地奈德水性凝膠的制備及透皮研究▲

陸富永 吳三強(qiáng) 熊愛民 李贊東 明海霞 尹 仲 邱崗峰

(1 廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院，桂林市 541002；2 深圳大學(xué)生化中心，廣東省深圳市 518057)

地奈德水性凝膠的制備及透皮研究▲

陸富永1吳三強(qiáng)2*熊愛民1李贊東1明海霞1尹 仲1邱崗峰2

(1 廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院，桂林市 541002；2 深圳大學(xué)生化中心，廣東省深圳市 518057)

目的 研制地奈德水性凝膠，建立其質(zhì)量控制方法并對(duì)其體外透皮吸收性能進(jìn)行觀察。方法 以地奈德為主藥制備凝膠，考察其穩(wěn)定性并用高效液相色譜法(HPLC)法測(cè)定地奈德的含量。采用改進(jìn)的Franz擴(kuò)散池，以家兔離體皮膚為透皮模型，使用HPLC法測(cè)定藥物在透皮接收液中的濃度及皮膚中藥物滯留量。結(jié)果 該制劑具有較好的穩(wěn)定性，凝膠劑中地奈德的平均回收率為98.5%～101.3%。離體條件下，藥物皮膚滯留量可達(dá)對(duì)照乳膏的1.87倍。結(jié)論 所制備的地奈德凝膠能顯著增加藥物在皮膚中的滯留量，有望成為地奈德局部給藥的新制劑。

地奈德；凝膠；質(zhì)量控制；透皮

地奈德(Desonide)是一種合成的非鹵化中效糖皮質(zhì)激素，具有抗感染、抗過敏、止癢及減少滲出的作用,能消除局部非感染性炎癥引起的發(fā)熱、發(fā)紅及腫脹，從而減輕炎癥的表現(xiàn),并具有抑制細(xì)胞免疫反應(yīng)的作用。目前國(guó)內(nèi)外市售的是乳膏劑、乳液洗劑，在治療濕疹、神經(jīng)性皮炎及特應(yīng)性皮炎中有較好療效,可用于治療面部皮炎、嬰幼兒面部濕疹[1-2]。糖皮質(zhì)激素難溶于水，通過膠束增溶技術(shù)，把難溶于水的糖皮質(zhì)激素在水性基質(zhì)中穩(wěn)定分散成納米級(jí)別的膠束/微粒的研究目前尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。另外，凝膠劑具有良好的生物相容性,對(duì)藥物釋放具有緩釋、控釋作用,制備工藝簡(jiǎn)單,易于涂布使用,局部給藥后易吸收、不污染衣物、穩(wěn)定性較好等特點(diǎn), 更適合皮膚局部外用。因此我們研制了地奈德水性凝膠(0.05%)，以期提高藥物的局部治療效果?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 高效液相色譜儀(日本島津公司，LC-10ATVP泵，SPD-10A VP 型紫外檢測(cè)器)；PHS-3C型pH計(jì)(上海雷磁)；BS110S分析天平(Sartorius)； NDJ-1型旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)(上海上天精密儀器有限公司) ；RYJ-6B藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀 (上海黃海藥檢儀器銷售有限公司)。地奈德對(duì)照品(重慶華邦制藥有限公司提供，含量99.6%)；地奈德乳膏(重慶華邦制藥有限公司，批號(hào)2015015 )；卡波姆980NF(諾譽(yù)化工，批號(hào) EC863CC625)；其余試劑均為分析純或藥用規(guī)格，HPLC試劑為色譜純。新西蘭大白兔，體重1.5～2.0 kg，雌雄不限(廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)

1.2 處方設(shè)計(jì)及制備

1.2.1 處方 地奈德0.5 g，卡波姆940 6 g ，甘油 80 g，增溶劑X 20 g，穩(wěn)定劑Y 8 g，三乙醇胺適量，超純水加至1 000 g。

1.2.2 制備方法 取處方量的地奈德加入增溶劑X，用超聲使其溶解，得A液備用；穩(wěn)定劑Y用適量超純水溶解，得B液備用，卡波姆940用適量水溶脹，加入甘油，攪拌下 慢慢加入三乙醇胺，調(diào)pH至6.5左右，攪拌下慢慢滴加 A液、B液，加超純水至全量攪勻，即得。滅菌，鋁塑管分裝，每支10 g，共制備3批。

1.3 質(zhì)量評(píng)價(jià)

1.3.2 pH值檢查 按照中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅥH的測(cè)定方法，取1 g樣品用10 mL新沸放冷的超純水溶解，測(cè)得pH值為6.0～7.0,符合《中國(guó)藥典》凝膠劑項(xiàng)下要求。

1.3.3 黏度 按照黏度測(cè)定法《中國(guó)藥典》附錄ⅥG第二法，采用 NDJ-1型旋轉(zhuǎn)式黏度計(jì)，4號(hào)轉(zhuǎn)子，轉(zhuǎn)速6 r/min，測(cè)定樣品在25℃的動(dòng)力黏度。

1.3.4 恒溫加速試驗(yàn) 將凝膠灌裝于已滅菌的鋁塑管中，裝量10 g/支，置于恒溫箱(40±1)℃、室溫(25±1)℃ 及冰箱(4±2)℃中貯存3個(gè)月后觀察變化。

1.3.5 含量測(cè)定 色譜條件[3-4]：色譜柱：Dikma Diamonsil C18(5 μm，200 mm×4.6 mm)；流動(dòng)相：甲醇-水(75 ∶25)；檢測(cè)波長(zhǎng)：244 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20 μL。上述色譜條件下，空白凝膠基質(zhì)、對(duì)照品、地奈德凝膠樣品的色譜圖見圖1。

A 空白凝膠樣品 B 地奈德對(duì)照品 C 地奈德凝膠樣品

1.4 體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn)

1.4.1 離體皮膚制備 新西蘭大白兔注射麻醉，電剃刀除去腹部毛發(fā)，頸椎脫臼處死動(dòng)物。立即剝離腹部皮膚，小心地用蘸有生理鹽水的脫脂棉除去皮下脂肪 ，浸于生理鹽水溶液，冷藏備用。

1.4.2 滲透實(shí)驗(yàn) 采用改良Franz擴(kuò)散池進(jìn)行實(shí)驗(yàn), 將皮膚置于接收池和供給池之間，角質(zhì)層面向上。地奈德凝膠和市售地奈德乳膏各1.0 g分別均勻地涂布于皮膚角質(zhì)層上。接受池容積7.0 mL，透皮擴(kuò)散面積2.8 cm2，接受液為含20%乙醇的生理鹽水，水浴溫度37℃。分別于0 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h、4.0 h、6.0 h、8.0 h從接受室中取樣500 μL，并立刻補(bǔ)充同體積的新鮮接受液。樣品適當(dāng)處理后進(jìn)行HPLC分析。藥物的累積透過量(Q)計(jì)算公式如下所示：

《冶金分析》為月刊，大16開，單期頁碼為80頁，定價(jià)30.00元，全年12期，360.00元。全國(guó)各地郵局發(fā)行，如有漏訂的單位和讀者，請(qǐng)直接與編輯部聯(lián)系。

式中，Q：第n次取樣時(shí)單位面積藥物累積透過量(μg/cm2) ；V：接收池體積；Cn：第n次取樣點(diǎn)濃度；Vi：第i次取樣的體積；Ci：第i次取樣藥物濃度；A：擴(kuò)散面積。

1.4.3 地奈德在皮膚各層的分布量 取上述體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn)8 h后的皮膚刮去剩余凝膠，用生理鹽水沖洗干凈，拭干，剪取有效擴(kuò)散面積以內(nèi)的皮膚立即稱重后，用膠布剝離角質(zhì)層(20次)。①將膠布用甲醇分2次超聲萃取，每次10 min，合并提取液，蒸發(fā)溶劑，剩下的殘?jiān)苡诩状?，再蒸干溶劑，殘?jiān)芗尤?00 μL甲醇溶解，離心，取上清液HPLC測(cè)定含量。②將剝離角質(zhì)層的皮膚剪碎，加5 mL生理鹽水研成勻漿，用甲醇分2次超聲萃取，合并提取液，蒸發(fā)溶劑，剩下的殘?jiān)苡诩状?，再蒸干溶劑，殘?jiān)芗尤?00 μL甲醇溶解，離心，取上清液行HPLC測(cè)定含量。

2 結(jié) 果

2.1 基本狀態(tài) 凝膠的pH值為6.0～7.0，三批凝膠的平均黏度為41.6 Pa.S，符合《中國(guó)藥典2010》凝膠劑項(xiàng)下要求。恒溫加速試驗(yàn)結(jié)果，本品性狀、pH值、均勻性、黏度、涂展性無異常。

2.2 含量測(cè)定結(jié)果

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精確稱取干燥至恒重的地奈德對(duì)照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解后稀釋至刻度，搖勻作為貯備液；再將上述溶液稀釋成1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL。精密吸取上述溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，以樣品濃度(C)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為：y=311.934 2x-64.476 8，r=0.994 722。結(jié)果表明，含量測(cè)定條件下，在1～100 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.2 專屬性試驗(yàn) 空白輔料干擾試驗(yàn)：按處方配比，配制不含地奈德的空白對(duì)照制劑，用甲醇 ∶水(75 ∶25) 稀釋成相近濃度的不含地奈德的空白溶液，在上述色譜條件下分離測(cè)定，結(jié)果地奈德峰位置處沒有輔料峰或溶劑峰及其他雜質(zhì)峰干擾(圖1) 。

2.2.3 回收率試驗(yàn) 精密稱取1.0 g空白凝膠基質(zhì)三份于三角瓶中，分別精密加入地奈德儲(chǔ)備液2 mL、3 mL、4 mL，用甲醇稀釋、定容于50 mL容量瓶中，搖勻，離心，各取20 μL三份進(jìn)樣，記錄峰面積，測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果低、中、高濃度地奈德回收率為98.5%～101.3%。

2.2.4 樣品含量 精密稱取三批地奈德凝膠樣品各3份(0.5 g/份)，用甲醇稀釋、定容于50 mL容量瓶中，搖勻，離心，每批樣品離心液20 μL連續(xù)進(jìn)樣3次,記錄峰面積，計(jì)算樣品含量，3批樣品標(biāo)示量分別為98.4%、101.2%、99.7%。

2.3 體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn) 測(cè)定每一取樣點(diǎn)樣品的濃度，計(jì)算單位面積累計(jì)滲透量(Q)，結(jié)果見圖2。以穩(wěn)態(tài)時(shí)Q對(duì)時(shí)間t進(jìn)行回歸，計(jì)算得滲透系數(shù)J，結(jié)果見表1。地奈德凝膠的滲透系數(shù)為 0.110 799 μg·cm-2·h-1；市售乳膏力言卓的滲透系數(shù)為0.104 451 μg·cm-2·h-1。自制品和市售品的累積滲透量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.4 皮膚中的藥物滯留量 透皮吸收8 h后地奈德在角質(zhì)層、其余表皮各層及真皮的分布情況見表2。結(jié)果顯示角質(zhì)層中藥物含量基本相同，而在除角質(zhì)層外的表皮各層及真皮中藥物滯留量是市售乳膏的1.87倍，明顯大于市售乳膏。

A 地奈德凝膠 B 市售地奈德乳膏

時(shí)段地奈德凝膠地奈德乳膏1h0．165±0．0210．161±0．0282h0．296±0．0170．278±0．0184h0．502±0．0720．467±0．1136h0．775±0．1400．734±0．1768h0．926±0．1360．875±0．121Q?t方程y=0．110799x+0．067445y=0．104451x+0．064305r0．9964160．996138J0．1107990．104451

表2 透皮滲透實(shí)驗(yàn)8 h后地奈德在皮膚各層的含量 (μg/g，n=6)

注：與乳膏比較，*P>0.05 ；#P<0.01。

3 討 論

局部給藥制劑要求藥物能分布到或透過皮膚的角質(zhì)層到達(dá)病灶部位, 而全身吸收及積累很少。在制劑設(shè)計(jì)時(shí)，要求活性成分盡量少地透過皮膚進(jìn)入大循環(huán)[5]。因此，本實(shí)驗(yàn)處方設(shè)計(jì)時(shí)避免使用氮酮、二甲基亞砜、高濃度乙醇之類的透皮吸收劑。

地奈德凝膠處方中的增溶劑X是復(fù)配的乳化劑，該增溶劑可形成高分子膠束，完成對(duì)難溶藥物的增溶和包裹，加入穩(wěn)定劑Y后，在水性介質(zhì)中比較穩(wěn)定。使用該技術(shù)將地奈德在水性基質(zhì)中的溶解度增溶至治療有效治療濃度的5～10倍，避免使用了二甲基亞砜、高濃度乙醇、丙二醇等有機(jī)溶劑，降低這類溶劑導(dǎo)致的不良反應(yīng)；而且，穩(wěn)定劑Y也是一種較好的保濕劑，與人體皮膚相容性極好，對(duì)干燥性皮損和瘙癢具有較好的輔助作用。經(jīng)穩(wěn)定性研究，該凝膠穩(wěn)定性良好。

本實(shí)驗(yàn)制備的地奈德凝膠，制備工藝簡(jiǎn)單，質(zhì)量控制方法步驟簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、可靠，制劑質(zhì)量符合2010年版《中國(guó)藥典》(二部)的要求。

體外經(jīng)皮滲透試驗(yàn)結(jié)果表明，該凝膠經(jīng)皮滲透系數(shù)與市售地奈德乳膏基本一致，經(jīng)皮吸收后在角質(zhì)層中的藥物含量基本相同，說明角質(zhì)層對(duì)藥物的儲(chǔ)留有飽和現(xiàn)象；而在皮膚角質(zhì)層以外的皮膚各層中的藥物濃度高于市售乳膏，說明增溶劑X與穩(wěn)定劑Y的復(fù)配使用，可作為糖皮質(zhì)激素的滲透促進(jìn)劑，在皮膚局部形成藥物蓄積效應(yīng)，增加藥物在皮膚中的滯留，有助于使活性物質(zhì)在病灶部位保持較高濃度，利于發(fā)揮藥效，降低不良反應(yīng)，有望開發(fā)成為地奈德新型局部給藥制劑。

[1] 孫建方,鄭志忠,顧 軍,等.0.05%地奈德乳膏治療濕疹的多中心隨機(jī)雙盲、對(duì)照研究[J].中華皮膚科雜志,2006,39(1):26-28.

[2] 程 穎.0.05%地奈德乳膏治療嬰幼兒濕疹的療效觀察[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志,2012,11(6):370-371.

[3] Sandra B.Lopes，J.M. Sarraguca, J.A.V.Prior,et al. Development of an HPLC Assay Methodology for a Desonide Cream with Chemometrics Assisted Optimization[J]. Analytical Letters,2012,45(7):1390-1400.

[4] 高效液相色譜法.中國(guó)藥典二部[S].2010:附錄VD.

[5] 張星一. 透皮吸收促進(jìn)劑在經(jīng)皮給藥系統(tǒng)中的質(zhì)控和評(píng)價(jià)方法[J].中國(guó)新藥雜志,2010,19(4):273-276.

Study on preparation and percutaneous penetration of Desonide aqueous gel

LUFuyong1，WUSanqing2，XIONGAimin1，LIZandong1，MINGHaixia1,YINZhong1，QIUGangfeng2

(1NanxishanHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Guilin,Guangxi541002,China; 2BiochemicalCenterofShenzhenUniversity,Shenzhen,Guangdong518057,China)

Objective To develop the Desonide aqueous gel, and establish its quality control method, then observe the in vitro percutaneous absorption properties. Methods The gel was prepared, using Desonide as the main drug. The gel's stability was observed, and the content of Desonide was detected by High performance liquid chromatography (HPLC). Using improved Franz diffusion cell, and isolated rabbit skin as transdermal model, HPLC was chose to detect the concentration of Desonide in percutaneous absorption liquid and Desonide retained in the skin. Results The preparation has good stability, the average recovery rate of Desonide in the gel is 98.5%-101.3%. Under the condition of in vitro, the amount of drug retention were 1.87 times that of the control emulsifiable paste. Conclusion The preparation of Desonide gel can significantly increase the retention of the drug in the skin, is expected to become the Desonide local to the new preparation.

Desonide；Gel；Quality control；Transdermal

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳科研課題(編號(hào)：Z2014186)

R 914.2

A

1673-6575(2017)02-0183-04

10.11864/j.issn.1673.2017.02.07

2016-12-29

2017-02-26)

*通信作者