超聲波輔助提取刺芫荽黃酮條件的優(yōu)化

高波++胡洪瑞++李河++全舒舟

摘要：采用超聲波提取法對(duì)刺芫荽（Eryngium foetidum L.）中總黃酮進(jìn)行提取，通過(guò)單因素及正交試驗(yàn)，確定最佳提取條件。結(jié)果顯示，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，刺芫荽總黃酮的提取量增大，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)超過(guò)70%后提取量下降；總黃酮提取量隨超聲提取時(shí)間的延長(zhǎng)而呈上升趨勢(shì)，當(dāng)超聲時(shí)間超過(guò)30 min后提取量下降；總黃酮提取量隨料液比的減小而增大，當(dāng)料液比達(dá)1 g ∶35 mL時(shí)，增加幅度明顯減緩，1 g ∶40 mL時(shí)提取量達(dá)到最大。通過(guò)正交試驗(yàn)得出，刺芫荽總黃酮提取量影響因素的順序?yàn)橐掖俭w積分?jǐn)?shù)>超聲時(shí)間>料液比，最佳提取工藝是乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%，超聲時(shí)間為30 min，料液比為1 g ∶35 mL，刺芫荽總黃酮含量為25.33 mg/g。

關(guān)鍵詞：刺芫荽；黃酮；超聲波；正交試驗(yàn)

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002-1302（2017）06-0175-03

刺芫荽（Eryngium foetidum L.）為傘形科（Umbelliferae）2年生或多年生草本植物，別稱(chēng)刺芹、野芫荽、緬芫荽、阿佤芫荽，主要分布于廣東、廣西及云南德宏、臨滄、西雙版納等熱帶、亞熱帶地區(qū)；刺芫荽具有特殊的香味，是傣族、景頗族、佤族群眾喜愛(ài)的調(diào)味料；刺芫荽還具有驅(qū)風(fēng)清熱、健胃、行氣消腫、止痛的功效，可用于治療風(fēng)寒感冒、胸痛、胃寒呃逆、消化不良、腸炎腹瀉、跌打腫痛、急性傳染性肝炎、糖尿病、蛇傷等傷病[1-3]。黃酮類(lèi)化合物是廣泛存在于植物中的一類(lèi)次生代謝產(chǎn)物，具有抗氧化、降膽固醇、降血糖、調(diào)血脂、抗血栓、抑制心肌肥厚、改善血液循環(huán)、促進(jìn)胰島素分泌、改善糖尿病引起的視網(wǎng)膜病及毛細(xì)血管脆化等療效，還具有抑菌消炎、抑制炎性生物酶的滲出、增進(jìn)傷口愈合和止痛、抗癌、防癌、增強(qiáng)免疫力和延緩衰老等作用[4-7]。有關(guān)超聲波輔助刺芫荽總黃酮提取的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，本研究采用超聲波輔助乙醇提取刺芫荽的黃酮類(lèi)化合物，并通過(guò)單因素及正交試驗(yàn)對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化，旨在為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)刺芫荽總黃酮提供技術(shù)參考。

1材料與方法

1.1儀器、試劑及材料

材料：刺芫荽采自紅河學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)實(shí)習(xí)實(shí)訓(xùn)基地。儀器：752型可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）、超聲波清洗機(jī)（深圳市潔盟清潔設(shè)備有限公司）、賽多利斯電子天平（塞多利斯儀器北京有限公司制造）等。試劑：蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等，以上試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純（AR）。

1.2方法

1.2.1刺芫荽總黃酮含量測(cè)定在黃酮類(lèi)化合物溶液中加入鋁離子試劑后，酮類(lèi)化合物中的酚羥基與Al3+生成有色絡(luò)合物，在控制適宜的pH值條件下，生成的絡(luò)合物在可見(jiàn)區(qū)有特征吸收峰，其質(zhì)量濃度與吸光度符合比耳定律，而其顏色的深淺與黃酮類(lèi)化合物的量又呈一定的比例關(guān)系，據(jù)此可測(cè)定樣品中總黃酮的含量[8]。

精密稱(chēng)取干燥至恒質(zhì)量的蕓香苷對(duì)照品10 mg，置于 50 mL 容量瓶中，先加30 mL濃度為30%乙醇在水浴鍋加熱使其溶解，再定容至刻度，制成濃度為0.200 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于7支25 mL容量瓶中，分別加入1 mL 5% NaNO2搖勻，放置6 min后加入1 mL 10% Al（NO3）3搖勻，放置6 min再加入10 mL 4% NaOH溶液，混勻，用濃度為30%的乙醇稀釋至刻度。10 min 后以空白液為參比，調(diào)0調(diào)100后在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)波長(zhǎng)510 nm處測(cè)得不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度（y）為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=13.397x+0.001 9，r2=0.991 9。

準(zhǔn)確吸取1 mL的刺芫荽待測(cè)提取液于25 mL容量瓶中，按上述制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法進(jìn)行操作，分別比色測(cè)定其吸光度，再按下列公式計(jì)算出黃酮含量。

總黃酮（mg/g）=（C×V1×V2）/（m×V3）。

式中：C為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的供試品液質(zhì)量濃度（mg/mL）；V1為提取定容體積（mL）；V2為顯色反應(yīng)定容體積（mL）；m為樣品質(zhì)量（g）；V3為顯色反應(yīng)取樣體積（mL）[9]。

1.2.2影響刺芫荽總黃酮超聲提取的單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.2.1乙醇體積分?jǐn)?shù)精密稱(chēng)取0.5 g刺芫荽粉末，在料液比1 g ∶30 mL、提取時(shí)間30 min的條件下，分別在超聲波清洗槽中加入體積分?jǐn)?shù)為30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇，超聲波輔助提取刺芫荽總黃酮，提取液過(guò)濾，定容到 50 mL，按照“1.2.1”節(jié)的方法測(cè)其吸光度，分別計(jì)算出黃酮的含量。

1.2.2.2料液比精密稱(chēng)取0.5 g刺芫荽粉末，在乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、提取時(shí)間30 min的條件下，分別設(shè)置1 ∶20、1 ∶25、1 ∶30、1 ∶35、1 ∶40、1 ∶45（g ∶mL）等不同料液比，超聲波輔助提取刺芫荽總黃酮，提取液過(guò)濾，定容到50 mL，按照“1.2.1”節(jié)的方法測(cè)其吸光度，分別計(jì)算出黃酮的含量。

1.2.2.3提取時(shí)間精密稱(chēng)取0.5 g刺芫荽粉末，在乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、料液比1 g ∶30 mL的條件下，分別超聲提取10、15、20、25、30、35 min，提取液過(guò)濾，定容到50 mL，按照“1.2.1”節(jié)的方法測(cè)其吸光度，分別計(jì)算出黃酮的含量。

1.2.3影響刺芫荽總黃酮超聲提取的多因素正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、超聲時(shí)間3個(gè)因素，以黃酮提取量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上各因素分別選擇3個(gè)水平加入正交試驗(yàn)（表1）。

1.2.4數(shù)據(jù)處理采用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，對(duì)正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行F檢驗(yàn)[10]。