• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    香加皮對斑馬魚發(fā)育毒性及心臟毒性的影響

    2017-05-09 15:53:58馮婭茹趙崇軍倪媛媛田敬歡夏青張文婷樊嬌嬌馬志強(qiáng)林瑞超
    環(huán)球中醫(yī)藥 2017年5期
    關(guān)鍵詞:孵化率斑馬魚胚胎

    馮婭茹 趙崇軍 倪媛媛 田敬歡 夏青 張文婷 樊嬌嬌 馬志強(qiáng) 林瑞超

    ?

    ·論著·

    香加皮對斑馬魚發(fā)育毒性及心臟毒性的影響

    馮婭茹 趙崇軍 倪媛媛 田敬歡 夏青 張文婷 樊嬌嬌 馬志強(qiáng) 林瑞超

    目的 探討香加皮水提液對斑馬魚的發(fā)育毒性及不同暴露時(shí)間藥物對心臟毒性的影響。方法 參照經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織推薦的方法,將受精后6小時(shí)(6 hour-post-fertilization,6 hpf)胚胎暴露在含有不同濃度香加皮水溶液的24孔板中,分別在24、48、72、96 hpf階段測定胚胎/幼魚的自主抽動次數(shù)、心率、孵化率、死亡率等指標(biāo)。隨后,使用不同濃度的香加皮水溶液處理發(fā)育至48、72、96 hpf的斑馬魚24小時(shí),通過死亡率確定不同暴露階段對斑馬魚心臟毒性的影響。結(jié)果 各暴露組24 hpf自主抽動次數(shù)增加、48 hpf心率以及72 hpf孵化率顯著降低,與正常對照組相比均有顯著性差異(P<0.05);24 hpf低濃度給藥組胚胎發(fā)育遲緩、眼點(diǎn)未發(fā)育、頭部偏小或未發(fā)育,高濃度組發(fā)育畸形或停留在體節(jié)期;48 hpf胚胎卵黃囊畸形、黑色素生成抑制、尾芽未脫落;72 hpf 幼魚出現(xiàn)身體彎曲、心包水腫、卵黃囊畸形等中毒癥狀。不同發(fā)育階段斑馬魚急性毒性暴露實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:香加皮對48、72、96 hpf斑馬魚的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為:0.866 mg/mL、0.693 mg/mL和0.843 mg/mL。結(jié)論 香加皮對斑馬魚具有明顯的發(fā)育毒性和心臟毒性,且48 hpf斑馬魚非常適合進(jìn)行心臟毒性藥物篩選。

    香加皮; 發(fā)育毒性; 心臟毒性; 斑馬魚

    香加皮Cortex Periplocae亦稱北五加皮,為蘿藦科植物杠柳PeriplocasepiumPunge的干燥根皮,有祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨的功效,常用于治療風(fēng)寒濕痹,腰膝酸軟,心悸氣短,下肢浮腫[1]。香加皮為藥典規(guī)定的有毒藥,誤用、劑量過大以及長期服用皆可引起機(jī)體出現(xiàn)心率減慢、早搏、房室傳導(dǎo)阻滯等心臟中毒癥狀,甚至致死[2],但其并非孕婦禁忌藥,有關(guān)發(fā)育毒性的研究也未見報(bào)道。

    作為一種脊椎動物模型,斑馬魚與人類基因相似度高達(dá)87%,具有完整的組織器官。斑馬魚胚胎母體外發(fā)育,發(fā)育時(shí)間短,數(shù)量大,早期胚胎透明,可直接在顯微鏡下觀察各組織臟器形態(tài)變化及血液流動情況[3],能夠極大地彌補(bǔ)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)與體外實(shí)驗(yàn)之間的間隙。最重要的是,斑馬魚胚胎及幼魚對大多數(shù)藥物的反應(yīng)與人類臨床反應(yīng)相似[4-5]。因此斑馬魚可作為評價(jià)藥物潛在發(fā)育毒性及器官毒性的理想模型。

    本實(shí)驗(yàn)通過斑馬魚模型初步探討香加皮對斑馬魚的發(fā)育毒性以及不同發(fā)育階段給藥對斑馬魚心臟毒性的影響,以期為臨床安全用藥提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動物

    斑馬魚(AB-type)由本實(shí)驗(yàn)室循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)飼養(yǎng)提供,循環(huán)養(yǎng)殖水根據(jù)Brand等[6-7]的方法配制。水溫控制在(28±0.5)℃,pH值7.0~7.2,電導(dǎo)率450~550 μS/cm,光照/黑暗周期為14小時(shí)/10小時(shí)。成年斑馬魚每日喂食3次人工孵化的豐年蟲幼體。實(shí)驗(yàn)前一晚暗周期開始之前,將成年雌雄斑馬魚按1∶2或1∶1配對,放入帶隔板的產(chǎn)卵盒中,第2天早晨給予光照,抽掉隔板。產(chǎn)卵完成后,緩緩晃動產(chǎn)卵盒,以便讓魚卵更好地受精,隨后用吸管將魚卵收集于含有孵化水的干凈無菌培養(yǎng)皿中,用培養(yǎng)液清洗魚卵數(shù)次以除去未受精卵、糞便等雜物,將發(fā)育完整受精卵放于生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

    1.2 儀器與材料

    香加皮為安國圣山藥業(yè)有限公司提供,經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定為蘿藦科植物杠柳PeriplocasepiumPunge的干燥成熟種子,斑馬魚循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)(北京愛生科技公司);TE-2000-S光學(xué)倒置顯微鏡(NIKON);NaCl、KCl、Na2HPO4、K2HPO4、MgSO4、NaHCO3、CaCl2,(分析純,北京化工);1 mL,5 mL移液器(eppendorf);胰蛋白酶(Protease from Streptomyces griseus,sigma,P6911);恒溫培養(yǎng)箱LRH-250Z(廣州瑞明儀器有限公司);真空干燥箱DZF-6050B(上海一恒科學(xué)儀器有限公司);旋蒸儀R-1001-VN(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)。

    1.3 香加皮樣品制備

    香加皮水提液:取香加皮飲片,粉碎后過40目篩,稱取50 g香加皮粉末,加入10倍量的水提取2次,每次2小時(shí),過濾后濃縮,真空干燥。

    斑馬魚胚胎培養(yǎng)液:按照Zebrafish Book標(biāo)準(zhǔn)配制NaCl 0.137 mol/L、KCl 5.4 mol/L、Na2HPO40.25 mol/L、K2HPO40.44 mol/L、CaCl21.3 mol/L、MgSO41.0 mol/L、NaHCO34.2 mol/L的水溶液。

    香加皮儲備液的配制:精密稱取0.2 g香加皮提取物粉末,溶于50 mL的養(yǎng)殖水中,超聲30分鐘,配置成4 mg/mL的母液。

    1.4 發(fā)育毒性的評價(jià)

    1.4.1 香加皮樣品溶液的配制 在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,用胚胎培養(yǎng)液將母液稀釋至0.5、0.7、0.9、1.1、1.3 mg/mL六個(gè)濃度梯度。

    1.4.2 香加皮樣品溶液處理斑馬魚胚胎 在顯微鏡下選取受精后6小時(shí)左右(hour-post-fertilization,6 hpf~8 hpf)且發(fā)育正常的胚胎,并將其隨機(jī)轉(zhuǎn)入含有不同濃度香加皮溶液的24孔板,每板設(shè)置5個(gè)藥物濃度,一個(gè)空白組,每孔5枚胚胎。28.5℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每隔24小時(shí)更換香加皮樣品溶液1次,以保證溶液中各參數(shù)穩(wěn)定。取不同親本的胚胎重復(fù)實(shí)驗(yàn)三次。

    1.4.3 香加皮對斑馬魚胚胎發(fā)育影響的觀測 以培養(yǎng)液中發(fā)育的胚胎為正常對照組,通過倒置光學(xué)顯微鏡于24、48、72和96 hpf時(shí)間點(diǎn)觀察染毒后胚胎的發(fā)育情況與形態(tài)變化并詳細(xì)拍照記錄,統(tǒng)計(jì)胚胎發(fā)育全過程的死亡數(shù)及畸形數(shù)、計(jì)算LC50。

    1.4.4 斑馬魚胚胎24 hpf自主抽動的測定 胚胎發(fā)育至24 hpf時(shí)尾部表現(xiàn)出強(qiáng)烈的抽動。記錄24 hpf時(shí)每個(gè)濃度下1分鐘內(nèi)胚胎的自主抽動次數(shù),每一個(gè)濃度下取7枚胚胎進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(n=7)。

    1.4.5 斑馬魚胚胎48 hpf心率的測定 斑馬魚胚胎在48 hpf時(shí)心臟已基本發(fā)育完全,即出現(xiàn)規(guī)律的心跳,實(shí)驗(yàn)中記錄了48 hpf時(shí)每個(gè)濃度下胚胎10秒內(nèi)心率,每一個(gè)濃度取7枚胚胎進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(n=7)。

    1.4.6 斑馬魚孵化率的測定 統(tǒng)計(jì)不同濃度處理組中斑馬魚胚胎的孵化率(孵化率=已孵化胚胎/總胚胎個(gè)數(shù)×100%)。由于胚胎在48 hpf時(shí)開始孵化,直到96 hpf時(shí)完成孵化,因此,分別選擇72、96 hpf統(tǒng)計(jì)胚胎的孵化率。

    1.5 不同發(fā)育階段(48、72、96 hpf)斑馬魚心臟毒性評價(jià)

    為了進(jìn)一步探究香加皮對不同發(fā)育階段斑馬魚心臟毒性的影響,在顯微鏡下選取形態(tài)發(fā)育正常的48、72、96 hpf的斑馬魚胚胎及幼魚(48 hpf胚胎需用胰蛋白酶脫去卵膜)轉(zhuǎn)入含有不同濃度香加皮溶液的12孔板處理24小時(shí),通過死亡率來評價(jià)香加皮對不同時(shí)間段斑馬魚心臟毒性的的影響。取不同親本的胚胎及幼魚重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    2 結(jié)果

    2.1 香加皮水溶液對不同發(fā)育階段斑馬魚胚胎發(fā)育表型的影響

    24 hpf胚胎發(fā)育畸形情況如圖1所示:相比于正常對照組,低濃度給藥組胚胎發(fā)育遲緩,眼點(diǎn)未發(fā)育,頭部偏小或未發(fā)育,見圖B、C。高濃度組發(fā)育畸形,見圖D或停留在體節(jié)期,自主運(yùn)動缺失,見圖E。

    48 hpf胚胎發(fā)育畸形情況如圖2所示:卵黃囊畸形,見圖B。黑色素生成抑制,見圖C~E。尾芽未脫落,見圖B~E。高濃度組發(fā)育受到抑制。

    72 hpf幼魚發(fā)育畸形情況如圖3所示:卵黃囊畸形,見圖B~D。心包水腫,見圖B、C。黑色素生成抑制,見圖D。

    注:A:對照組;B:1.25 mg/mL香加皮水總提取物;C:1.5 mg/mL香加皮水總提取物;D:2 mg/mL香加皮水總提取物;E:3 mg/mL香加皮水總提取物

    圖1 香加皮對24 hpf斑馬魚形態(tài)發(fā)育的影響(×10)

    注:A:對照組;B:0.15 mg/mL香加皮水總提取物;C:1mg/mL香加皮水總提取物;D:1.5 mg/mL香加皮水總提取物;E:3mg/mL香加皮水總提取物(紅色箭頭標(biāo)注表示尾節(jié)未脫落,黃色箭頭標(biāo)注表示卵黃囊畸形)

    圖2 香加皮對48 hpf斑馬魚形態(tài)發(fā)育的影響(×10)

    注:A:對照組;B:0.75 mg/mL香加皮水總提取物;C:1.25 mg/mL香加皮水總提取物;D:1.25 mg/mL香加皮水總提取物

    (紅色箭頭標(biāo)注表示心包水腫,黃色箭頭標(biāo)注表示卵黃囊畸形)

    圖3 香加皮對72 hpf斑馬魚形態(tài)發(fā)育的影響(×10)

    2.2 香加皮對斑馬魚24 hpf自主抽動的影響

    倒置顯微鏡下觀察并記錄24 hpf斑馬魚1分鐘內(nèi)的自主抽動次數(shù)。方差分析結(jié)果表明各給藥組與正常對照組之間具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。見表1。

    表1 香加皮對24 hpf胚胎自主抽動的影響

    注: 與對照組相比,aP<0.01。

    2.3 香加皮對48 hpf斑馬魚心率的影響

    倒置顯微鏡下統(tǒng)計(jì)斑馬魚10秒內(nèi)心臟跳動次數(shù)。方差分析結(jié)果顯示各給藥組與正常對照組之間有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。見表2。

    表2 香加皮對48 hpf心率的影響

    注: 與對照組相比,aP<0.01。

    2.4 香加皮對斑馬魚孵化率的影響

    48 hpf胚胎進(jìn)入孵化期,但48 hpf時(shí)所有給藥組的胚胎均無孵化,故48 hpf未做統(tǒng)計(jì)。72 hpf大部分胚胎孵化完全,方差分析結(jié)果顯示0.9 mg/mL及其以上濃度組與正常對照組相比具有顯著性差異(P<0.01),見表3。

    2.5 香加皮對各個(gè)發(fā)育階段斑馬魚心臟毒性

    48、72、96 hpf的斑馬魚暴露24小時(shí)后,心臟毒性明顯,通過死亡率-濃度曲線計(jì)算的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為:0.866、0.693、0.843 mg/mL,見圖4。

    結(jié)果顯示,72 hpf斑馬魚對香加皮較為敏感,48 hpf斑馬魚的LC50與96 hpf相似,表明48 hpf斑馬魚適合進(jìn)行藥物心臟毒性研究。

    表3 香加皮水總提取物對72 hpf胚胎孵化率的影響

    注: 與對照組相比,aP<0.01。

    3 討論

    香加皮中含有十幾種杠柳苷及苷元,該化學(xué)成分能夠?qū)C(jī)體產(chǎn)生明顯的強(qiáng)心作用,同時(shí)也可能會抑制心肌細(xì)胞膜Na+-K+-ATP酶而產(chǎn)生心臟毒性[8-9]。

    傳統(tǒng)的發(fā)育毒性評價(jià)一般以嚙齒類動物鼠及非嚙齒類動物兔為模型進(jìn)行研究[10],成本較高且相關(guān)測試不能覆蓋胚胎發(fā)育的全過程[11]。斑馬魚作為一種新的動物模型,繁殖能力強(qiáng),生命周期短,成本低,早期胚胎透明,在顯微鏡下可直接觀察到體內(nèi)各器官的發(fā)育過程及藥物對器官發(fā)育的致畸效應(yīng)[12],而且它的毒性特征與哺乳動物非常類似[13]。

    此外,斑馬魚可以不依賴于完整的心血管系統(tǒng),甚至在整個(gè)心血管循環(huán)缺失的情況下仍然能生存一段時(shí)間,逐步成為了研究心臟毒性藥物篩選的可替代動物模型[14-16]。總之,斑馬魚模型將體外動物模型和體內(nèi)細(xì)胞模型的優(yōu)勢進(jìn)行有效結(jié)合,越來越多的應(yīng)用于臨床候選藥物的安全性及有效性評估。

    注: A:48 hpf;B:72 hpf;C:96 hpf

    圖4 不同發(fā)育階段斑馬魚毒效曲線

    本實(shí)驗(yàn)以斑馬魚為模型,通過對胚胎自主抽動、心率、孵化率、死亡率的研究來評估香加皮對斑馬魚發(fā)育的影響。斑馬魚自主抽動是運(yùn)動神經(jīng)系統(tǒng)功能發(fā)育的一種表現(xiàn)[17]。本實(shí)驗(yàn)中,正常對照組斑馬魚在24 hpf自主抽動數(shù)為5.5次/分鐘,與文獻(xiàn)報(bào)道相符[18]。與對照組相比,低濃度處理組即出現(xiàn)差別,且隨濃度增加抽動次數(shù)增加。此外,高濃度處理組(3 mg/mL)中胚胎發(fā)育停留在體節(jié)期。綜上表明香加皮可抑制早期胚胎發(fā)育,有一定的神經(jīng)毒性。

    胚胎發(fā)育過程中心臟是最早發(fā)生并發(fā)揮功能的器官,完整的心臟功能對于胚胎的正常發(fā)育起著關(guān)鍵作用,斑馬魚胚胎發(fā)育至48 hpf心率基本趨于穩(wěn)定[19-20]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明香加皮會導(dǎo)致48 hpf斑馬魚胚胎的心臟出現(xiàn)表型和功能異常,如心包水腫,心率降低等并呈現(xiàn)劑量相關(guān)性,這與文獻(xiàn)報(bào)道香加皮臨床中毒癥狀相符合[2]。此外,香加皮能夠抑制斑馬魚的孵化過程,處理組與對照組之間具有顯著性差異。結(jié)果表明,香加皮對斑馬魚具有明顯的發(fā)育毒性。

    24 hpf斑馬魚心臟開始出現(xiàn)心率,48 hpf斑馬魚心臟發(fā)育完全[6]并發(fā)揮完全功能。因此,針對香加皮的心臟毒性,筆者選定不同發(fā)育階段(48、72、96 hpf)的斑馬魚染毒24小時(shí)后統(tǒng)計(jì)死亡數(shù),計(jì)算LC50值,進(jìn)而評價(jià)香加皮對不同發(fā)育階段斑馬魚心臟毒性的影響。急性毒性試驗(yàn)表明,香加皮對48 hpf、96 hpf斑馬魚的毒性大小相似,進(jìn)一步驗(yàn)證了48 hpf斑馬魚適合作為心臟毒性研究的開始階段,但是72 hpf斑馬魚對香加皮較為敏感,這可能是由于香加皮影響了斑馬魚的某一臟器發(fā)育,例如肝臟或者腸道發(fā)育,但實(shí)驗(yàn)結(jié)果仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。

    香加皮雖為《中國人民共和國藥典》2015版明確規(guī)定的有毒藥,但并非孕婦禁忌藥。而本次實(shí)驗(yàn)表明香加皮具有明顯的發(fā)育毒性及心臟毒性,以期能為臨床安全、合理用藥提供依據(jù),為今后有關(guān)香加皮毒性機(jī)制的研究做參考。

    [1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2015:257-268.

    [2] 梅全喜,畢煥新.現(xiàn)代中藥藥理手冊[M].北京:中國中醫(yī)藥出社,1998:421.

    [3] Goldsmith P.Zebrafish as a pharmacological tool: the how, why and when[J].Current Opinion in Pharmacology,2004,4(5):504-512.

    [4] Mittelstadt SW,Hemenway CL, Craig MP,et al.Evaluation of zebrafish embryos as a model for assessing inhibition of hERG [J].Journal of Pharmacological and Toxicological Methods,2008,57(2):100-105.

    [5] Zhu JJ,Xu YQ,He JH,et al.Human cardiotoxic drugs delivered by soaking and microinjection induce cardiovascular toxicity in zebrafish[J].Journal of Applied toxicology,2014,34(2):139-148.

    [6] WESTERFIELD M.The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish[M].University of Oregon Press,1993.

    [7] Brand M, Granato M, Nusslein-Volhard C. Keeping and Raising Zebrafish[M].Oxford:Oxford Mniversity Press,2002:7-37.

    [8] 王利萍,劉建利.香加皮的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥,2009,(3):493-496.

    [9] 李天祥,張麗娟,劉虹,等.香加皮的研究進(jìn)展[J].北京中醫(yī)藥,2008,27(12):960-963.

    [10] Rovida C, Hartung T. Re-evaluation of animal numbers and costs for In vivo tests to accomplish REACH legislation requirements for chemicals[J].Altex,2009,26(3):187-208.

    [11] Selderslaghs IW, Van RAR, et al.Development of a screening assay to identify teratogenic and embryotoxic chemicals using the zebrafish embryo[J].Reproductive Toxicology,2009,28(3):308-320.

    [12] Hill A, Howard Cu, Cossins A. Neurodevelopmental defects in zebrafish (Danio rerio) at environmentally relevant dioxin (TCDD) concentrations[J].Toxicological Sciences,2003,76(2):392-399.

    [13] He JH , Guo SY ,Zhu F, et al.A zebrafish phenotypic assay for assessing drug-induced hepatotoxicity[J].Journal of Pharmacological and Toxicological Methods,2013,67(1):25-32.

    [14] Thisse C, Zon LI. Organogenesis-heart and blood formation from the zebrafish point of view[J].Science,2002,295(5554):457-462.

    [15] Chen JN, Haffter P, Odenthal J,et al. Mutation affecting the cardiovascular system and other internal organs in zebrafish [J]. Development,1996,123:293-302.

    [16] Zhong TP, Childs S, Leu JP,et al. Gridlock signaling pathway fashions the first embryonic artery[J]. Nature,2001,414(6860):216-220.

    [17] Kimmel CB, Ballard WW, Kimmel SR, et al. Stages of embryonic development of the zebrafish[J].Developmental dynamics,1995,203(3):253-310.

    [18] Saint-Amant L, Drapeau P. Time course of the development of motor behaviors in the zebrafish embryo[J].Journal of Neurobiology,1998,37(4):622-632.

    [19] Kitambi S S, Nilsson E S, Sekyrova P, et al. Small molecule screening platform for assessment of cardio- vascular toxicity on adult Zebrafish heart[J]. BMC Physiology,2012,12(1):3-9.

    [20] 王思鋒,劉可春,王希敏,等.雷公藤紅素對斑馬魚胚胎心臟毒性的初步研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2009,25(5):634-636.

    (本文編輯: 禹佳)

    Effects of Cortex Periplocae on zebrafish developmental toxicity and cardiac toxicity

    FENGYaru,ZHAOChongjun,NIYuanyuan,etal.

    SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China

    LINRuichao,E-mail:linrch307@sina.com.cn

    Objective To study the toxic effects of Cortex Periplocae on zebrafish embryo development, and the effects of different exposure duration on the heart toxicity. Methods The methods recommended by Organization for Economic Co-operation and Development was refered, zebrafish embryos of 6 hour-post-fertilization were exposed to 24-well plates with aqueous extraction of Cortex Periplocae of various concentrations. Spontaneous movements, heart rate, hatching rate, mortality rate in 24 hpf and 48 hpf were used to assess the effects of Cortex Periplocae on the zebrafish development under the microscope. Zebrafish at 48 hpf, 72 hpf, 96 hpf were treated with aqueous extraction of cortex periplocae with various concentrations for 24h to determine the effects of different exposure duration on the heart toxicity. Results Compared with the normal control group, the number of spontaneous movements of 24 hpf, heart rate of 48 hpf and the hatching rate of 72 hpf were significantly lower in the exposed group,the results had significant difference (P<0.05). Embryos of 24 hpf exposed to low concentration showed immature development of head and eyes spot, and embryos in high concentration group were malformed or stayed in the segmentation period. Embryos of 48 hpf showed malformation of visceral yolk sac, inhibition of melanin and tail bud was not fallen off. After 72 hpf, the abnormality of zebrafish was observed for curved body, pericardial edema, yolk sac edema. Experimental result of acute toxicity exposure at different developmental stages of zebrafish showed that the median lethal concentration(LC50) were 0.866 mg/mL, 0.693 mg/mL, 0.843 mg/mL respectively. Conclusion Cortex Periplocae had significant toxic effect on the development of zebrafish embryos and heart. Moreover, 48hpf zebrafish is well suited for drug screening of cardiac toxicity.

    Zebrafish; Cortex Periplocae; Developmental toxicity; Cardiac toxicity

    北京市科學(xué)研究與研究生培養(yǎng)共建項(xiàng)目(2050205)

    100102 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 中藥品質(zhì)評價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室[馮婭茹(碩士研究生)、趙崇軍、倪媛媛、田敬歡、夏青、樊嬌嬌、張文婷、馬志強(qiáng)、林瑞超]

    馮婭茹(1993- ),女,2015級在讀碩士研究生。研究方向:中藥毒性成分研究。E-mail:1043742239@qq.com

    林瑞超(1954- ),博士,教授,研究員,博士生導(dǎo)師。研究方向:中藥質(zhì)量控制與物質(zhì)基礎(chǔ)研究。E-mail:linrch307@sina.com.cn

    R285.5

    A

    10.3969/j.issn.1674-1749.2017.05.006

    2016-04-22)

    猜你喜歡
    孵化率斑馬魚胚胎
    斑馬魚天生就能辨別數(shù)量
    蘇豪×鐘曄(抗)正交秋用種孵化率偏低的原因分析
    提高家禽孵化率的有效措施
    小斑馬魚歷險(xiǎn)記
    母親肥胖竟然能導(dǎo)致胚胎缺陷
    秋制雄蠶雜交種“秋·華×平30”的孵化率調(diào)查*
    母親肥胖竟然能導(dǎo)致胚胎缺陷
    瓜蔞不同部位對斑馬魚促血管生成及心臟保護(hù)作用
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    DiI 在已固定人胚胎周圍神經(jīng)的示蹤研究
    冷凍胚胎真的可以繼承嗎?
    99国产精品一区二区蜜桃av| а√天堂www在线а√下载| 啦啦啦 在线观看视频| 丝袜美腿诱惑在线| 午夜福利在线观看吧| www.www免费av| 久久精品成人免费网站| 国产黄色小视频在线观看| 免费观看人在逋| 91av网站免费观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 宅男免费午夜| 长腿黑丝高跟| or卡值多少钱| 两个人视频免费观看高清| 精品久久久久久久末码| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲在线自拍视频| ponron亚洲| 天堂√8在线中文| 久久性视频一级片| 精品国内亚洲2022精品成人| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美激情 高清一区二区三区| 日韩欧美免费精品| 91麻豆av在线| 国产黄片美女视频| 亚洲,欧美精品.| 麻豆av在线久日| 国产成人啪精品午夜网站| www日本在线高清视频| 亚洲真实伦在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 美女大奶头视频| 香蕉丝袜av| 亚洲成a人片在线一区二区| 色播在线永久视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产亚洲av高清不卡| 在线永久观看黄色视频| 91国产中文字幕| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲国产精品999在线| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美成人免费av一区二区三区| 无限看片的www在线观看| 国产三级在线视频| 人成视频在线观看免费观看| 日韩欧美国产在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 国产一区二区三区在线臀色熟女| e午夜精品久久久久久久| 在线观看舔阴道视频| av天堂在线播放| 日韩视频一区二区在线观看| 精品日产1卡2卡| 天天一区二区日本电影三级| 久久亚洲精品不卡| 久久九九热精品免费| 欧美久久黑人一区二区| 日韩免费av在线播放| 深夜精品福利| 51午夜福利影视在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 丁香欧美五月| 午夜成年电影在线免费观看| 色尼玛亚洲综合影院| 国产1区2区3区精品| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲中文字幕日韩| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产免费av片在线观看野外av| 日韩三级视频一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| 青草久久国产| 免费看日本二区| 精品国产乱子伦一区二区三区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 久久久国产欧美日韩av| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 免费在线观看完整版高清| 91国产中文字幕| 精品国内亚洲2022精品成人| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 久久香蕉精品热| 91麻豆精品激情在线观看国产| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久久久精品国产欧美久久久| 午夜两性在线视频| 天天添夜夜摸| 亚洲男人的天堂狠狠| 成年版毛片免费区| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产精华一区二区三区| 一级毛片女人18水好多| 亚洲美女黄片视频| 日韩大码丰满熟妇| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 日本 av在线| 免费观看人在逋| 午夜久久久在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产区一区二久久| 在线观看66精品国产| 久久久久久久久久黄片| 在线观看日韩欧美| 一本综合久久免费| 丰满的人妻完整版| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲午夜理论影院| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 禁无遮挡网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 丁香欧美五月| 久久性视频一级片| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲男人天堂网一区| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲,欧美精品.| 日本一区二区免费在线视频| 曰老女人黄片| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 中文字幕av电影在线播放| 国产男靠女视频免费网站| 狠狠狠狠99中文字幕| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美三级亚洲精品| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产主播在线观看一区二区| 午夜福利视频1000在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 老司机靠b影院| 极品教师在线免费播放| 日本一本二区三区精品| 久久久国产欧美日韩av| 后天国语完整版免费观看| netflix在线观看网站| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 成人午夜高清在线视频 | 国产欧美日韩精品亚洲av| 午夜老司机福利片| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久草成人影院| av电影中文网址| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲男人的天堂狠狠| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久久精品91蜜桃| 亚洲无线在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久久香蕉精品热| 女性生殖器流出的白浆| e午夜精品久久久久久久| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 神马国产精品三级电影在线观看 | 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲中文字幕日韩| 满18在线观看网站| 一区二区三区国产精品乱码| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 给我免费播放毛片高清在线观看| 午夜日韩欧美国产| 欧美黑人精品巨大| 国产成人av教育| 国产精品一区二区精品视频观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产片内射在线| 精品国产亚洲在线| 久久亚洲真实| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲第一青青草原| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久国产精品影院| 变态另类丝袜制服| www国产在线视频色| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 最近最新中文字幕大全电影3 | 黄片大片在线免费观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 他把我摸到了高潮在线观看| 操出白浆在线播放| 日本黄色视频三级网站网址| 满18在线观看网站| 国产精品野战在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 国产人伦9x9x在线观看| 自线自在国产av| 国产精品 国内视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 色在线成人网| 一进一出抽搐动态| 精品国产国语对白av| 久久精品人妻少妇| 国产精品一区二区三区四区久久 | 精品欧美一区二区三区在线| 一级毛片高清免费大全| 国产男靠女视频免费网站| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美色视频一区免费| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 妹子高潮喷水视频| 免费在线观看完整版高清| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美中文综合在线视频| 天天一区二区日本电影三级| 国产三级在线视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 十分钟在线观看高清视频www| 麻豆一二三区av精品| 久久欧美精品欧美久久欧美| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美中文日本在线观看视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美黄色淫秽网站| av电影中文网址| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 精品人妻1区二区| 青草久久国产| 亚洲五月色婷婷综合| 欧美性猛交黑人性爽| 国产人伦9x9x在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 最新在线观看一区二区三区| 日韩欧美国产一区二区入口| 一区二区三区精品91| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 日本在线视频免费播放| 亚洲美女黄片视频| 国内精品久久久久久久电影| 午夜福利高清视频| 久久九九热精品免费| 美女国产高潮福利片在线看| 久久中文字幕人妻熟女| 一级毛片高清免费大全| 亚洲av成人av| 亚洲avbb在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 成人手机av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 听说在线观看完整版免费高清| 黄色a级毛片大全视频| 国产不卡一卡二| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | а√天堂www在线а√下载| 看片在线看免费视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久久久久人人人人人| 男人操女人黄网站| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲七黄色美女视频| 精品高清国产在线一区| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲人成网站高清观看| 免费av毛片视频| 狂野欧美激情性xxxx| 999久久久国产精品视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 久久久久久久久中文| 欧美黄色片欧美黄色片| 级片在线观看| 久久99热这里只有精品18| www国产在线视频色| 韩国精品一区二区三区| av福利片在线| 老熟妇仑乱视频hdxx| 桃红色精品国产亚洲av| 午夜两性在线视频| 俺也久久电影网| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 在线观看舔阴道视频| 国产一区二区在线av高清观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 丰满的人妻完整版| 精品久久久久久久久久久久久 | 老司机午夜十八禁免费视频| 波多野结衣高清无吗| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 麻豆久久精品国产亚洲av| 又大又爽又粗| 亚洲五月色婷婷综合| 欧美在线一区亚洲| 激情在线观看视频在线高清| 日韩av在线大香蕉| 日本熟妇午夜| 欧美zozozo另类| 又黄又粗又硬又大视频| 男女之事视频高清在线观看| 搞女人的毛片| а√天堂www在线а√下载| 9191精品国产免费久久| 天天添夜夜摸| 久久久久久久久中文| 黄色视频不卡| 成人精品一区二区免费| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲熟妇熟女久久| 久久青草综合色| 99热只有精品国产| 我的亚洲天堂| 免费高清视频大片| 怎么达到女性高潮| 啦啦啦 在线观看视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久天堂一区二区三区四区| 高清在线国产一区| 免费电影在线观看免费观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 岛国视频午夜一区免费看| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲男人天堂网一区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 岛国视频午夜一区免费看| 一本精品99久久精品77| 亚洲,欧美精品.| 午夜久久久久精精品| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲国产中文字幕在线视频| 两个人免费观看高清视频| 老司机福利观看| 国产又爽黄色视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 丰满的人妻完整版| 两个人看的免费小视频| 国产成年人精品一区二区| xxx96com| 在线天堂中文资源库| 国产99久久九九免费精品| 天堂动漫精品| 窝窝影院91人妻| 在线天堂中文资源库| 成人一区二区视频在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 人人妻人人看人人澡| 一个人免费在线观看的高清视频| 香蕉久久夜色| 一夜夜www| 欧美性长视频在线观看| 久久亚洲真实| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美色视频一区免费| 久久婷婷成人综合色麻豆| 午夜精品在线福利| 成年版毛片免费区| 俄罗斯特黄特色一大片| 91老司机精品| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 麻豆av在线久日| 男男h啪啪无遮挡| 午夜福利欧美成人| 国产精华一区二区三区| 色播在线永久视频| 国产高清有码在线观看视频 | 欧美性猛交黑人性爽| 国产精品 欧美亚洲| 婷婷亚洲欧美| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 无限看片的www在线观看| 国产av不卡久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 日韩欧美 国产精品| 免费看十八禁软件| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 一级片免费观看大全| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 女性生殖器流出的白浆| 伦理电影免费视频| www.自偷自拍.com| 99在线人妻在线中文字幕| 在线看三级毛片| 黄色 视频免费看| www.www免费av| 亚洲色图av天堂| 男女之事视频高清在线观看| 精品国产国语对白av| 久久精品国产清高在天天线| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美精品亚洲一区二区| 免费高清视频大片| e午夜精品久久久久久久| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日本三级黄在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 禁无遮挡网站| 欧美乱色亚洲激情| 日本精品一区二区三区蜜桃| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 久久人人精品亚洲av| 国产亚洲欧美98| 精品人妻1区二区| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲精品在线观看二区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 12—13女人毛片做爰片一| 99riav亚洲国产免费| 少妇 在线观看| 男女视频在线观看网站免费 | 亚洲三区欧美一区| 亚洲七黄色美女视频| 成人永久免费在线观看视频| 天天添夜夜摸| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久婷婷成人综合色麻豆| 大型av网站在线播放| 成人一区二区视频在线观看| 国产av一区二区精品久久| 亚洲成国产人片在线观看| 老司机靠b影院| 久久久久久久精品吃奶| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产日本99.免费观看| 丝袜在线中文字幕| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产日本99.免费观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 日韩欧美免费精品| 欧美久久黑人一区二区| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲熟妇熟女久久| 高清在线国产一区| 搡老岳熟女国产| 国产视频内射| 午夜福利高清视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看 | 香蕉国产在线看| 韩国精品一区二区三区| 校园春色视频在线观看| 99热只有精品国产| 久久精品国产综合久久久| 69av精品久久久久久| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品久久久av美女十八| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| e午夜精品久久久久久久| 一区二区三区高清视频在线| 精品久久久久久久末码| 亚洲最大成人中文| 嫩草影院精品99| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产一区二区在线av高清观看| 国产激情欧美一区二区| 天堂动漫精品| 观看免费一级毛片| 宅男免费午夜| www.熟女人妻精品国产| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 91麻豆精品激情在线观看国产| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久久久九九精品影院| 国产精品一区二区精品视频观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 成年版毛片免费区| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 视频区欧美日本亚洲| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产高清激情床上av| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲第一av免费看| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美又色又爽又黄视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 国产成人欧美| 制服诱惑二区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 最新美女视频免费是黄的| 婷婷精品国产亚洲av在线| 女警被强在线播放| 色哟哟哟哟哟哟| 一本久久中文字幕| 日韩国内少妇激情av| 国产伦人伦偷精品视频| 午夜激情av网站| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产精品久久久av美女十八| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 极品教师在线免费播放| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 一级毛片高清免费大全| a级毛片在线看网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产午夜精品久久久久久| 女性被躁到高潮视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 黄片播放在线免费| 51午夜福利影视在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 99re在线观看精品视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲国产精品合色在线| 日韩有码中文字幕| 黄色女人牲交| 麻豆一二三区av精品| 精品久久久久久久末码| av中文乱码字幕在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 宅男免费午夜| 窝窝影院91人妻| 免费电影在线观看免费观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 悠悠久久av| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产一区二区激情短视频| 国产精品1区2区在线观看.| 午夜激情福利司机影院| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产免费男女视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 一区福利在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 99riav亚洲国产免费| 亚洲自拍偷在线| 日韩大尺度精品在线看网址| 啪啪无遮挡十八禁网站| av天堂在线播放| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产高清有码在线观看视频 | 12—13女人毛片做爰片一| 热99re8久久精品国产| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产97色在线日韩免费| 村上凉子中文字幕在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 色在线成人网| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产免费av片在线观看野外av| xxx96com| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产熟女xx| 大型av网站在线播放| 国产午夜福利久久久久久| 人妻久久中文字幕网| 亚洲无线在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 婷婷丁香在线五月| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产视频一区二区在线看| 老司机午夜福利在线观看视频| av有码第一页| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲电影在线观看av| 成人三级做爰电影| 精品久久久久久久毛片微露脸| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 色av中文字幕| 日韩视频一区二区在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| svipshipincom国产片| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲成人精品中文字幕电影| 日日爽夜夜爽网站| 十八禁人妻一区二区| 欧美在线黄色| 久久精品国产综合久久久| 久久久国产成人免费| 午夜免费观看网址| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产日本99.免费观看| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品亚洲一级av第二区|