商品肉雞禽流感疫苗不同免疫程序免疫效果觀察

黃西梅李佳榮駱榮彪譚福林李子橋

(1.廣西百色市右江區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,廣西百色 533000; 2.百色農(nóng)業(yè)學(xué)校,廣西百色 533000; 3.百色市右江區(qū)陽(yáng)圩鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站,廣西百色 533000)

商品肉雞禽流感疫苗不同免疫程序免疫效果觀察

黃西梅1李佳榮2駱榮彪1譚福林1李子橋3

(1.廣西百色市右江區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,廣西百色 533000; 2.百色農(nóng)業(yè)學(xué)校,廣西百色 533000; 3.百色市右江區(qū)陽(yáng)圩鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站,廣西百色 533000)

為了探索目前右江區(qū)使用的兩種劑型的禽流感疫苗即重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)疫苗（Re-6株+Re-8株）和禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rlH5-6株）采用不同方式進(jìn)行接種免疫，機(jī)體產(chǎn)生抗體的情況，本研究以本地商品肉雞為對(duì)象，制定了5種不同的免疫程序進(jìn)行禽流感免疫，采集試驗(yàn)雞30、45、65、85、105日齡的血清進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)，通過(guò)對(duì)免疫抗體合格率和抗體效價(jià)的分析和比較，評(píng)價(jià)兩種疫苗的免疫效果。結(jié)果顯示，禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rlH5-6株）單獨(dú)使用于商品肉雞，免疫2次，抗體效價(jià)低于4log2；而重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)疫苗（Re-6株+Re-8株）單獨(dú)使用于商品肉雞，免疫2次，免疫后30天抗體效價(jià)達(dá)9.64，免疫合格率達(dá)100%。兩種疫苗交叉使用，免疫后30天抗體效價(jià)達(dá)8.04，合格率達(dá)96.00 %；單獨(dú)使用同種疫苗，二免效果優(yōu)于一免效果。

疫苗 免疫方式 免疫效果

世界衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的A類(lèi)傳染病中，禽類(lèi)烈性傳染病只有兩種，分別是禽流感和新城疫，目前禽流感和新城疫的防控工作的主要途徑和有效手段仍然是接種疫苗，在什么時(shí)間接種何種疫苗，用什么免疫方法才能提高抗體水平，一直是獸醫(yī)工作者和養(yǎng)殖戶(hù)關(guān)注的問(wèn)題，重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)疫苗（Re-6株+Re-8株）和禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rlH5-6株）都是政府采購(gòu)苗，也是養(yǎng)殖戶(hù)普遍使用的疫苗。右江區(qū)常年雞存欄有250萬(wàn)左右，年出欄雞有1000多萬(wàn)羽。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大和禽類(lèi)交易活動(dòng)的日益頻繁，禽類(lèi)受禽流感和新城疫的威脅越來(lái)越大，為探索適合右江區(qū)氣候和飼養(yǎng)特點(diǎn)的免疫程序，選擇優(yōu)質(zhì)疫苗，找出免疫失敗的原因，提高免疫效果和技術(shù)水平，確保公共安全和畜牧業(yè)的健康發(fā)展。我們于2016年7月至11月在百色農(nóng)校的試驗(yàn)場(chǎng)的300只雞分成五個(gè)試驗(yàn)組，一個(gè)對(duì)照組。分別進(jìn)行禽流感H5亞型二價(jià)疫苗（Re-6株+Re-8株）和禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rlH5-6株），用不同免疫方式免疫注射，采集雞30、45、65、85、105日齡的血清，用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)進(jìn)行抗體檢測(cè)，掌握不同免疫方式，禽流感疫苗免疫機(jī)體抗體產(chǎn)生情況，為制定適合右江區(qū)養(yǎng)雞特點(diǎn)的禽流感免疫程序提供參與依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)雞

在農(nóng)校實(shí)驗(yàn)雞場(chǎng)選擇未接種禽流感疫苗的健康商品肉雞300只，隨機(jī)分成6個(gè)組，每組50只，設(shè)一個(gè)對(duì)照組和5個(gè)試驗(yàn)組。按正常飼喂方式，由專(zhuān)人飼養(yǎng)管理。

1.1.2 免疫疫苗

禽流感H5亞型二價(jià)疫苗（Re-6株+Re-8株），由乾元浩生物股份有限公司鄭州生物制藥廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：2016036，有效期：20170317；禽流感-新城疫二聯(lián)疫苗（rlH5-6株），由哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：2016013，有效期：20170320；

1.1.3 器材

微量移液器、一次性96孔V型血凝板、微量振蕩器、1%紅血球、滅菌生理鹽水、被檢血清。

1.1.4 診斷試劑

禽流感病毒H5亞型（Re-6株）血凝抑制抗原和陽(yáng)性血清，由哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)，抗原批號(hào)：2015024，有效期2年，陽(yáng)性血清批號(hào)：2015017，有效期：2年。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組及免疫接種

對(duì)選擇的健康雞隨機(jī)分成5組，分別為A、B、C、D、E、F組，每組50羽，五個(gè)試驗(yàn)組，一個(gè)對(duì)照組，免疫程序詳見(jiàn)表1。

表1 不同組別的免疫方式

1.2.2 血清采集

無(wú)菌采集試驗(yàn)雞30、45、65、85、105日齡的血樣，所有雞群選擇翅膀內(nèi)側(cè)靜脈穿刺采血，每組采集25份，6次不同日齡共采集900份，每羽雞采血2～3ml左右，室溫靜置24h后分離血清，待用于檢測(cè)抗體。

1.2.3 抗體檢測(cè)

（1）抗體檢測(cè)方法：采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)，嚴(yán)格按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）的操作方法對(duì)采集的樣品進(jìn)行禽流感H5亞型抗體檢測(cè)。首先用血凝試驗(yàn)檢測(cè)禽流感抗原的血凝結(jié)，然后配制4單位抗原待用，無(wú)菌采集公雞血10毫升，按常規(guī)方法配制1%的紅血球待用。

結(jié)果判定：根據(jù)GB/T18936-2003《高致病性禽流感診斷技術(shù)》制定的檢驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行判定，H5亞型禽流感HI抗體效價(jià)≥5log2（滴度1：32以上）為免疫合格。

2 檢測(cè)結(jié)果及分析

本次試驗(yàn)分別采集30、45、65、85、105日齡的雞血清900份，采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)進(jìn)行禽流感和新城疫抗體檢測(cè)，不同組，不同日齡階段檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 H5亞型禽流感抗體合格率和抗體效價(jià)（%、log2）

表3 H5亞型禽流感抗體效價(jià)趨勢(shì)圖

（1）試驗(yàn)A、B組在分別用禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗免疫1次和2次，結(jié)果產(chǎn)生的禽流感抗體的合格率和抗體效價(jià)比較低，盡管是二免比一免高，但最高只有二免后65日齡抗體合格率和效價(jià)分別為44.0%、3.40，達(dá)不到國(guó)家對(duì)禽流感免疫抗體合格率達(dá)70%的要求。這一結(jié)果與曹立輝等[1]的報(bào)道有一致之處。據(jù)有關(guān)資料報(bào)道，禽流感最低保護(hù)臨界值4log2-6log2 之間，且必須大于4log2[2]。如果雞群禽流感抗體水平長(zhǎng)期低于4log2就不實(shí)現(xiàn)有效保護(hù)。而據(jù)楊飛燕等[3]報(bào)道，禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗的新城疫免疫效果要比禽流感的免疫效果好，使用H5-ND15一免、30日齡二免后45天新城疫抗體合格率和效價(jià)達(dá)峰值100%和7.3log2，禽流感的抗體效價(jià)低于4log2。原因可能是H5-ND二聯(lián)苗是將表達(dá)禽流感H5亞型病毒抗原性的禽流感病毒基因片斷插入雞新城疫Lasota系弱毒毒株的基因鏈中，使其在表達(dá)雞新城疫病毒抗原性的同時(shí)表達(dá)禽流感H5亞型病毒的抗原性。它所刺激雞體產(chǎn)生的針對(duì)禽流感H5亞型病毒的抗體是由經(jīng)重組的雞新城疫Lasota弱毒株在雞體內(nèi)復(fù)制過(guò)程中附帶產(chǎn)生的。因此，禽流感抗體的產(chǎn)生容易受雞新城疫抗體的影響。也是使用H5-ND二聯(lián)苗時(shí)新城疫抗體水平高于禽流感抗體水平的原因。這也是這種疫苗的優(yōu)勢(shì)所在。

另外，有研究以雞痘病毒為載體表達(dá)H5亞型禽流感基因的重組疫苗接種SPF的試驗(yàn)結(jié)果也有類(lèi)似情形，即免疫后抗體水平較低的情況下仍然使機(jī)體產(chǎn)生對(duì)強(qiáng)毒攻擊的抵抗力[4]，禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗是否也存在這種情況未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道?；趯?shí)驗(yàn)室條件，不能開(kāi)展強(qiáng)毒攻擊保護(hù)實(shí)驗(yàn)，故不能排除這種可能。其他具體原因有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

（2）C組15日齡時(shí)用禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗免疫一次，35日齡用重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)疫苗（Re-6株+Re-8株）免疫。結(jié)果首免到30日齡時(shí)，由于機(jī)體內(nèi)不能產(chǎn)生體液免疫，禽流感抗體一直處于下降的狀態(tài)，抗體的合格率維持在0的水平、但在雞體內(nèi)產(chǎn)生免疫記憶，使用重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)疫苗（Re-6株+Re-8株）后10天，機(jī)體產(chǎn)生抗體較快，45日齡抗體合格率和效價(jià)分別已達(dá)到80.00、6.00，65日齡達(dá)最高96.00、8.04，之后一直維持較高水平。到105日齡處于保護(hù)期內(nèi)。

（3）D、E組是用重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)疫苗（Re-6株+Re-8株）免疫1次和2次，結(jié)果顯示同一種苗兩次免疫后、抗體水平都比一次免疫的高。特別是重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)疫苗（Re-6株+Re-8株），二次免疫后30天抗體合格率達(dá)100%，并能維持到105日齡。這也符合了滅活苗具有穩(wěn)定及誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體水平均一的特點(diǎn)。

3 結(jié)語(yǔ)

（1）A組兩次禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗免疫后，抗體效價(jià)低于4log2，可見(jiàn)單獨(dú)用禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗免疫本地商品肉雞的禽流感免疫效果不佳。

（2）如果使用H5-ND二聯(lián)苗做基礎(chǔ)免疫，最好配合使用重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)疫苗，間隔時(shí)間20d左右，以確保禽流感抗體水達(dá)到有效保護(hù)。

（3）禽流感滅活苗比禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗效果好。在禽流感威脅較大的情況下，建議使用重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)疫苗（Re-6株+Re-8株）進(jìn)行免疫，以取得安全有效的免疫效果。

（4）疫苗實(shí)施2次免疫比1次免疫效果要好，不僅抗體提高免疫質(zhì)量和合格率，抗體水平下降緩慢且維持較長(zhǎng)的時(shí)間，雞群具有較高較長(zhǎng)的抗病能力。建議在做好禽流感首免的基礎(chǔ)上，及時(shí)加強(qiáng)二次免疫，確保免疫合格率在70%以上。

[1] 曹立輝，盧冬梅，李秀英等.禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rlH5-6株）對(duì)商品肉雞的免疫效果觀察（[J].中國(guó)家禽，2011，33（4）：61-62.

[2] 吳庭才，張春杰，郭務(wù)鵬等.禽流感母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律和免疫保護(hù)抗體臨界值的測(cè)定 [J].廣東畜牧獸醫(yī)科技，2007.32（3）：24-28.

[3] 楊飛燕，劉穎，張廉等.禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗與重組禽流感滅活疫苗組合免疫效果觀察[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2015，32（1）：74-77.

[4] 賈立軍，張艷梅，李軍偉等.H5亞型禽流感重組雞痘病毒載體疫苗的免疫效力 [J].揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2003.24（2）：11-13.