zhuǎn)基因植物的外源基因來(lái)源于自然界，則也可能存在安全性問(wèn)題

D.當(dāng)今社會(huì)的普遍觀點(diǎn)是禁止克隆人的實(shí)驗(yàn)，但不反對(duì)治療性克隆

5.下圖為植物體細(xì)胞雜交技術(shù)流程圖，其中甲和乙分別表示兩種二倍體植物細(xì)胞，所含有的染色體組分別是AA和BB。據(jù)圖分析不正確的是（ ）

A.圖中①過(guò)程發(fā)生的化學(xué)變化是纖維素和果膠的水解

B.經(jīng)過(guò)②和③過(guò)程形成的c細(xì)胞只有AABB這一種類型

C.過(guò)程②一般使用聚乙二醇作為誘導(dǎo)劑

D.過(guò)程④和⑤分別是脫分化和再分化

6.下圖為人體抗胃癌單克隆抗體的制備過(guò)程。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）

A.甲是能與人體抗胃癌抗體特異性結(jié)合的抗原

B.細(xì)胞融合獲得乙的原理和植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同

C.用特定選擇培養(yǎng)基對(duì)乙進(jìn)行篩選，融合細(xì)胞均能生長(zhǎng)，未融合細(xì)胞均不能生長(zhǎng)

D.丙需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，多次篩選后可獲得能分泌所需抗體的丁

7.內(nèi)皮素（ET）是一種含21個(gè)氨基酸的多肽，它有強(qiáng)烈的血管收縮和促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖等作用。研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮素功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯(lián)系。內(nèi)皮素主要通過(guò)與靶細(xì)胞膜上的內(nèi)皮素受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。ETA是內(nèi)皮素的主要受體，科研人員試圖通過(guò)構(gòu)建基因表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ETA基因在細(xì)胞中的高效表達(dá)，為后期ETA的體外研究以及拮抗劑的篩選、活性評(píng)價(jià)等奠定基礎(chǔ)，其過(guò)程如下圖所示（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C↓TCGAG）。請(qǐng)分析回答：

（1）完成過(guò)程①需要的酶是 ______________；與過(guò)程②相比，過(guò)程①特有的堿基配對(duì)方式是______________。

（2）過(guò)程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使 ______________ 鍵斷開(kāi)，形成目的基因的黏性末端是______________ 。用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是 ______________。

（3）過(guò)程⑥中，要用______________ 預(yù)先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)。

（4）利用SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是 ______________ 。

（5）人皮膚黑色素細(xì)胞上有內(nèi)皮素的特異受體，內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上的受體結(jié)合后，會(huì)刺激黑色素細(xì)胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加。美容時(shí)可以利用注射ETA達(dá)到美白祛斑效果，這是因?yàn)镋TA能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與 ______________的結(jié)合，抑制了內(nèi)皮素對(duì)黑色素細(xì)胞的增殖和黑色素的形成。

（參考答案見(jiàn)第86頁(yè)）