魯北地區(qū)豬瘟疫苗免疫血清抗體測(cè)定及分析

魏 鳳，張文通，李 峰，沈志強(qiáng)，

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

魯北地區(qū)豬瘟疫苗免疫血清抗體測(cè)定及分析

魏 鳳1，張文通2，李 峰1，沈志強(qiáng)1，2

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的，以淋巴結(jié)周邊出血、脾臟邊緣出血性梗死、回盲部淋巴紐扣狀腫和腎臟密集點(diǎn)狀出血等為特征性病理變化的豬的重大傳染病[1-2]。CSF被國際動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為A類動(dòng)物傳染病，我國將其列為一類動(dòng)物傳染病。目前，盡管豬瘟疫苗已普及使用，但在本單位接診的病例中仍檢測(cè)到比較高比例的豬瘟病毒[3-4]。因此豬瘟仍是危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的最重要傳染病。合格的豬瘟疫苗，已被公認(rèn)能夠較好預(yù)防豬瘟病毒。但豬瘟病毒仍大量發(fā)生，豬瘟疫苗免疫情況存疑。為弄清楚魯北地區(qū)豬瘟疫苗免疫效果情況，對(duì)2016年濱州畜牧獸醫(yī)研究院門診部收集的1 902份豬血清進(jìn)行檢測(cè)及分析，其目的是獲得該區(qū)域豬瘟疫苗免疫效果情況，為防控本區(qū)域CSF提供科學(xué)參考。

1 材料和方法

1.1 材料

豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒購自武漢科前動(dòng)物生物制品有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血液采集及血清分離 血液采集方法：所有采集血液的豬場或散養(yǎng)戶均免疫豬瘟疫苗（或免疫豬瘟脾淋苗或免疫豬瘟細(xì)胞毒苗），且在免疫3周后采集血液。采集的豬均為保育階段仔豬。

為便于統(tǒng)計(jì)與分析將血液來源豬場按規(guī)模分為4種類型：散養(yǎng)戶、小型養(yǎng)豬場、中型養(yǎng)豬場及大型養(yǎng)豬場。其中散養(yǎng)戶為年出欄商品豬100頭以下；小型養(yǎng)豬場為年出欄商品豬1 000頭以下；中型養(yǎng)豬場為年出欄商品豬5 000頭以下；大型養(yǎng)豬場為年出欄商品豬5 000頭以上。散養(yǎng)戶每戶采集6份血液，小型養(yǎng)豬場每個(gè)豬場采集15份血液，中型養(yǎng)豬場和大型養(yǎng)豬場每個(gè)豬場均采集30份血液。

血清分離：采用頸部靜脈采集，血液37℃放置1 h，4℃靜置過夜；4 000 r/min離心10 min。

1.2.2 血清ELISA抗體測(cè)定 按照豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說明書對(duì)收集的1 902份血清進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 豬瘟脾淋苗免疫ELISA抗體測(cè)定結(jié)果

所采血清的豬場均來自豬瘟脾淋苗豬場。按照豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)：ELISA（S/P值）大于0.17為免疫合格（血清ELISA抗體S/P值大于或等于0.17，相當(dāng)于豬瘟正向間接血凝抗體大于或等于25）。表1結(jié)果顯示，大型和中型養(yǎng)豬場CSFV ELISA抗體免疫合格的豬場數(shù)較高，分別達(dá)91.7%和70.0%；而小型養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶CSFV免疫合格豬場數(shù)較低，分別為50.0%和33.3%。大型養(yǎng)豬場血清總免疫合格率為85.0%；而中型養(yǎng)豬場、小型養(yǎng)豬場及散養(yǎng)戶總免疫合格率分別為56.3%、42.0%、45.6%。

表1 豬瘟脾淋苗免疫血清ELISA抗體測(cè)定結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.2 豬瘟細(xì)胞毒苗免疫ELISA抗體測(cè)定結(jié)果

所采血清的豬場均來自豬瘟細(xì)胞毒苗豬場。試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)如2.1中所述。表2結(jié)果顯示，大型和中型養(yǎng)豬場CSFV ELISA抗體免疫合格的豬場數(shù)較高，分別達(dá)91.7%和83.3%；而小型養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶CSFV免疫合格豬場數(shù)較低，分別為 57.1%和50.0%。大型養(yǎng)豬場和中型養(yǎng)豬場血清總免疫合格率分別為93.9%和87.2%；而小型養(yǎng)豬場及散養(yǎng)戶總免疫合格率分別為53.8%、54.2%。

表2 豬瘟細(xì)胞毒苗免疫血清ELISA抗體測(cè)定結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3 分析與討論

本單位門診2016年接診來自魯北區(qū)域豬病病例403例，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)到豬瘟野毒病例108例，比例為26.8%。這說明本區(qū)域豬瘟仍在不同程度的流行。為弄清楚豬瘟野毒發(fā)生率如此高的原因，對(duì)本區(qū)域免疫豬瘟疫苗的不同規(guī)模豬場免疫效果情況進(jìn)行調(diào)查。

現(xiàn)在市售豬瘟疫苗主要有豬瘟脾淋苗和豬瘟細(xì)胞毒疫苗，因此在檢測(cè)時(shí)特別區(qū)分了兩種疫苗。并且還對(duì)不同規(guī)模豬場免疫豬瘟疫苗情況檢測(cè)時(shí)進(jìn)行了細(xì)分。從檢測(cè)結(jié)果看，不論是用脾淋苗還是細(xì)胞毒苗大型和中型豬場免疫效果均優(yōu)于小型養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶。從實(shí)際檢測(cè)豬場數(shù)或總血清數(shù)，豬瘟細(xì)胞毒苗稍優(yōu)于豬瘟脾淋苗。

在上述檢測(cè)結(jié)果的基礎(chǔ)上對(duì)免疫不合格的豬場進(jìn)行了詳細(xì)調(diào)查，并收集了12種豬瘟疫苗（其中豬瘟脾淋苗6種、豬瘟細(xì)胞毒苗6種）。對(duì)這12種豬瘟疫苗進(jìn)行了效力檢驗(yàn)（測(cè)疫苗種兔體感染量）發(fā)現(xiàn)，4種豬瘟脾淋苗和1種豬瘟細(xì)胞毒苗不合格。這說明豬瘟免疫失敗疫苗不合格是一個(gè)重要原因，但不是唯一原因。

該課題的研究結(jié)果提示魯北養(yǎng)豬行業(yè)在豬瘟防疫過程中，一方面要選擇合格豬瘟疫苗，另一方面要正確使用豬瘟疫苗。

[1]單虎，李明義，沈志強(qiáng)．現(xiàn)代獸醫(yī)獸藥大全[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2011：304-307．

[2]蔡寶祥主編．家畜傳染病學(xué)[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1999：147-151．

[3]蔡奕琪，朱燕秋，王悅彬．2001—2008年豬瘟抗體和豬瘟病毒監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J]．養(yǎng)豬，2009（3）：73-74．

[4]楊慧君．淺談豬瘟流行新特點(diǎn)與防治措施[J]．農(nóng)業(yè)科技與信息，2009（3）：5．

（編輯：郭玉翠）

中國科學(xué)家用活病毒創(chuàng)造疫苗

【香港《南華早報(bào)》網(wǎng)站12月2日?qǐng)?bào)道】題：中國科學(xué)家的突破敲響了致命病毒的喪鐘嗎？

中國科學(xué)家或許已經(jīng)找到了創(chuàng)造有效疫苗對(duì)付世界最致命病毒的關(guān)鍵—通過打破傳統(tǒng)疫苗學(xué)的兩種禁忌。北京大學(xué)一個(gè)科研團(tuán)隊(duì)開展的研究被贊為疫苗領(lǐng)域的“革命”。研究論文周五刊登在美國《科學(xué)》周刊上。該團(tuán)隊(duì)打破疫苗研究領(lǐng)域的兩大禁忌：先是用具備完全感染力的活病毒創(chuàng)造一種疫苗，然后把疫苗注入感染這種病毒的瀕死動(dòng)物體內(nèi)。論文說，這些動(dòng)物在接受注射之后都徹底痊愈。這項(xiàng)突破有望簡化疫苗的研發(fā)過程，幫助科學(xué)家在疫情暴發(fā)幾周內(nèi)就得到有效的疫苗甚至療法，以對(duì)付禽流感、非典、埃博拉和艾滋病等各類病毒。研究人員調(diào)整活病毒的遺傳密碼，使病毒株的自我復(fù)制機(jī)制失效。但是，他們保留了病毒的感染力，從而使宿主細(xì)胞生成免疫力。使用具有完全感染力的活病毒之前被視為一種禁忌，因?yàn)椴《緯?huì)迅速傳播。目前廣泛銷售和使用的疫苗通常含有的病毒要么已死要么毒性微弱。獲準(zhǔn)臨床使用的活病毒疫苗通常都經(jīng)過結(jié)構(gòu)上的處理，使得毒性減弱，但這影響了疫苗的效力。此外，很多致命的病毒都沒有相應(yīng)的疫苗。

這項(xiàng)研究的帶頭人、北京大學(xué)藥學(xué)院教授周德敏說，此前，研究界與病毒的斗爭是一場必?cái)≈畱?zhàn)。他說：“現(xiàn)在我們有了新的武器……能夠消滅幾乎任何一種病毒及其變體。這可以改變這場戰(zhàn)斗?！?/p>

據(jù)《科學(xué)》周刊稱，周的團(tuán)隊(duì)開展了三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，用活體禽流感病毒制作疫苗。他們對(duì)小鼠、雪貂和豚鼠使用了這種疫苗，它們都產(chǎn)生了免疫力。

分析還顯示，這種人造病毒與野生病毒重組，從而使生成的病毒不能自我復(fù)制。

周說：“這不僅是一種疫苗，也是一種藥物?！边@種疫苗使用的禽流感病毒與天然禽流感病毒有99%以上的相似度。

周的研究團(tuán)隊(duì)僅僅調(diào)整了病毒DNA的3個(gè)堿基—病毒通常有幾十萬個(gè)這種堿基。

病毒需要食物才能存活，而氨基酸就是食物的一個(gè)來源。野生病毒幾乎任何氨基酸都吃，但周德敏團(tuán)隊(duì)培育的基因經(jīng)修改的病毒卻只接受一種特定形式的氨基酸。這種非天然的氨基酸只能在實(shí)驗(yàn)室里制造，動(dòng)物或人體內(nèi)都不存在。周說：“所以，把這些病毒注入宿主體內(nèi)以后，因?yàn)槿鄙伲ㄟm合的）氨基酸，它們就無法自我復(fù)制，最終會(huì)‘餓’死?！敝艿膱F(tuán)隊(duì)在人造細(xì)胞系里制造這些病毒，細(xì)胞里充滿了非天然的氨基酸。病毒隨后將在這些人造細(xì)胞里大量自我復(fù)制。

假設(shè)疫情暴發(fā)，研究人員可以迅速從患者體內(nèi)分離出未知的病毒株，修改病毒的3個(gè)堿基，然后用這種基因經(jīng)修改的病毒生產(chǎn)疫苗提供給公眾。這一切只需幾周就可實(shí)現(xiàn)。

疫苗還可以注射給已感染病毒的患者。

周說：“副作用非常小，接種者幾乎沒有感覺?！彼f，他相信這項(xiàng)技術(shù)“很快”就將造?；颊?。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2016-12-03）

S858.285.3

A

1002-1957(2017)02-0116-02

2017-01-19

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（SDAIT -08-17）

魏 鳳（1979-），女，河南遂平人，助理研究員，碩士，主要從事獸用生物制品研究工作.E-mail：hzndzwt1@163.com