禽大腸桿菌和沙門氏菌混合感染的診斷

賈國勇

(青海省海南州畜牧獸醫(yī)工作站,青海海南 813099)

禽大腸桿菌和沙門氏菌混合感染的診斷

賈國勇

(青海省海南州畜牧獸醫(yī)工作站,青海海南 813099)

利用采自貴德縣清源土雞場發(fā)病雞的病料，通過細菌的分離培養(yǎng)鑒定和藥敏試驗對病原體、診斷與治療進行了研究。結果：分離出大腸桿菌、沙門氏菌各1株。大腸桿菌對頭孢曲松與頭孢噻肟中度敏感；沙門氏菌對頭孢曲松、丁胺卡那中度敏感；對頭孢噻肟、慶大霉素、安普霉素、多西環(huán)素敏感。

大腸桿菌 沙門氏菌 藥敏試驗

2016年10月，貴德縣清源土雞場，患雞突然出現(xiàn)精神沉郁，呆立，垂頭縮頸，兩翅下垂，羽毛松亂，食欲減少，飲欲增加。剖檢發(fā)現(xiàn)肝臟表面有纖維素性滲出，肝臟表面散在有針尖大小壞死灶，氣囊渾濁，腎臟蒼白?；茧u多為15～30日齡，死亡率30%。經藥物治療無效，為確定其病因，我們進行了病原的分離培養(yǎng)鑒定和藥敏試驗?，F(xiàn)將實驗結果報告如下。

1 材料及方法

1.1 主要試劑

MH培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂、SS瓊脂、生培養(yǎng)基均購自杭州天和微生物試劑有限公司。藥敏紙片購于北京天壇藥業(yè)生物技術開發(fā)公司。

1.2 細菌的分離培養(yǎng)

將病死雞的肝臟、肺臟，分別劃線接種于麥康凱瓊脂平板和SS瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)18～24h，挑取麥康凱瓊脂平板上紅色菌落接種于伊紅亞甲藍平板，37℃培養(yǎng)18～24h。對伊紅亞甲藍平板疑似大腸桿菌的菌落和SS平板上疑似沙門氏菌菌落進行純化。分別挑取純培養(yǎng)，進行革蘭氏染色并進行形態(tài)及染色特性觀察。

1.3 生化鑒定

將分離疑似沙門氏菌菌株接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)矛醇、尿素、硫化氫、枸櫞酸鹽、蛋白胨水和葡萄糖蛋白胨水等培養(yǎng)基中，置于37℃溫箱培養(yǎng)，每日觀察。將符合大腸桿菌形態(tài)特征的細菌接種于蔗糖、水楊酸、D-木糖、硫化氫、衛(wèi)矛醇、乳糖、麥芽糖、L-阿拉伯糖、甘露醇、間-肌醇、尿素酶、七葉苷水解、葡萄糖、山梨醇、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、枸櫞酸鹽、明膠液化等培養(yǎng)集中。

1.4 分離菌藥物敏感性試驗

用接種環(huán)于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上挑取分離純化的大腸桿菌菌落4～5個，接種于3～5mlLB液體培養(yǎng)基中。37℃培養(yǎng)12h，用生理鹽水稀釋至與0.5麥氏標準比濁管濁度相同的濃度。在15min內，用貼無菌棉簽蘸取菌液，并在管壁上擠去多余的菌液后均勻涂布于M-H瓊脂平板上，待干。用無菌鑷子夾取不同藥敏紙片，按一定間隔在平板的不同區(qū)域，即兩紙片間距不小于24mm，紙片距平板邊緣不小于15mm，37℃溫箱培養(yǎng)24h觀察結果[1，2]。沙門氏菌藥敏試驗同大腸桿菌。試驗選取藥敏片：阿莫西林、氨芐西林、頭孢曲松、頭孢噻肟、丁胺卡那、慶大霉素、安普霉素、多西環(huán)素、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩諾沙星、紅霉素。

2 試驗結果

2.1 菌落形態(tài)及染色結果

分離菌在麥康凱培養(yǎng)基上菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑濕潤。另一種菌落為圓形、微凸、光滑濕潤、無色半透明中間呈黑色、邊緣整齊、中等大小的菌落。將菌落轉接在伊紅亞甲藍培養(yǎng)基上菌落呈紫黑色，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，常有金屬光澤。革蘭氏染色為陰性的散在小桿菌。在SS培養(yǎng)基上形成無色透明，圓形、微凸、光滑濕潤、邊緣整齊菌落。革蘭氏染色為陰性散在的小桿菌。

2.2 生化鑒定結果

采取病料，在實驗室做了生化試驗，結果詳見表1和表2。

2.3 藥敏試驗結果

對分離菌做了藥敏試驗，結果詳見表3。

由表3可知該次試驗分離的大腸桿菌對于阿莫西林、氨芐西林、慶大霉素、安普霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、磷霉素、氟苯尼考高度耐藥，對于多西環(huán)素、紅霉素、丁胺卡那耐藥，對于頭孢曲松、頭孢噻肟中度敏感。沙門氏菌高度耐受的藥物有阿莫西林、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩諾沙星、紅霉素。沙門氏菌對于氨芐西林耐藥，對于頭孢曲松、丁胺卡那中度敏感，對于頭孢噻肟、慶大霉素、安普霉素、多西環(huán)素敏感。

3 結語

通過實驗室診斷可以確診該雞場是由于大腸桿菌與沙門氏菌混合感染所導致的疾病。藥敏試驗顯示大腸桿菌與沙門氏菌均對于頭孢噻肟、頭孢曲松敏感，所以臨床治療可選用頭孢曲松或頭孢噻肟用于該病的治療。

近幾年通過藥物預防和治療沙門氏菌所引起的雞白痢、雞傷寒、雞副傷寒等疾病已經得到了有效的控制，但是2016年下半年以來沙門氏菌致病現(xiàn)象有增加的趨勢[3]。通過藥敏試驗發(fā)現(xiàn)沙門氏菌耐藥性有強的趨勢，這種現(xiàn)象的發(fā)生與臨床上抗生素濫用有一定的關系。

表1 疑似大腸桿菌鑒定結果

表2 疑似沙門氏菌鑒定結果

表3 藥敏試驗抑菌圈直徑（mm）

[1] 陳前進，郭維植，曹春遠，等.5株產硫化氫大腸桿菌0157的分離鑒定[J].中國人獸共患病雜志，2004，20（1）：74-75.

[2] 陳鮮花，李躍龍，余永鵬，等.廣東雞致病性大腸桿菌對氟哇諾酮類藥物的敏感性分析[J].中國獸藥雜志，2004，38（11）：10-12.

[3] 黨如意，張淑霞.兩種雞大腸桿菌油乳劑滅活苗對雛雞免疫效果的比較[J].西北農業(yè)學報，2003，11（1）：111-113.