瓶栽北蟲草的復壯技術

張 萌 王麗萍 馬 力 榮世敏 李海波

（長春市農(nóng)業(yè)科學院 130111）

瓶栽北蟲草的復壯技術

張 萌 王麗萍 馬 力 榮世敏 李海波

（長春市農(nóng)業(yè)科學院 130111）

北蟲草是富含生物活性物質(zhì)的食藥用真菌，菌種老化衰退是北蟲草人工栽培的關鍵問題，極易造成產(chǎn)量下降和品質(zhì)不合格，為了避免菌種退化，在生產(chǎn)過程中就要經(jīng)常對菌種進行提純復壯，使菌種保持原有的種性和活力。

北蟲草 菌種 復壯

天然北蟲草是真菌侵染昆蟲蟲體或蛹形成的子實體，其食藥用價值可與冬蟲夏草媲美，其含有的蟲草素、多糖、氨基酸、超氧化物歧化酶、微量元素硒等成分具有抗菌、抗病毒，降壓、降糖，增強免疫力，抗衰老，抗腫瘤等功效[1]。又由于其與冬蟲夏草相比具有生長較快，容易人工培育出子實體的優(yōu)點，被廣泛用于人工栽培[2]。目前，北蟲草已實現(xiàn)大規(guī)模工廠化的生產(chǎn)[3]。但不論生產(chǎn)規(guī)模如何，在培育過程中都會頻繁出現(xiàn)菌種退化的問題，導致畸形草、不長草或長草少，嚴重影響北蟲草的品質(zhì)和產(chǎn)量。因此，根據(jù)自身栽培條件采用合理方法復壯退化菌種就尤為重要了。

1 固體培養(yǎng)基的制備

取200g馬鈴薯，洗凈后去皮，切成段狀，加水1L煮20min左右，用4層紗布將煮液過濾裝入燒杯，加20g葡萄糖，5g蛋白胨，2g磷酸二氫鉀，1g硫酸鎂，1g檸檬酸銨，12g瓊脂粉，50mg維生素B1攪拌均勻，定容到1L后分裝到3個500ml三角瓶中，用膠塞封口置于121℃高壓滅菌鍋滅菌30min。待培養(yǎng)液稍微冷卻后，在超凈工作臺中將其分裝到滅好菌的直徑9cm的培養(yǎng)皿中。靜置30min后，培養(yǎng)液凝固即可備用。

2 液體菌種的制備

培養(yǎng)液配制方法同上，不加瓊脂粉。滅菌后待溫度低于25℃后，在點燃酒精燈的超凈工作臺中，每瓶培養(yǎng)液接入30塊面積約為0.5mm×0.5mm的菌餅，包好封口膜，在黑暗、25℃條件下靜置培養(yǎng)一天后130r/min震蕩培養(yǎng)，待菌液中形成大小均一、形狀一致的菌粒，且菌液澄清后方可使用。

3 復壯方法

3.1 組織分離法

在無菌環(huán)境下，選取長勢健壯，形態(tài)良好的子實體長約2~ 4cm的北蟲草菌株，用75%酒精或0.1%升汞溶液進行表面消毒約15秒并用蒸餾水沖洗后，用尖頭鑷子將子實體頂部1cm處的外皮去除，輕輕夾取一小塊里面的淡黃色組織置于固體平板培養(yǎng)基表面，用封口膜將培養(yǎng)皿封好，置于恒溫22℃黑暗條件下倒置培養(yǎng)7~15天左右。此方法成活率高、污染率低且操作簡便。

3.2 孢子分離法

選取子實體顏色深且表面有小突起的成熟菌株，在無菌條件下將菌株懸掛于裝有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，在20℃自然光照條件下培養(yǎng)，彈落在培養(yǎng)基上的子囊孢子經(jīng)一周左右的時間會形成菌落，分別將不同菌落的菌絲接于固體培養(yǎng)基上單獨培養(yǎng)。

3.3 蠶蛹回接法

選取個體較大且健康的活體柞蠶蛹，先用酒精棉消毒蠶蛹表面，再用消過毒的一次性注射器抽取液體菌懸液，針頭傾斜刺入蛹壁，將菌懸液攝入至有液體流出為宜。接種后將蠶蛹單獨放入滅菌的三角瓶中，于15~18℃無光照條件下培養(yǎng)。待蛹體僵硬并在氣門長出菌絲后對蠶蛹體內(nèi)菌絲分離培養(yǎng)。

3.4 活體蠶蛹法

在無菌條件下將液體菌懸液接入蠶蛹體內(nèi)，置于22℃的培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，蟲體僵硬后進行出草管理，待子實體長到2～3cm時做組織分離。

[1]胡學生,張美雙,田淋淋,等.北蟲草的化學成分及藥理作用[J].吉林中醫(yī)藥,2016,(03)：281-283.

[2]董彩虹，李文佳，李增智，等.我國蟲草產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀、問題及展望[J].菌物學報,2016,35(1)：1-15 .

[3]高凌飛,王義祥,翁伯琦.蛹蟲草工廠化栽培與系列加工技術研究進展[J].中國農(nóng)學通報,2014,(13)：93-101.

10.16627 /j.cnki.cn22-1215/s.2017.05.024