食用植物油中外源性物質(zhì)辣椒素的檢測技術(shù)研究

王月華，房 濤，劉 紅，程芳園，王 萍，王秀華

1. 山東三星玉米產(chǎn)業(yè)科技有限公司 (濱州 256200)2. 濱州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所 (濱州 256600)

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食用植物油中外源性物質(zhì)辣椒素的檢測技術(shù)研究

王月華1，房 濤1，劉 紅2，程芳園1，王 萍1，王秀華1

1. 山東三星玉米產(chǎn)業(yè)科技有限公司 (濱州 256200)2. 濱州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所 (濱州 256600)

以食用植物油為研究對象，進(jìn)行了食用植物油中外源性物質(zhì)辣椒素的檢測技術(shù)研究，方法為：樣品置于刻度管中，用色譜甲醇渦旋震蕩進(jìn)行兩相萃取，過濾取上層清液，重復(fù)上述過程1次，然后再經(jīng)0.22 μm有機(jī)膜過濾，濾液蒸干，用甲醇復(fù)溶進(jìn)樣分析，以甲醇水為流動相，通過液相色譜-紫外檢測器進(jìn)行分析。結(jié)果為：測定辣椒堿、二氫辣椒堿方法的線性范圍為20.00～100.00 μg/L，線性相關(guān)系數(shù)分別為0.995 7和0.987 1，檢出限分別為10 μg/kg、10 μg/kg，回收率分別為89.3%～92.6%、89.5%～102.9%。

辣椒堿；二氫辣椒堿；高效液相色譜法

植物油脂的摻偽一直是業(yè)界面臨的一大難題，不法商販將價格便宜的植物油如棕櫚油、棉籽油等摻到價格較高的花生油、玉米油等油中，牟取暴利，各實(shí)驗(yàn)室針對這種情況，開展了大量的油脂摻偽研究，如根據(jù)油脂的脂肪酸組成或甘油三酯等價碳原子數(shù)分布情況進(jìn)行判定。同時還有社會上的不良人員及企業(yè)為了牟取更高的暴利，置人民大眾的身體健康于不顧，將餐廚棄廢油(地溝油)收集后，經(jīng)過酸煉、脫色、過濾等加工提煉后當(dāng)做食用油低價出售[1-2]。地溝油經(jīng)過精煉脫臭處理后，特別是按一定比例與合格的食用植物油勾兌，不僅在外觀上與普通的植物油極其相似，在常見的理化指標(biāo)如酸價、過氧化值及衛(wèi)生指標(biāo)苯并芘、真菌毒素和農(nóng)藥殘留方面也沒有明顯的區(qū)別[3-4]。

目前，國內(nèi)外多家實(shí)驗(yàn)室均對地溝油的判別展開了研究，主要研究對象為植物油本身并不含有、在烹飪過程中加入且與油脂互溶不易去除的各種調(diào)味品成分。辣椒素以其使用廣泛、熱穩(wěn)定性好、脂溶性好，在植物油中本身不存在且加工過程不易去除等特點(diǎn)，成為了人們的研究熱點(diǎn)。本試驗(yàn)利用甲醇與食用植物油互不相溶，辣椒堿及二氫辣椒堿在甲醇的溶解度大于油脂的特點(diǎn)，采用兩相萃取法對辣椒素與二氫辣椒素進(jìn)行提取，優(yōu)化簡化提取方法，旨在為地溝油的判別方法起到一定的推動作用。

1 材料和方法

1.1 主要儀器

Waters2695高效液相色譜儀，配備waters2475熒光檢測器; FA2004型電子天平；WH-861渦旋混合器；HGC-12A型金屬浴。

1.2 試劑與樣品

辣椒堿及二氫辣椒見標(biāo)準(zhǔn)品，美國ChromaDex公司；乙腈、甲醇，色譜純，天津市康科德科技有限公司；定性濾紙，撫順市民政濾紙廠；針式過濾器(0.22 μm膜)，天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；精制玉米油，山東三星玉米產(chǎn)業(yè)科技有限公司；地溝油樣品10個，實(shí)驗(yàn)人員外出收集的飯店殘油，實(shí)驗(yàn)室模擬精煉而得。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2 g油脂于25 mL刻度管中，準(zhǔn)確加入10 mL色譜甲醇，渦旋震蕩3 min，以3 000 r/min離心3 min，取上層上清液；再用10 mL的色譜甲醇

重復(fù)提取1次，合并上清液。合并的上清液用濾紙過濾，再用孔徑為0.22 μm的有機(jī)膜過濾，蒸干，用甲醇復(fù)溶準(zhǔn)備進(jìn)樣。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

將10 mg辣椒堿，10 mg二氫辣椒堿標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至50 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容。該儲備標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為辣椒堿200 mg/L，二氫辣椒堿200 mg/L。然后再用甲醇依次稀釋成20、40、60、80、100 μg/L(辣椒堿與二氫辣椒堿濃度相同)。

1.5 辣椒素的測定色譜條件及譜圖

參照農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 1381—2007《辣椒素的測定 高效液相色譜法》，并對流動相比例、流動相以及檢測器的選擇上做了一定的優(yōu)化，見圖1。

色譜柱: Atlantis T3柱，5 μm×4.6 mm×250 mm；流動相，甲醇∶超純水=65∶35，流速:1.0 mL/min。紫外檢測器:波長280 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量20 μL。

圖1 上述色譜條件的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 辣椒堿及二氫辣椒堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

將1.4中配制的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度溶液，用高效液相色譜儀按1.5中規(guī)定的方法測定其峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，得出線性回歸方程。標(biāo)樣濃度及對應(yīng)的峰面積見下表1。

表1 液相色譜法測定辣椒素標(biāo)樣的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)

2.2 樣品加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)分析和精密度計(jì)算

取空白的精制玉米油進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，添加回收實(shí)驗(yàn)方法為：從1.4中取一定體積的辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品于25 mL刻度管中，在金屬浴上烘干甲醇。準(zhǔn)確稱取2 g空白精制玉米油于刻度管中，渦旋混勻3 min，后準(zhǔn)確加入10 mL色譜甲醇并按1.3繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。分別進(jìn)行3個不同濃度的加標(biāo)收測定，每個濃度平行做3分，每份平行測定5次，測定回收率及精密度，見表2。

表2 高效液相色譜法的添加回收率和精密度試驗(yàn)

2.3 流動相比例(有機(jī)相含量)對峰形的影響

本實(shí)驗(yàn)中借鑒農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 1381—2007《辣椒素的測定 高效液相色譜法》，流動相比例為甲醇+水=80+20，雖然標(biāo)準(zhǔn)樣品峰型較好交峰寬在1 min左右，但陽性樣品在二氫辣椒堿處有雜質(zhì)，存在峰分叉情況，影響了結(jié)果的準(zhǔn)確性，見圖2。實(shí)驗(yàn)中經(jīng)過對流動相比例的調(diào)整，將甲醇的含量降低至65%，從圖3可以看出，二氫辣椒堿的保留時間后移，與雜質(zhì)峰分開，易于判斷，保證了檢測的準(zhǔn)確性。

2.4 樣品分析圖譜

采用上述所建立的樣品處理方法和儀器進(jìn)樣方法，測試了一個精制玉米油與搜集的地溝油樣品，從圖4和圖5中可以看出，精制玉米油中未檢出辣椒堿和二氫辣椒堿，地溝油中檢測出了此二者成分。由于本實(shí)驗(yàn)中僅對收集10個樣品進(jìn)行檢測，未進(jìn)行大量的樣品量分析，所以無法進(jìn)行陽性及陰性檢出率的評價。

圖2 流動相甲醇+水=80∶20陽性樣品色譜圖

圖3 流動相甲醇+水=65∶35陽性樣品色譜圖

圖4 精制玉米油的色譜圖

圖5 地溝油樣品的色譜圖

3 結(jié)論

本文采用高效液相色譜法，建立了食用油中外源性物質(zhì)辣椒素與二氫辣椒素的分析方法，該方法樣品處理簡單，檢測迅速，方法準(zhǔn)確度好，易推廣，在此基礎(chǔ)上將進(jìn)一步開發(fā)，為地油的判別提供一種新的思路。

[1] 章慧芳, 錢 錦, 蔡新安，等. 潲水油脫色工藝的研究[J]. 景德鎮(zhèn)高專學(xué)報(bào), 2008, 23(4):5-6.

[2] 毛新武, 賈 煦, 胡國媛，等. 潲水油等廢棄食用油脂檢測指標(biāo)的建立研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2007, 17(2):258-260.

[3] 楊冬艷, 楊小柯, 楊永存，等. 潲水油聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)鑒定技術(shù)研究[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志, 2011, 23(3):255-260.

[4] 毛麗莎, 仲岳桐, 盧紫燕，等. 潲水油中辣椒素檢測技術(shù)研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2013,23(3):544-550.

Research on the detection technology of exogenous substances such as capsaicin in edible vegetable oil

Wang Yuehua1, Fang Tao1, Liu Hong2, Cheng Fangyuan1, Wang Ping1, Wang Xiuhua1

1.Shandong Sanxing Corn Industry Technology Co., Ltd. (Binzhou 256200) 2. Binzhou Product Quality Supervision and Inspection (Binzhou 256600)

The vegetable oil was taken as the research object, and the exogenous substances of capsaicin in edible vegetable oil were analyzed. The oil sample and quantitative methanol were put into test tube for two phase extractions under the eddy turbulence. The supernatant fluid filtration was taken and the above process was repeated again. All the supernatant fluid was used to filtration by organic membrane with 0.22 μm. The filtrate was dried, dissolving with methanol. The HPLC with UV detector was used to analysis with mobile phase of methanol and water. The results show that the liner range of the two capsaicinoids is 20.00～100.00 μg/L, and the correlation coefficients of the standard cure are 0.995 7 and 0.987 1. The limits of detection are 10 μg/L, 10 μg/L. The recoveries rates of the two capsaicins are 89.3%～92.6%, 89.5%～102.9%.

capsaicin; dihydro capsaicin; high performance liquid chromatography

2016-11-27

王月華，女，1969年出生，高級工程師，主要從事玉米油精深加工技術(shù)的研發(fā)工作。

TS207.3

A

1672-5026(2017)02-056-03