蒙藥枸杞子-7與P4503A和GSH-Px活性相關(guān)性研究△

白梅榮 伊麗娜 韓曉靜 王亮亮 廉榮梅

(內(nèi)蒙古民族大學(xué) 內(nèi)蒙古 通遼 028000)

蒙藥枸杞子-7味散處方來源于《觀者之喜》，蒙藥名為朝努音·哈日木格-7，異名為七味龐巴列散(《中國醫(yī)學(xué)百科全書·蒙醫(yī)學(xué)》)、龐巴列-7(《方劑學(xué)》)。該處方由枸杞子、沙棘、木香等7味藥組成。本方性溫，臨床常用于治療婦女血瘀癥[1-3]。本實(shí)驗(yàn)研究枸杞子-7與小鼠肝臟Ⅰ相代謝酶P4503A和Ⅱ相代謝酶谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性的相關(guān)性研究，了解枸杞子-7體內(nèi)代謝過程，為臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器設(shè)備:酶標(biāo)儀、離心機(jī)、P4503A試劑盒、GSH-Px試劑盒、移液槍、AUW120D電子天平(沈陽龍騰電子有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物:40只昆明種小鼠，雄性，體重20±2g，許可證號碼：SCXK(吉)-2011-0004，由長春市億斯實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動物處理方法:取小鼠40只，雄性，隨機(jī)分成正常對照組，枸杞子-7高、中、低劑量組，每組10只，灌胃給藥，1天灌胃1次，連續(xù)灌胃10天，末次給藥10min后，取各組小鼠肝組織，放入冷生理鹽水中洗去浮血，濾紙吸干后稱取0.5g，按1:9加入冷生理鹽水，冷浴勻漿，勻漿液以3000r/min離心10min,得組織上清液，冰箱低溫保存，待測P4503A與GSH-PX酶活性[4-6]。

2.2 P4503A和GSH-Px活性測定方法：從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37度恒溫箱溫育60min，棄去液體，吸水紙上拍桿，每孔加滿洗滌液，靜置1min,甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗版5次。

每孔加入底物A、B各50μL，37度避光孵育15min。

每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。結(jié)果見表。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與正常對照組相比，枸杞子-7高、中、低3個劑量均明顯降低GSH-Px活性(P<0.05)；與正常對照組相比，枸杞子-7中劑量組明顯升高肝組織P4503A活性(P<0.05),結(jié)果見表1。

表1 蒙藥枸杞子-7與P4503A和GSH-Px活性的相關(guān)研究

注：與正常對照組比較※P<0.05

4 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，蒙藥枸杞子-7可能既是GSH-Px抑制劑，又是P4503A誘導(dǎo)劑。枸杞子-7體內(nèi)代謝與P4503A有關(guān)。

5 討論

細(xì)胞色素P450是一種高鐵血紅素的蛋白，廣泛分布于肝臟、小腸等器官,是體內(nèi)最重要的Ⅰ相藥物代謝酶?，F(xiàn)代研究表明[1-2],P4503A占肝臟及腸道中P450酶系總含量的50%以上，參與90%以上口服藥物的催化代謝，因此了解藥物對P4503A酶活性的影響,將對藥物的臨床合理用藥有著十分深遠(yuǎn)的指導(dǎo)意義。

GSH-Px幾乎存在于所有組織和細(xì)胞中，但主要存在于肝臟、結(jié)腸和生殖腺中的Ⅱ相代謝酶之一。主要清除脂類氫過氧化物、清除H2O2、減輕有機(jī)氫過氧化物對機(jī)體的損傷、參與前列腺素合成的調(diào)節(jié)等作用。檢測GSH-Px活性是衡量機(jī)體抗氧化力的重要指標(biāo)。因此，通過藥物與該酶的相關(guān)性研究，可評價其藥物是否存在抗氧化能力。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，①枸杞子-7 明顯下調(diào)肝組織中GSH-Px活性?？梢姡坭阶?7具有明顯的抗氧化作用。②枸杞子-7可明顯上調(diào)肝組織P4503A活性。提示，枸杞子-7體內(nèi)代謝與P4503A有關(guān)，而枸杞子-7通過誘導(dǎo)P4503A活性可加速本身代謝，降低體內(nèi)藥物含量。因此，臨床口服應(yīng)用枸杞子-7時適當(dāng)加大劑量才能保證其臨床有效劑量，發(fā)揮其較好療效。

[1]巴根那.蒙醫(yī)方劑學(xué)[M].呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，2007,112.

[2]布和巴特爾，奧·烏力吉.傳統(tǒng)蒙藥與方劑[M].赤峰：內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，303.

[3]內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生廳編著.內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].赤峰:內(nèi)蒙古科技出版社,1987.

[4] 李平,程建峰.地塞米松、苯巴比妥鈉和利多卡因?qū)ッ鞣N小鼠肝P450 3A酶的影響[J]. 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2001，26-28.

[5] 佘集凱,薩仁高娃,霍萬學(xué),等. 地錦草提取物對小鼠肝組織GSH- PX和CAT活性的影響[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2005,191-139.

[6] 王傳鵬. 芹菜素對雄性小鼠肝臟 SOD、GSH-Px、CAT活力影響[J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2013,21-22.