多肉植物十二卷花影壽離體快繁技術(shù)研究

楊 娟 俞愛軍 周 燕 張睿婧 孫蓮蓮 張冬菊 吳月琴 李春丹

(上海種業(yè)（集團(tuán)）有限公司，上海市松江區(qū) 201615)

多肉植物十二卷花影壽離體快繁技術(shù)研究

楊 娟 俞愛軍 周 燕 張睿婧 孫蓮蓮 張冬菊 吳月琴 李春丹

(上海種業(yè)（集團(tuán)）有限公司，上海市松江區(qū) 201615)

為穩(wěn)定花影壽的市場價格和滿足多肉愛好者的需求，以百合科十二卷屬植物花影壽葉片為誘導(dǎo)材料，對其進(jìn)行組培快繁技術(shù)研究。結(jié)果表明：利用葉片誘導(dǎo)愈傷分化再生芽，其最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L，最佳芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L,增殖系數(shù)達(dá)4～5倍，分化的芽較多，質(zhì)量較好。最佳生根壯苗培養(yǎng)基為1/2 M S，組培苗具有較典型的觀賞性；組培苗經(jīng)過煉苗后，移栽成活率達(dá)90%以上。

多肉植物；花影壽；葉片；快繁

花影壽是百合科十二卷屬多年生肉質(zhì)植物，株型矮小、無莖。葉短而肥厚，螺旋狀生長，呈蓮座狀排列，頂端呈水平三角形截面，截面平而透明，形成特有的“窗”狀結(jié)構(gòu)，“窗”上有明顯脈紋，具有較高的觀賞性，是室內(nèi)觀葉的案頭佳品。目前花影壽市場需求量較大，但其生長緩慢、產(chǎn)量少、價位高，建立組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，既能解決其種苗數(shù)量少、生長慢等問題，還能降低其價格，滿足眾多多肉愛好者的需求。本研究通過以植株葉片為外植體材料，研究了花影壽組織培養(yǎng)的整套技術(shù)，對百合科十二卷屬多肉植物的生長、繁殖以及品種資源的保存具有一定的指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 外植體的選擇、滅菌方法

以花影壽為供試材料，選取植株的外輪、中輪葉片作為外植體，不破壞原植株的生長點，讓其繼續(xù)生長。將取出的葉片先用洗潔劑清洗浸泡10 min，然后用流水沖洗2 h后瀝干備用。在無菌室超凈臺上，用75%酒精表面消毒30 s，再用無菌水清洗1遍；然后用0.1%HgCl2消毒4～6 min，無菌水沖洗3～5遍；最后用無菌濾紙吸干，備用。

1.2 培養(yǎng)條件

以MS為基本培養(yǎng)基，分別添加KT（激動素）、6-BA（6-芐基嘌呤）、NAA（奈乙酸），所有培養(yǎng)基均加瓊脂0.6%、蔗糖3%，pH5.8～6.0，培養(yǎng)溫度25～28 ℃，光照12 h/ d，光強度2500～3000 Lx。在超凈臺上將無菌葉片接種于不同的培養(yǎng)基上。

初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方：（1）MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.2 mg/L；（2）MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L；（3）MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L；（4）MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.2 mg/L。每個處理10瓶，每瓶接種2個外植體。

增殖培養(yǎng)基配方：（5）MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L；（6）MS+6-BA 0.2 mg/L+KT 0.5 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（7）MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L。每個處理10瓶，每瓶接種4個芽，培養(yǎng)30 d后觀察生長和再生情況。

生根壯苗培養(yǎng)基配方：（8）1/2 MS；（9）MS培養(yǎng)基。培養(yǎng)20～30 d后觀察生根和株型情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對葉片誘導(dǎo)愈傷組織的影響

選擇葉片為外植體材料，對無菌材料的獲得雖難度大，但取材方便，沒時間局限性。從誘導(dǎo)結(jié)果看，4種培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)，在低濃度6-BA的培養(yǎng)基上，接種15 d后葉片慢慢膨大、開裂并愈傷化，再培養(yǎng)15 d后，愈傷表面分化芽，且株型正常。在高濃度6-BA培養(yǎng)基上，只分化愈傷，未分化芽。當(dāng)6-BA濃度高于2 mg/L時，愈傷玻璃化嚴(yán)重。通過對4種培養(yǎng)基的比較發(fā)現(xiàn)，配方（1）培養(yǎng)基的效果最佳，芽誘導(dǎo)率為53%，其次是配方（2）培養(yǎng)基，配方（4）培養(yǎng)基效果最差（見表1）。

表1 不同培養(yǎng)基的芽誘導(dǎo)的效果比較

2.2 不同培養(yǎng)基對芽增殖的影響

將誘導(dǎo)出的再生芽接種到增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20 d后芽基部形成叢生芽，再經(jīng)10～15 d培養(yǎng)后，對增殖的成型芽進(jìn)行切割、轉(zhuǎn)接。由表2可知，配方7培養(yǎng)基的苗基部誘導(dǎo)出較多小芽，株型較好，且增殖倍數(shù)達(dá)4～5倍。增殖過程中有部分芽，株型緊湊，大部分誘導(dǎo)出的小芽具有典型的形態(tài)特征，生根培養(yǎng)30 d后可直接進(jìn)行移栽。對于較弱小的芽，需進(jìn)一步轉(zhuǎn)接培養(yǎng)。

表2 不同培養(yǎng)基的芽增殖效果比較

2.3 生根壯苗

在培養(yǎng)過程中光照對花影壽的影響較大，光照強度為3 000 Lx時有利于植株成型，光照強度為2 000 Lx時，植株出現(xiàn)徒長現(xiàn)象。試驗還發(fā)現(xiàn)，配方（8）培養(yǎng)基上培養(yǎng)的苗比配方（9）培養(yǎng)基上的苗株型緊湊，窗面紋脈更清晰。

圖1 芽增殖誘導(dǎo)

圖2 生根壯苗培養(yǎng)

2.4 煉苗及移栽

生根壯苗培養(yǎng)30 d后，植株逐漸長大并形成具有典型觀賞特征的組培苗，將瓶苗移出培養(yǎng)室，在常溫室內(nèi)自然光照下培養(yǎng)2～3 d，隨后開瓶煉苗1～2 d，然后取出帶根的小苗，用清水沖洗干凈根部培養(yǎng)基，用低濃度多菌靈浸泡10 min，在陰涼通風(fēng)處自然晾干。隨后均勻插入基質(zhì)中（泥碳∶細(xì)沙∶蛭石=1∶1∶1），發(fā)現(xiàn)組培苗根系處于新鮮狀態(tài)時，緩沖期較短，新根長出僅需15～20 d；而當(dāng)組培苗根系處于干蔫狀態(tài)時，緩沖期較長，需30～50 d長出新根?；ㄓ皦蹖諝鉂穸纫筝^高，移栽過程中空氣濕度達(dá)80%以上時，移栽成活率在90%以上，等植株長出新根后進(jìn)行第1次澆水。

3 結(jié)論與討論

目前百合科十二卷屬植物組織培養(yǎng)和快速繁殖研究已有報道，如截形十二卷[1]、康平壽[2]、冰燈玉露[3]、毛玉露[4]、“高地”截形瓦葦[5]、美吉壽[6]、萬象[7]等均用花葶作為誘導(dǎo)材料。而選擇葉片為誘導(dǎo)材料進(jìn)行組織培養(yǎng)的，目前僅有水晶掌[8]、玉扇[9]、巴迪亞壽（Haworthia mirabilis）[10]、點紋十二卷[11]等。本研究采用花影壽葉片誘導(dǎo)再生植株，對母株雖有損傷，但具有一定的時效性，能縮短等待抽花葶的時間。

不同培養(yǎng)基對花影壽葉片誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)時，選擇植株的外輪、中輪葉片為誘導(dǎo)材料，以MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.2 mg/L培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷分化芽效果最佳，誘導(dǎo)率為53%。用不同培養(yǎng)基進(jìn)行芽增殖培養(yǎng)時，最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L，在添加KT的培養(yǎng)基上，對芽增殖具有促進(jìn)作用，且增殖芽無玻璃化，增殖倍數(shù)達(dá)4～5倍，分化的小芽培養(yǎng)30 d后株型均較好。生根培養(yǎng)基以1/2MS為最佳，得到的組培苗株型好，“窗”面紋理清晰，具有較好的觀賞價值，移栽成活率達(dá)90%以上。

[1] 孫濤,李德森.截形十二卷的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學(xué)報,2002,38(6)：586-586.

[2] 孫濤,金蕊,李德森.康平壽的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學(xué)報,2003,39(3）：232.

[3] 宋揚.冰燈玉露的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2014,(18)：164,166.

[4] 高越,王婭欣,孫濤,等.毛玉露的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].生物學(xué)通報,2010,45(6)：54-55.

[5] 許繼勇,麥瑜玲,鄭添群,等.“高地”截形瓦葦?shù)慕M織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)研究[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,12(2)：8-10.

[6] 王泉,左志宇,宋曉濤,等.百合科多肉植物美吉壽的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學(xué)報,2008,44(1)：123-124.

[7] 黃清俊,丁雨龍,唐曉英.珍奇多肉植物萬象微型繁殖[J].北方園藝,2007(5)：191-193.

[8] 黃素華,肖惠勻,洪燕萍.水晶掌組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].福建師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）,2014,30(5)：96-100.

[9] 李劼,長靜,盧濤.玉扇的快速繁殖[J].中國科技信息,2008 (12)：78.

[10] 趙昂,左志宇，宋曉濤，等.Haworthia mirabilis的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學(xué)報,2007,43(6)：1137-1138.

[11] 劉春梅,張紅.點紋十二卷的組培與快繁研究[J].安徽農(nóng)學(xué)通報,2012,18(3)：32.

2016-12-01