新操作規(guī)程下制備洗滌紅細胞的臨床應(yīng)用

毋明蕊

新操作規(guī)程下制備洗滌紅細胞的臨床應(yīng)用

毋明蕊

目的 結(jié)合實際工作需要，完善洗滌紅細胞制備環(huán)節(jié)，保證臨床使用安全有效。方法 參考《血站技術(shù)操作規(guī)程（2012版）》中洗滌紅細胞的制備過程，結(jié)合本站質(zhì)控科每月的檢測結(jié)果，對制備方法進行相應(yīng)的改進。收集改進前后的檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。結(jié)果 方法改進后，上清蛋白含量、游離血紅蛋白含量的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001），溶血率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），血紅蛋白含量和紅細胞壓積的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 改進后的制備方法更符合本站實際工作的需要。

洗滌紅細胞 操作規(guī)程 改進 體會

為進一步加強血站管理，提高血液質(zhì)量安全，原衛(wèi)生部2011年12月印發(fā)《血站技術(shù)操作規(guī)程（2012版）》，自2012年6月1日起施行。鑒于其中對洗滌紅細胞制備過程有了明確的要求，結(jié)合本站實際工作，現(xiàn)對成分科工作人員于2012年8月～2015年5月制備洗滌紅細胞過程中出現(xiàn)的問題進行反復(fù)探討，并對相應(yīng)步驟進行適當改進，使質(zhì)控抽檢結(jié)果完全符合GB18469-2012《全血與成分血質(zhì)量要求》（以下簡稱《質(zhì)量要求》），臨床輸注更加安全可靠?，F(xiàn)將制備洗滌紅細胞過程中的方法改進和體會總結(jié)如下。

材料與方法

1 樣本收集 2012年8月～2013年12月共制備洗滌紅74袋，嚴格按2012版《血站技術(shù)操作規(guī)程》的方法進行制備，質(zhì)控每月抽檢4袋，全月制備總數(shù)不足4袋的按實際制備袋數(shù)抽檢，共抽檢30袋。2014年1月對方法進行改進，2014年1月～2015年5月共制備洗滌紅184袋，按同樣抽檢原則共抽檢59袋。

2 設(shè)備與試劑 CR7大容量離心機 （日立），TSCD-Ⅱ無菌接管機（日本泰爾茂），三聯(lián)鹽水袋（上海輸血技術(shù)有限公司），XD811半自動生化分析儀（上海迅達醫(yī)療有限公司），KX-21全自動血細胞分析儀（日本希森美康sysmex），游離血紅蛋白試劑盒（北京瑞達爾生物科技有限公司），腦脊液總蛋白試劑（濰坊三維生物工程集團有限公司）。

3 方法

3.1 改進前方法：嚴格遵守2012版《血站技術(shù)操作規(guī)程》3.10.3方法制備。選用去白懸浮紅細胞為原料血。離心條件為3 490 g，8 min，洗滌紅成品采用生理鹽水懸浮，保存24 h。

3.2 改進后的方法

3.2.1 取經(jīng)檢驗合格的去白細胞懸浮紅細胞與四聯(lián)鹽水袋（3個250 ml的0.9%生理鹽水的袋子連一個空轉(zhuǎn)移袋），用無菌接駁機聯(lián)接好。待用洗滌溶液聯(lián)袋提前放置冷藏保存，無破損滲漏，溶液外觀正常，在有效期內(nèi)。

3.2.2 離心：配平離心3 490 g，8 min、溫度設(shè)為4℃（整個過程皆用此離心條件）。將上清液完全分出至白膜層下2 mm。

3.2.3 注入鹽水：打開第一個生理鹽水袋（250 ml，共3個生理鹽水袋），向紅細胞袋內(nèi)加入150 ml左右生理鹽水混合均勻（剩余生理鹽水用夾子夾好供成品洗滌紅細胞添加使用）。

3.2.4 分離：離心后的三聯(lián)鹽水袋置分漿夾上，觀察上清液與紅細胞是否分界清晰，打開轉(zhuǎn)移袋導(dǎo)管將上清液完全分出即可，向紅細胞袋內(nèi)加入250 ml生理鹽水，用夾子夾住導(dǎo)管，手工充分混勻。

3.2.5 成品判斷：重復(fù)3.2.4步驟2次，共洗滌3次，最后一次觀察上清液外觀，如果符合《質(zhì)量要求》對洗滌紅的外觀要求，加入50 ml/U鹽水，完成制備。如果上清呈現(xiàn)輕度紅染或其他色澤異?，F(xiàn)象，則分析原因，按步驟3.2.4中離心參數(shù)設(shè)置適當增加洗滌次數(shù)，直至目視符合《質(zhì)量要求》中洗滌紅外觀的要求后再制備成品。

3.2.6 熱合，貼簽，入庫。

4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析，采用t檢驗。

結(jié) 果

1 改進后上清蛋白含量和游離血紅蛋白含量較改進前有明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001），儲存末期溶血率有所下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；血紅蛋白含量和紅細胞壓積的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 制備洗滌紅細胞方法改進前后的結(jié)果比較

2 檢測標準 本次質(zhì)控抽檢樣本均來自2 U的去白懸浮紅細胞，即標準為：上清蛋白含量＜1 g/L，血紅蛋白含量≥36 g/L，溶血率＜紅細胞總量的0.8%。

討 論

因為我站的洗滌紅制備是全手工制備，細節(jié)的把控對制備結(jié)果有重要影響。GB18469-2012《全血與成分血質(zhì)量要求》中對洗滌紅細胞的質(zhì)量標準由原來的上清蛋白清除率≥98%變?yōu)樯锨宓鞍缀浚? g/L，從相對值變?yōu)榻^對值，對上清蛋白的清除有了更高的要求。實際工作中，用來制備洗滌紅細胞的原料血是去白懸浮紅細胞，是相對于懸浮紅細胞更適合制備洗滌紅的血液成分［1］。但根據(jù)改進前方法制備的洗滌紅細胞上清蛋白含量一直處于較高水平，甚至出現(xiàn)2例檢測結(jié)果超出《全血與成分血質(zhì)量要求》的質(zhì)量標準。其實質(zhì)可以理解為紅細胞沒有被充分洗滌干凈。據(jù)文獻［2］報道，洗滌紅細胞使用生理鹽水的多少決定血漿蛋白清除率的高低，血漿蛋白清除率高低與生理鹽水用量成正比。同理可得結(jié)論，適當減少預(yù)洗滌紅細胞中血漿蛋白的含量和適當增加生理鹽水的用量，均可減少成品洗滌紅細胞中血漿蛋白的含量。在此我們做了兩方面改進：①洗滌前通過離心分離將血漿最大限度分出，減少預(yù)洗滌紅細胞中血漿蛋白的含量。根據(jù)文獻［3］報道高速結(jié)合離心和純高速離心制備的洗滌紅對紅細胞脆性無明顯影響（P＞0.05）。本文的數(shù)據(jù)分析也表明儲存末期溶血率在增加離心次數(shù)前后并沒有明顯改變，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。②將洗滌過程中生理鹽水用量由每次100 ml/U更改為每次250 ml/U，這個步驟的變化，一方面使紅細胞被充分洗滌；另一方面，我們使用的四聯(lián)鹽水袋單袋容量為250 ml，直接加完即可，便于操作。此項改進保證了血漿蛋白含量檢測全部合格，且均值明顯低于改進前數(shù)值。

對于2例血紅蛋白含量低于質(zhì)量要求，分析原因是改進前對擠上清液的程度并沒有明確說明，因此工作人員在制備過程中不易把握，造成離心后分離上清時紅細胞被過度分離。血紅蛋白含量檢測是GB18469-2012《全血與成分血質(zhì)量要求》中新增加的項目，目的是保證洗滌紅細胞的臨床輸注效果。而在如何既能保證上清蛋白最大限度的清除，又要使血紅蛋白含量達到質(zhì)量要求，是我們遇到的另一個問題。因此我們在第一步離心分離后直接將分界層下2 mm紅細胞直接分出，其余步驟離心后只最大限度分出上清，不得有紅細胞損失，改進后血紅蛋白含量檢測全部合格，而且紅細胞壓積的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。

我站采用生理鹽水保存洗滌紅細胞有效期為24 h，為保證質(zhì)控留樣能準確反映產(chǎn)品質(zhì)量，要求質(zhì)控檢測在洗滌紅細胞有效期內(nèi)進行，保證結(jié)果準確性和說服力。

我站屬年供血量約十噸的中小型血站，洗滌紅的年用量約110 U，采用24 h預(yù)約制，屬隨時預(yù)約隨時制備，完全手工制備，因此對制備過程的嚴謹性和制備環(huán)節(jié)的精確性都有較高的要求。鑒于有文獻［4］已論證用MAP做為洗滌紅保存液能延長保存期、更適合存放的觀點，我們會配合改進后的方法進一步分析，以期總結(jié)出一套更適合具體工作的制備方法，最大限度保證臨床輸注的安全性和及時性。

1 劉穎，康煒，周世航. 兩種原料血制備洗滌紅細胞的效果分析[J]. 臨床輸血與檢驗，2011，13（3）：267-268.

2 沈莉，李建民，梁曉虎，等. 提高洗滌紅細胞制品質(zhì)量的探討[J].河北醫(yī)藥，2006，28（8）：710-711.

3 吳威艷.確保制備洗滌紅細胞質(zhì)量的探討[J].廣東醫(yī)學(xué)，1996，17（7）：456-457.

4 王惟，譚菲，柴婷婷. 洗滌紅保存期延長效果研究[J]. 臨床輸血與檢驗，2015，17（1）：70-71，

R331.1+41

A

1671-2587（2017）02-0113-03

2016-11-15）

（本文編輯：王敏）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.02.004

472000 河南省三門峽市中心血站

毋明蕊（1985– ），女，河南三門峽人，主管技師，學(xué)士，主要從事血液檢測、質(zhì)量控制、血液成分制備等工作，（Tel）13663083840（E-mail） mingrui-2003@163. com。