• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    香加皮對斑馬魚發(fā)育毒性及心臟毒性的影響

    2017-05-09 15:53:58馮婭茹趙崇軍倪媛媛田敬歡夏青張文婷樊嬌嬌馬志強(qiáng)林瑞超
    環(huán)球中醫(yī)藥 2017年5期
    關(guān)鍵詞:孵化率斑馬魚胚胎

    馮婭茹 趙崇軍 倪媛媛 田敬歡 夏青 張文婷 樊嬌嬌 馬志強(qiáng) 林瑞超

    ?

    ·論著·

    香加皮對斑馬魚發(fā)育毒性及心臟毒性的影響

    馮婭茹 趙崇軍 倪媛媛 田敬歡 夏青 張文婷 樊嬌嬌 馬志強(qiáng) 林瑞超

    目的 探討香加皮水提液對斑馬魚的發(fā)育毒性及不同暴露時(shí)間藥物對心臟毒性的影響。方法 參照經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織推薦的方法,將受精后6小時(shí)(6 hour-post-fertilization,6 hpf)胚胎暴露在含有不同濃度香加皮水溶液的24孔板中,分別在24、48、72、96 hpf階段測定胚胎/幼魚的自主抽動次數(shù)、心率、孵化率、死亡率等指標(biāo)。隨后,使用不同濃度的香加皮水溶液處理發(fā)育至48、72、96 hpf的斑馬魚24小時(shí),通過死亡率確定不同暴露階段對斑馬魚心臟毒性的影響。結(jié)果 各暴露組24 hpf自主抽動次數(shù)增加、48 hpf心率以及72 hpf孵化率顯著降低,與正常對照組相比均有顯著性差異(P<0.05);24 hpf低濃度給藥組胚胎發(fā)育遲緩、眼點(diǎn)未發(fā)育、頭部偏小或未發(fā)育,高濃度組發(fā)育畸形或停留在體節(jié)期;48 hpf胚胎卵黃囊畸形、黑色素生成抑制、尾芽未脫落;72 hpf 幼魚出現(xiàn)身體彎曲、心包水腫、卵黃囊畸形等中毒癥狀。不同發(fā)育階段斑馬魚急性毒性暴露實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:香加皮對48、72、96 hpf斑馬魚的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為:0.866 mg/mL、0.693 mg/mL和0.843 mg/mL。結(jié)論 香加皮對斑馬魚具有明顯的發(fā)育毒性和心臟毒性,且48 hpf斑馬魚非常適合進(jìn)行心臟毒性藥物篩選。

    香加皮; 發(fā)育毒性; 心臟毒性; 斑馬魚

    香加皮Cortex Periplocae亦稱北五加皮,為蘿藦科植物杠柳PeriplocasepiumPunge的干燥根皮,有祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨的功效,常用于治療風(fēng)寒濕痹,腰膝酸軟,心悸氣短,下肢浮腫[1]。香加皮為藥典規(guī)定的有毒藥,誤用、劑量過大以及長期服用皆可引起機(jī)體出現(xiàn)心率減慢、早搏、房室傳導(dǎo)阻滯等心臟中毒癥狀,甚至致死[2],但其并非孕婦禁忌藥,有關(guān)發(fā)育毒性的研究也未見報(bào)道。

    作為一種脊椎動物模型,斑馬魚與人類基因相似度高達(dá)87%,具有完整的組織器官。斑馬魚胚胎母體外發(fā)育,發(fā)育時(shí)間短,數(shù)量大,早期胚胎透明,可直接在顯微鏡下觀察各組織臟器形態(tài)變化及血液流動情況[3],能夠極大地彌補(bǔ)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)與體外實(shí)驗(yàn)之間的間隙。最重要的是,斑馬魚胚胎及幼魚對大多數(shù)藥物的反應(yīng)與人類臨床反應(yīng)相似[4-5]。因此斑馬魚可作為評價(jià)藥物潛在發(fā)育毒性及器官毒性的理想模型。

    本實(shí)驗(yàn)通過斑馬魚模型初步探討香加皮對斑馬魚的發(fā)育毒性以及不同發(fā)育階段給藥對斑馬魚心臟毒性的影響,以期為臨床安全用藥提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動物

    斑馬魚(AB-type)由本實(shí)驗(yàn)室循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)飼養(yǎng)提供,循環(huán)養(yǎng)殖水根據(jù)Brand等[6-7]的方法配制。水溫控制在(28±0.5)℃,pH值7.0~7.2,電導(dǎo)率450~550 μS/cm,光照/黑暗周期為14小時(shí)/10小時(shí)。成年斑馬魚每日喂食3次人工孵化的豐年蟲幼體。實(shí)驗(yàn)前一晚暗周期開始之前,將成年雌雄斑馬魚按1∶2或1∶1配對,放入帶隔板的產(chǎn)卵盒中,第2天早晨給予光照,抽掉隔板。產(chǎn)卵完成后,緩緩晃動產(chǎn)卵盒,以便讓魚卵更好地受精,隨后用吸管將魚卵收集于含有孵化水的干凈無菌培養(yǎng)皿中,用培養(yǎng)液清洗魚卵數(shù)次以除去未受精卵、糞便等雜物,將發(fā)育完整受精卵放于生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

    1.2 儀器與材料

    香加皮為安國圣山藥業(yè)有限公司提供,經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定為蘿藦科植物杠柳PeriplocasepiumPunge的干燥成熟種子,斑馬魚循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)(北京愛生科技公司);TE-2000-S光學(xué)倒置顯微鏡(NIKON);NaCl、KCl、Na2HPO4、K2HPO4、MgSO4、NaHCO3、CaCl2,(分析純,北京化工);1 mL,5 mL移液器(eppendorf);胰蛋白酶(Protease from Streptomyces griseus,sigma,P6911);恒溫培養(yǎng)箱LRH-250Z(廣州瑞明儀器有限公司);真空干燥箱DZF-6050B(上海一恒科學(xué)儀器有限公司);旋蒸儀R-1001-VN(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)。

    1.3 香加皮樣品制備

    香加皮水提液:取香加皮飲片,粉碎后過40目篩,稱取50 g香加皮粉末,加入10倍量的水提取2次,每次2小時(shí),過濾后濃縮,真空干燥。

    斑馬魚胚胎培養(yǎng)液:按照Zebrafish Book標(biāo)準(zhǔn)配制NaCl 0.137 mol/L、KCl 5.4 mol/L、Na2HPO40.25 mol/L、K2HPO40.44 mol/L、CaCl21.3 mol/L、MgSO41.0 mol/L、NaHCO34.2 mol/L的水溶液。

    香加皮儲備液的配制:精密稱取0.2 g香加皮提取物粉末,溶于50 mL的養(yǎng)殖水中,超聲30分鐘,配置成4 mg/mL的母液。

    1.4 發(fā)育毒性的評價(jià)

    1.4.1 香加皮樣品溶液的配制 在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,用胚胎培養(yǎng)液將母液稀釋至0.5、0.7、0.9、1.1、1.3 mg/mL六個(gè)濃度梯度。

    1.4.2 香加皮樣品溶液處理斑馬魚胚胎 在顯微鏡下選取受精后6小時(shí)左右(hour-post-fertilization,6 hpf~8 hpf)且發(fā)育正常的胚胎,并將其隨機(jī)轉(zhuǎn)入含有不同濃度香加皮溶液的24孔板,每板設(shè)置5個(gè)藥物濃度,一個(gè)空白組,每孔5枚胚胎。28.5℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每隔24小時(shí)更換香加皮樣品溶液1次,以保證溶液中各參數(shù)穩(wěn)定。取不同親本的胚胎重復(fù)實(shí)驗(yàn)三次。

    1.4.3 香加皮對斑馬魚胚胎發(fā)育影響的觀測 以培養(yǎng)液中發(fā)育的胚胎為正常對照組,通過倒置光學(xué)顯微鏡于24、48、72和96 hpf時(shí)間點(diǎn)觀察染毒后胚胎的發(fā)育情況與形態(tài)變化并詳細(xì)拍照記錄,統(tǒng)計(jì)胚胎發(fā)育全過程的死亡數(shù)及畸形數(shù)、計(jì)算LC50。

    1.4.4 斑馬魚胚胎24 hpf自主抽動的測定 胚胎發(fā)育至24 hpf時(shí)尾部表現(xiàn)出強(qiáng)烈的抽動。記錄24 hpf時(shí)每個(gè)濃度下1分鐘內(nèi)胚胎的自主抽動次數(shù),每一個(gè)濃度下取7枚胚胎進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(n=7)。

    1.4.5 斑馬魚胚胎48 hpf心率的測定 斑馬魚胚胎在48 hpf時(shí)心臟已基本發(fā)育完全,即出現(xiàn)規(guī)律的心跳,實(shí)驗(yàn)中記錄了48 hpf時(shí)每個(gè)濃度下胚胎10秒內(nèi)心率,每一個(gè)濃度取7枚胚胎進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(n=7)。

    1.4.6 斑馬魚孵化率的測定 統(tǒng)計(jì)不同濃度處理組中斑馬魚胚胎的孵化率(孵化率=已孵化胚胎/總胚胎個(gè)數(shù)×100%)。由于胚胎在48 hpf時(shí)開始孵化,直到96 hpf時(shí)完成孵化,因此,分別選擇72、96 hpf統(tǒng)計(jì)胚胎的孵化率。

    1.5 不同發(fā)育階段(48、72、96 hpf)斑馬魚心臟毒性評價(jià)

    為了進(jìn)一步探究香加皮對不同發(fā)育階段斑馬魚心臟毒性的影響,在顯微鏡下選取形態(tài)發(fā)育正常的48、72、96 hpf的斑馬魚胚胎及幼魚(48 hpf胚胎需用胰蛋白酶脫去卵膜)轉(zhuǎn)入含有不同濃度香加皮溶液的12孔板處理24小時(shí),通過死亡率來評價(jià)香加皮對不同時(shí)間段斑馬魚心臟毒性的的影響。取不同親本的胚胎及幼魚重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    2 結(jié)果

    2.1 香加皮水溶液對不同發(fā)育階段斑馬魚胚胎發(fā)育表型的影響

    24 hpf胚胎發(fā)育畸形情況如圖1所示:相比于正常對照組,低濃度給藥組胚胎發(fā)育遲緩,眼點(diǎn)未發(fā)育,頭部偏小或未發(fā)育,見圖B、C。高濃度組發(fā)育畸形,見圖D或停留在體節(jié)期,自主運(yùn)動缺失,見圖E。

    48 hpf胚胎發(fā)育畸形情況如圖2所示:卵黃囊畸形,見圖B。黑色素生成抑制,見圖C~E。尾芽未脫落,見圖B~E。高濃度組發(fā)育受到抑制。

    72 hpf幼魚發(fā)育畸形情況如圖3所示:卵黃囊畸形,見圖B~D。心包水腫,見圖B、C。黑色素生成抑制,見圖D。

    注:A:對照組;B:1.25 mg/mL香加皮水總提取物;C:1.5 mg/mL香加皮水總提取物;D:2 mg/mL香加皮水總提取物;E:3 mg/mL香加皮水總提取物

    圖1 香加皮對24 hpf斑馬魚形態(tài)發(fā)育的影響(×10)

    注:A:對照組;B:0.15 mg/mL香加皮水總提取物;C:1mg/mL香加皮水總提取物;D:1.5 mg/mL香加皮水總提取物;E:3mg/mL香加皮水總提取物(紅色箭頭標(biāo)注表示尾節(jié)未脫落,黃色箭頭標(biāo)注表示卵黃囊畸形)

    圖2 香加皮對48 hpf斑馬魚形態(tài)發(fā)育的影響(×10)

    注:A:對照組;B:0.75 mg/mL香加皮水總提取物;C:1.25 mg/mL香加皮水總提取物;D:1.25 mg/mL香加皮水總提取物

    (紅色箭頭標(biāo)注表示心包水腫,黃色箭頭標(biāo)注表示卵黃囊畸形)

    圖3 香加皮對72 hpf斑馬魚形態(tài)發(fā)育的影響(×10)

    2.2 香加皮對斑馬魚24 hpf自主抽動的影響

    倒置顯微鏡下觀察并記錄24 hpf斑馬魚1分鐘內(nèi)的自主抽動次數(shù)。方差分析結(jié)果表明各給藥組與正常對照組之間具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。見表1。

    表1 香加皮對24 hpf胚胎自主抽動的影響

    注: 與對照組相比,aP<0.01。

    2.3 香加皮對48 hpf斑馬魚心率的影響

    倒置顯微鏡下統(tǒng)計(jì)斑馬魚10秒內(nèi)心臟跳動次數(shù)。方差分析結(jié)果顯示各給藥組與正常對照組之間有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。見表2。

    表2 香加皮對48 hpf心率的影響

    注: 與對照組相比,aP<0.01。

    2.4 香加皮對斑馬魚孵化率的影響

    48 hpf胚胎進(jìn)入孵化期,但48 hpf時(shí)所有給藥組的胚胎均無孵化,故48 hpf未做統(tǒng)計(jì)。72 hpf大部分胚胎孵化完全,方差分析結(jié)果顯示0.9 mg/mL及其以上濃度組與正常對照組相比具有顯著性差異(P<0.01),見表3。

    2.5 香加皮對各個(gè)發(fā)育階段斑馬魚心臟毒性

    48、72、96 hpf的斑馬魚暴露24小時(shí)后,心臟毒性明顯,通過死亡率-濃度曲線計(jì)算的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為:0.866、0.693、0.843 mg/mL,見圖4。

    結(jié)果顯示,72 hpf斑馬魚對香加皮較為敏感,48 hpf斑馬魚的LC50與96 hpf相似,表明48 hpf斑馬魚適合進(jìn)行藥物心臟毒性研究。

    表3 香加皮水總提取物對72 hpf胚胎孵化率的影響

    注: 與對照組相比,aP<0.01。

    3 討論

    香加皮中含有十幾種杠柳苷及苷元,該化學(xué)成分能夠?qū)C(jī)體產(chǎn)生明顯的強(qiáng)心作用,同時(shí)也可能會抑制心肌細(xì)胞膜Na+-K+-ATP酶而產(chǎn)生心臟毒性[8-9]。

    傳統(tǒng)的發(fā)育毒性評價(jià)一般以嚙齒類動物鼠及非嚙齒類動物兔為模型進(jìn)行研究[10],成本較高且相關(guān)測試不能覆蓋胚胎發(fā)育的全過程[11]。斑馬魚作為一種新的動物模型,繁殖能力強(qiáng),生命周期短,成本低,早期胚胎透明,在顯微鏡下可直接觀察到體內(nèi)各器官的發(fā)育過程及藥物對器官發(fā)育的致畸效應(yīng)[12],而且它的毒性特征與哺乳動物非常類似[13]。

    此外,斑馬魚可以不依賴于完整的心血管系統(tǒng),甚至在整個(gè)心血管循環(huán)缺失的情況下仍然能生存一段時(shí)間,逐步成為了研究心臟毒性藥物篩選的可替代動物模型[14-16]。總之,斑馬魚模型將體外動物模型和體內(nèi)細(xì)胞模型的優(yōu)勢進(jìn)行有效結(jié)合,越來越多的應(yīng)用于臨床候選藥物的安全性及有效性評估。

    注: A:48 hpf;B:72 hpf;C:96 hpf

    圖4 不同發(fā)育階段斑馬魚毒效曲線

    本實(shí)驗(yàn)以斑馬魚為模型,通過對胚胎自主抽動、心率、孵化率、死亡率的研究來評估香加皮對斑馬魚發(fā)育的影響。斑馬魚自主抽動是運(yùn)動神經(jīng)系統(tǒng)功能發(fā)育的一種表現(xiàn)[17]。本實(shí)驗(yàn)中,正常對照組斑馬魚在24 hpf自主抽動數(shù)為5.5次/分鐘,與文獻(xiàn)報(bào)道相符[18]。與對照組相比,低濃度處理組即出現(xiàn)差別,且隨濃度增加抽動次數(shù)增加。此外,高濃度處理組(3 mg/mL)中胚胎發(fā)育停留在體節(jié)期。綜上表明香加皮可抑制早期胚胎發(fā)育,有一定的神經(jīng)毒性。

    胚胎發(fā)育過程中心臟是最早發(fā)生并發(fā)揮功能的器官,完整的心臟功能對于胚胎的正常發(fā)育起著關(guān)鍵作用,斑馬魚胚胎發(fā)育至48 hpf心率基本趨于穩(wěn)定[19-20]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明香加皮會導(dǎo)致48 hpf斑馬魚胚胎的心臟出現(xiàn)表型和功能異常,如心包水腫,心率降低等并呈現(xiàn)劑量相關(guān)性,這與文獻(xiàn)報(bào)道香加皮臨床中毒癥狀相符合[2]。此外,香加皮能夠抑制斑馬魚的孵化過程,處理組與對照組之間具有顯著性差異。結(jié)果表明,香加皮對斑馬魚具有明顯的發(fā)育毒性。

    24 hpf斑馬魚心臟開始出現(xiàn)心率,48 hpf斑馬魚心臟發(fā)育完全[6]并發(fā)揮完全功能。因此,針對香加皮的心臟毒性,筆者選定不同發(fā)育階段(48、72、96 hpf)的斑馬魚染毒24小時(shí)后統(tǒng)計(jì)死亡數(shù),計(jì)算LC50值,進(jìn)而評價(jià)香加皮對不同發(fā)育階段斑馬魚心臟毒性的影響。急性毒性試驗(yàn)表明,香加皮對48 hpf、96 hpf斑馬魚的毒性大小相似,進(jìn)一步驗(yàn)證了48 hpf斑馬魚適合作為心臟毒性研究的開始階段,但是72 hpf斑馬魚對香加皮較為敏感,這可能是由于香加皮影響了斑馬魚的某一臟器發(fā)育,例如肝臟或者腸道發(fā)育,但實(shí)驗(yàn)結(jié)果仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。

    香加皮雖為《中國人民共和國藥典》2015版明確規(guī)定的有毒藥,但并非孕婦禁忌藥。而本次實(shí)驗(yàn)表明香加皮具有明顯的發(fā)育毒性及心臟毒性,以期能為臨床安全、合理用藥提供依據(jù),為今后有關(guān)香加皮毒性機(jī)制的研究做參考。

    [1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2015:257-268.

    [2] 梅全喜,畢煥新.現(xiàn)代中藥藥理手冊[M].北京:中國中醫(yī)藥出社,1998:421.

    [3] Goldsmith P.Zebrafish as a pharmacological tool: the how, why and when[J].Current Opinion in Pharmacology,2004,4(5):504-512.

    [4] Mittelstadt SW,Hemenway CL, Craig MP,et al.Evaluation of zebrafish embryos as a model for assessing inhibition of hERG [J].Journal of Pharmacological and Toxicological Methods,2008,57(2):100-105.

    [5] Zhu JJ,Xu YQ,He JH,et al.Human cardiotoxic drugs delivered by soaking and microinjection induce cardiovascular toxicity in zebrafish[J].Journal of Applied toxicology,2014,34(2):139-148.

    [6] WESTERFIELD M.The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish[M].University of Oregon Press,1993.

    [7] Brand M, Granato M, Nusslein-Volhard C. Keeping and Raising Zebrafish[M].Oxford:Oxford Mniversity Press,2002:7-37.

    [8] 王利萍,劉建利.香加皮的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥,2009,(3):493-496.

    [9] 李天祥,張麗娟,劉虹,等.香加皮的研究進(jìn)展[J].北京中醫(yī)藥,2008,27(12):960-963.

    [10] Rovida C, Hartung T. Re-evaluation of animal numbers and costs for In vivo tests to accomplish REACH legislation requirements for chemicals[J].Altex,2009,26(3):187-208.

    [11] Selderslaghs IW, Van RAR, et al.Development of a screening assay to identify teratogenic and embryotoxic chemicals using the zebrafish embryo[J].Reproductive Toxicology,2009,28(3):308-320.

    [12] Hill A, Howard Cu, Cossins A. Neurodevelopmental defects in zebrafish (Danio rerio) at environmentally relevant dioxin (TCDD) concentrations[J].Toxicological Sciences,2003,76(2):392-399.

    [13] He JH , Guo SY ,Zhu F, et al.A zebrafish phenotypic assay for assessing drug-induced hepatotoxicity[J].Journal of Pharmacological and Toxicological Methods,2013,67(1):25-32.

    [14] Thisse C, Zon LI. Organogenesis-heart and blood formation from the zebrafish point of view[J].Science,2002,295(5554):457-462.

    [15] Chen JN, Haffter P, Odenthal J,et al. Mutation affecting the cardiovascular system and other internal organs in zebrafish [J]. Development,1996,123:293-302.

    [16] Zhong TP, Childs S, Leu JP,et al. Gridlock signaling pathway fashions the first embryonic artery[J]. Nature,2001,414(6860):216-220.

    [17] Kimmel CB, Ballard WW, Kimmel SR, et al. Stages of embryonic development of the zebrafish[J].Developmental dynamics,1995,203(3):253-310.

    [18] Saint-Amant L, Drapeau P. Time course of the development of motor behaviors in the zebrafish embryo[J].Journal of Neurobiology,1998,37(4):622-632.

    [19] Kitambi S S, Nilsson E S, Sekyrova P, et al. Small molecule screening platform for assessment of cardio- vascular toxicity on adult Zebrafish heart[J]. BMC Physiology,2012,12(1):3-9.

    [20] 王思鋒,劉可春,王希敏,等.雷公藤紅素對斑馬魚胚胎心臟毒性的初步研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2009,25(5):634-636.

    (本文編輯: 禹佳)

    Effects of Cortex Periplocae on zebrafish developmental toxicity and cardiac toxicity

    FENGYaru,ZHAOChongjun,NIYuanyuan,etal.

    SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China

    LINRuichao,E-mail:linrch307@sina.com.cn

    Objective To study the toxic effects of Cortex Periplocae on zebrafish embryo development, and the effects of different exposure duration on the heart toxicity. Methods The methods recommended by Organization for Economic Co-operation and Development was refered, zebrafish embryos of 6 hour-post-fertilization were exposed to 24-well plates with aqueous extraction of Cortex Periplocae of various concentrations. Spontaneous movements, heart rate, hatching rate, mortality rate in 24 hpf and 48 hpf were used to assess the effects of Cortex Periplocae on the zebrafish development under the microscope. Zebrafish at 48 hpf, 72 hpf, 96 hpf were treated with aqueous extraction of cortex periplocae with various concentrations for 24h to determine the effects of different exposure duration on the heart toxicity. Results Compared with the normal control group, the number of spontaneous movements of 24 hpf, heart rate of 48 hpf and the hatching rate of 72 hpf were significantly lower in the exposed group,the results had significant difference (P<0.05). Embryos of 24 hpf exposed to low concentration showed immature development of head and eyes spot, and embryos in high concentration group were malformed or stayed in the segmentation period. Embryos of 48 hpf showed malformation of visceral yolk sac, inhibition of melanin and tail bud was not fallen off. After 72 hpf, the abnormality of zebrafish was observed for curved body, pericardial edema, yolk sac edema. Experimental result of acute toxicity exposure at different developmental stages of zebrafish showed that the median lethal concentration(LC50) were 0.866 mg/mL, 0.693 mg/mL, 0.843 mg/mL respectively. Conclusion Cortex Periplocae had significant toxic effect on the development of zebrafish embryos and heart. Moreover, 48hpf zebrafish is well suited for drug screening of cardiac toxicity.

    Zebrafish; Cortex Periplocae; Developmental toxicity; Cardiac toxicity

    北京市科學(xué)研究與研究生培養(yǎng)共建項(xiàng)目(2050205)

    100102 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 中藥品質(zhì)評價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室[馮婭茹(碩士研究生)、趙崇軍、倪媛媛、田敬歡、夏青、樊嬌嬌、張文婷、馬志強(qiáng)、林瑞超]

    馮婭茹(1993- ),女,2015級在讀碩士研究生。研究方向:中藥毒性成分研究。E-mail:1043742239@qq.com

    林瑞超(1954- ),博士,教授,研究員,博士生導(dǎo)師。研究方向:中藥質(zhì)量控制與物質(zhì)基礎(chǔ)研究。E-mail:linrch307@sina.com.cn

    R285.5

    A

    10.3969/j.issn.1674-1749.2017.05.006

    2016-04-22)

    猜你喜歡
    孵化率斑馬魚胚胎
    斑馬魚天生就能辨別數(shù)量
    蘇豪×鐘曄(抗)正交秋用種孵化率偏低的原因分析
    提高家禽孵化率的有效措施
    小斑馬魚歷險(xiǎn)記
    母親肥胖竟然能導(dǎo)致胚胎缺陷
    秋制雄蠶雜交種“秋·華×平30”的孵化率調(diào)查*
    母親肥胖竟然能導(dǎo)致胚胎缺陷
    瓜蔞不同部位對斑馬魚促血管生成及心臟保護(hù)作用
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    DiI 在已固定人胚胎周圍神經(jīng)的示蹤研究
    冷凍胚胎真的可以繼承嗎?
    国产亚洲一区二区精品| av在线老鸭窝| 午夜老司机福利片| 十八禁高潮呻吟视频| 男女边吃奶边做爰视频| 捣出白浆h1v1| 韩国精品一区二区三区| 国产在视频线精品| 美女扒开内裤让男人捅视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 黄色怎么调成土黄色| 人人妻人人澡人人看| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲国产欧美在线一区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲国产av影院在线观看| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 下体分泌物呈黄色| 91国产中文字幕| 亚洲中文av在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 一级毛片电影观看| 亚洲男人天堂网一区| 成年av动漫网址| 超碰成人久久| 亚洲欧洲国产日韩| 成年美女黄网站色视频大全免费| 午夜免费观看性视频| 国产精品久久久久久精品古装| 在线观看免费高清a一片| 在现免费观看毛片| 一级黄色大片毛片| 欧美日韩一级在线毛片| 大陆偷拍与自拍| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 啦啦啦啦在线视频资源| 99久久综合免费| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 国产精品久久久久成人av| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久99精品国语久久久| 久久久国产精品麻豆| 99久久人妻综合| 手机成人av网站| 黄色a级毛片大全视频| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 午夜视频精品福利| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 成年av动漫网址| 97人妻天天添夜夜摸| av国产精品久久久久影院| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 香蕉丝袜av| 免费在线观看完整版高清| 极品少妇高潮喷水抽搐| 99热全是精品| 国产在视频线精品| 黄片播放在线免费| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 只有这里有精品99| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 人妻一区二区av| 在线观看一区二区三区激情| 999精品在线视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 校园人妻丝袜中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 99精品久久久久人妻精品| 国产成人精品无人区| 五月开心婷婷网| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 老司机深夜福利视频在线观看 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美 日韩 精品 国产| 精品一品国产午夜福利视频| 人体艺术视频欧美日本| 国产一卡二卡三卡精品| 国产野战对白在线观看| 999精品在线视频| a 毛片基地| 99久久99久久久精品蜜桃| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 99热国产这里只有精品6| 十八禁网站网址无遮挡| 少妇精品久久久久久久| 日本欧美国产在线视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久天堂一区二区三区四区| 九草在线视频观看| 岛国毛片在线播放| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 男人舔女人的私密视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲第一青青草原| 午夜福利视频在线观看免费| 中文字幕亚洲精品专区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 91九色精品人成在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久这里只有精品19| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美日韩福利视频一区二区| 一级片免费观看大全| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产精品九九99| 1024香蕉在线观看| 国产xxxxx性猛交| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 婷婷成人精品国产| 一级a爱视频在线免费观看| 婷婷色综合www| 99国产精品99久久久久| 青青草视频在线视频观看| 夫妻午夜视频| 777米奇影视久久| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲av国产av综合av卡| 人成视频在线观看免费观看| 色网站视频免费| 成年人免费黄色播放视频| 热99久久久久精品小说推荐| 欧美97在线视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产爽快片一区二区三区| 婷婷成人精品国产| 一区二区三区激情视频| 曰老女人黄片| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 91国产中文字幕| 18在线观看网站| 亚洲av欧美aⅴ国产| 男女之事视频高清在线观看 | 男人操女人黄网站| 一区二区三区精品91| 免费看十八禁软件| 伊人亚洲综合成人网| 大话2 男鬼变身卡| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 飞空精品影院首页| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲成人免费电影在线观看 | 51午夜福利影视在线观看| 免费高清在线观看日韩| videosex国产| 啦啦啦 在线观看视频| 日本黄色日本黄色录像| 91精品三级在线观看| 人妻一区二区av| 1024香蕉在线观看| 999久久久国产精品视频| 一级黄色大片毛片| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 老司机午夜十八禁免费视频| 男人操女人黄网站| 成人手机av| 后天国语完整版免费观看| 国产精品成人在线| 制服诱惑二区| 国产一区二区三区av在线| 中文欧美无线码| 免费观看a级毛片全部| 婷婷色综合大香蕉| 在线观看免费午夜福利视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 日本vs欧美在线观看视频| 中国国产av一级| 精品少妇久久久久久888优播| 青青草视频在线视频观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 午夜免费鲁丝| 一区二区三区四区激情视频| cao死你这个sao货| 色94色欧美一区二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 老司机影院毛片| 性色av乱码一区二区三区2| 国产福利在线免费观看视频| av网站免费在线观看视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲精品自拍成人| 免费高清在线观看视频在线观看| 大香蕉久久成人网| 69精品国产乱码久久久| 少妇人妻 视频| 一级毛片 在线播放| 亚洲av男天堂| 婷婷丁香在线五月| av不卡在线播放| 男人爽女人下面视频在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲专区国产一区二区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 晚上一个人看的免费电影| 国产深夜福利视频在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 美女午夜性视频免费| 另类亚洲欧美激情| 久久av网站| 国产欧美亚洲国产| 亚洲成色77777| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲一码二码三码区别大吗| 电影成人av| 亚洲五月婷婷丁香| 日本一区二区免费在线视频| 操美女的视频在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 一级片'在线观看视频| svipshipincom国产片| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产在线观看jvid| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产成人一区二区在线| 五月开心婷婷网| 欧美xxⅹ黑人| 婷婷色麻豆天堂久久| 日本色播在线视频| 桃花免费在线播放| svipshipincom国产片| 脱女人内裤的视频| 亚洲国产最新在线播放| 欧美精品亚洲一区二区| 婷婷色av中文字幕| 男女午夜视频在线观看| 欧美黑人精品巨大| 日本黄色日本黄色录像| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久免费观看电影| 99热国产这里只有精品6| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美性长视频在线观看| 麻豆乱淫一区二区| av线在线观看网站| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 在线精品无人区一区二区三| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 51午夜福利影视在线观看| 久久99精品国语久久久| 99久久精品国产亚洲精品| 激情五月婷婷亚洲| 高清不卡的av网站| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 欧美性长视频在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 蜜桃国产av成人99| 日本欧美视频一区| 国产一卡二卡三卡精品| 成人免费观看视频高清| 欧美激情高清一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| 国产成人91sexporn| 欧美国产精品一级二级三级| 在线观看免费高清a一片| 欧美日韩av久久| 18禁观看日本| av欧美777| 午夜福利免费观看在线| a级毛片在线看网站| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 在现免费观看毛片| 欧美 日韩 精品 国产| 国产淫语在线视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 日韩一本色道免费dvd| 制服人妻中文乱码| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品人妻1区二区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 免费观看人在逋| 国产熟女午夜一区二区三区| 2018国产大陆天天弄谢| 国产免费视频播放在线视频| 欧美日韩精品网址| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久中文字幕一级| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 91精品国产国语对白视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产一卡二卡三卡精品| 叶爱在线成人免费视频播放| 日韩一本色道免费dvd| e午夜精品久久久久久久| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲 国产 在线| 亚洲国产精品999| 欧美xxⅹ黑人| 久久九九热精品免费| 亚洲国产欧美在线一区| 美女福利国产在线| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产精品久久久av美女十八| www.av在线官网国产| 亚洲精品自拍成人| 久久久久国产一级毛片高清牌| 99国产精品99久久久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 午夜影院在线不卡| 久久久国产精品麻豆| 成年人黄色毛片网站| svipshipincom国产片| 2021少妇久久久久久久久久久| 999久久久国产精品视频| 免费在线观看完整版高清| 精品福利永久在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 91精品国产国语对白视频| 热re99久久精品国产66热6| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 欧美激情高清一区二区三区| 视频区图区小说| xxxhd国产人妻xxx| 午夜两性在线视频| 午夜福利乱码中文字幕| 久久人妻熟女aⅴ| 99热网站在线观看| 国产1区2区3区精品| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲第一av免费看| 99国产综合亚洲精品| 日韩伦理黄色片| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产成人精品久久久久久| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产精品免费视频内射| 青春草视频在线免费观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久热这里只有精品99| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 午夜精品国产一区二区电影| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产黄色免费在线视频| 国产精品欧美亚洲77777| 国产片特级美女逼逼视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 色网站视频免费| 国产麻豆69| 中文字幕av电影在线播放| 美女视频免费永久观看网站| 久久亚洲国产成人精品v| 麻豆av在线久日| 一级毛片电影观看| 水蜜桃什么品种好| 午夜免费观看性视频| 人成视频在线观看免费观看| xxx大片免费视频| 热99国产精品久久久久久7| 久久国产精品影院| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产伦理片在线播放av一区| 国产成人精品在线电影| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 黄色毛片三级朝国网站| 三上悠亚av全集在线观看| 国产在线视频一区二区| 亚洲天堂av无毛| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 悠悠久久av| 九草在线视频观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 高清不卡的av网站| 飞空精品影院首页| www.av在线官网国产| bbb黄色大片| 看免费av毛片| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美变态另类bdsm刘玥| 免费在线观看黄色视频的| 下体分泌物呈黄色| 午夜福利免费观看在线| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲国产精品国产精品| 国产黄频视频在线观看| 欧美人与性动交α欧美软件| 高清视频免费观看一区二区| 91麻豆av在线| 在线观看www视频免费| 视频区欧美日本亚洲| 日韩伦理黄色片| 中文字幕高清在线视频| 99久久人妻综合| 精品免费久久久久久久清纯 | 黄片播放在线免费| 亚洲欧美色中文字幕在线| 成年人黄色毛片网站| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美激情 高清一区二区三区| 精品久久蜜臀av无| 亚洲图色成人| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 午夜两性在线视频| 亚洲国产日韩一区二区| 久久这里只有精品19| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久影院123| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 90打野战视频偷拍视频| 一本色道久久久久久精品综合| 下体分泌物呈黄色| 欧美黄色片欧美黄色片| 中文字幕人妻熟女乱码| 一本综合久久免费| 国产主播在线观看一区二区 | 久久久精品94久久精品| 妹子高潮喷水视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 各种免费的搞黄视频| 精品福利观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美性长视频在线观看| kizo精华| 又大又黄又爽视频免费| 中文字幕精品免费在线观看视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 十八禁人妻一区二区| 中文字幕av电影在线播放| 午夜福利免费观看在线| 精品久久久久久电影网| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲,欧美精品.| 日本一区二区免费在线视频| 超碰成人久久| 亚洲,欧美精品.| 日韩制服骚丝袜av| 在线 av 中文字幕| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲国产av影院在线观看| 欧美日韩av久久| 一二三四社区在线视频社区8| 黑人猛操日本美女一级片| 免费少妇av软件| 一级毛片 在线播放| 韩国精品一区二区三区| 美女主播在线视频| 妹子高潮喷水视频| 免费看十八禁软件| 美女国产高潮福利片在线看| 男女之事视频高清在线观看 | 午夜影院在线不卡| 极品人妻少妇av视频| 九色亚洲精品在线播放| 黄色一级大片看看| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品免费久久久久久久清纯 | 一级毛片电影观看| 好男人电影高清在线观看| 精品福利永久在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 少妇精品久久久久久久| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲精品一二三| av片东京热男人的天堂| 亚洲欧美激情在线| 国产av精品麻豆| 欧美大码av| 极品少妇高潮喷水抽搐| 只有这里有精品99| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 高清视频免费观看一区二区| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 美女主播在线视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品偷伦视频观看了| 高清不卡的av网站| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲人成77777在线视频| www.熟女人妻精品国产| 国产在线一区二区三区精| 18在线观看网站| 最近手机中文字幕大全| 国产精品二区激情视频| 国产男人的电影天堂91| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 美女大奶头黄色视频| 亚洲成人手机| 久久毛片免费看一区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产精品国产三级专区第一集| 97人妻天天添夜夜摸| 免费看十八禁软件| 国产日韩欧美视频二区| 男女之事视频高清在线观看 | 又紧又爽又黄一区二区| 国产有黄有色有爽视频| 久久久久久久精品精品| 精品一品国产午夜福利视频| 精品国产一区二区久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲精品av麻豆狂野| 午夜免费男女啪啪视频观看| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲人成电影免费在线| 飞空精品影院首页| 亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | av线在线观看网站| 成年人黄色毛片网站| 欧美精品亚洲一区二区| 国产有黄有色有爽视频| 丁香六月欧美| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产激情久久老熟女| 国产野战对白在线观看| av福利片在线| 久久久精品区二区三区| 久久久久久久久久久久大奶| 婷婷色综合www| 90打野战视频偷拍视频| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲天堂av无毛| 日韩一区二区三区影片| 亚洲黑人精品在线| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 黄色一级大片看看| 久久综合国产亚洲精品| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 国产深夜福利视频在线观看| 一区在线观看完整版| 亚洲成人免费电影在线观看 | 婷婷色综合www| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 一级毛片女人18水好多 | 国产男人的电影天堂91| 国产野战对白在线观看| 国产精品久久久久久精品古装| 久久免费观看电影| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 欧美激情高清一区二区三区| 99久久综合免费| 五月开心婷婷网| 国产99久久九九免费精品| 宅男免费午夜| 国产人伦9x9x在线观看| 久久久精品免费免费高清| 久久久国产一区二区| 国产成人系列免费观看| 桃花免费在线播放| 亚洲少妇的诱惑av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 69精品国产乱码久久久| 国产精品久久久久久精品古装| 国产黄频视频在线观看| 亚洲欧美激情在线| 日韩大码丰满熟妇| 秋霞在线观看毛片| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产精品免费视频内射| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 女性生殖器流出的白浆| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产男女内射视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 啦啦啦在线观看免费高清www| 天天影视国产精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产真人三级小视频在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产成人系列免费观看| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 久久精品亚洲av国产电影网| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 国产在视频线精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 日本欧美国产在线视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 欧美国产精品va在线观看不卡| 性色av乱码一区二区三区2|