HPLC法測(cè)定鹽酸左氧氟沙星片的含量

曹喜紅

摘要：目的 對(duì)HPLC及UV測(cè)定鹽酸左氧氟沙星片的含量進(jìn)行比較。方法 高效液相色譜法選擇色譜柱為Agilent C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為醋酸銨高氯酸鈉溶液（pH=2.2）-乙腈（85∶15），流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為294 nm；紫外分光光度法選擇294 nm波長(zhǎng)測(cè)定含量。結(jié)果 HPLC法中鹽酸左氧氟沙星片在2.05～51.15 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?；貧w方程Y=523247X-23331（r=0.9995），加樣回收率平均值為100.36%，RSD 1.8%。結(jié)論 HPLC法及紫外分光光度法均準(zhǔn)確性、重復(fù)性高、精密度好，可考慮將紫外分光光度法作為鹽酸左氧氟沙星含量測(cè)定的替代方法使用。

關(guān)鍵詞：高效液相法；紫外分光光度法；鹽酸左氧氟沙星

左氧氟沙星是氧氟沙星的L-型光學(xué)活性異構(gòu)體，因其抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)、不良反應(yīng)率較低，而被廣泛使用[1]。2015版藥典推薦高效液相法來分析本品及其相關(guān)劑型，考慮到基層藥物監(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)尚不能完全普及高效液相設(shè)備[2]。本文對(duì)比分析高效液相法及紫外分光光度法測(cè)定鹽酸左氧氟沙星的含量。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥 島津LC-2010CHT型高效液相色譜儀；島津UV-2450型紫外分光光度計(jì)；超聲波清洗器；乙腈為色譜醇；磷酸、醋酸銨、高氯酸鈉均為分析純；鹽酸左氧氟沙星對(duì)照品（批號(hào)：130455-20116）；鹽酸左氧氟沙星片（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）。

1.2方法

1.2.1高效液相法

1.2.1.1色譜條件[2] 色譜柱選擇Agilent C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：醋酸銨高氯酸鈉溶液（取醋酸銨4.0 g和高氯酸鈉7.0 g，加水1300 ml使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.2）-乙腈（85∶15），檢測(cè)波長(zhǎng)：294 nm， 進(jìn)樣量10 μl，1.0 ml/min流速，柱溫為室溫（25℃）。

1.2.1.2溶液的制備 ①供試品溶液的制備：精密稱取20片鹽酸左氧氟沙星，研細(xì)后混合均勻，精密稱取上述供試品50 mg置于50 ml容量瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸溶解適量并定量稀釋至刻度，經(jīng)微孔濾膜（0.45 μm）過濾，取續(xù)濾液待用。②對(duì)照品溶液的制備：精密稱取鹽酸左氧氟沙星對(duì)照品10.23 mg于100 ml容量瓶中，用適量0.1 mol/L鹽酸稀釋至刻度，搖勻即得。

1.2.1.3方法學(xué)考察 ①精密度試驗(yàn)：在“1.2.1.1”色譜條件下，對(duì)照品溶液過0.45 μm濾膜后重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μl，分別測(cè)定峰面積，并計(jì)算6組數(shù)據(jù)所得的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果為 1.7%<2.0%，符合藥典規(guī)定，提示本組方法精密度良好。②重復(fù)性試驗(yàn)：選擇同批號(hào)鹽酸左氧氟沙星片6份，精密稱定后，根據(jù)供試品“1.2.1.2①”項(xiàng)操作制備供試品溶液，采用“1.2.1.1”項(xiàng)色譜條件，進(jìn)樣10 μl，采集6份樣品的色譜圖，計(jì)算溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.3%（<2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，提示本組方法具有較好的重復(fù)性。③穩(wěn)定性試驗(yàn)：于2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取供試品溶液，采用相同色譜條件，進(jìn)樣10 μl，根據(jù)測(cè)得的色譜峰面積，供試品組RSD為1.6%<2.0%，提示供試品溶液在24 h內(nèi)較為穩(wěn)定。④回收率考察：精密移取“1.2.1.2①”項(xiàng)供試液2 ml于10 ml容量瓶中，保存至3個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，依次加鹽酸左氧氟沙星對(duì)照品溶液1 ml、2 ml和3 ml，加0.1 mol/L鹽酸定容至刻度，過0.45 μm微孔濾膜后取續(xù)濾液，進(jìn)樣10 μl，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定，得到回收率分別為：100.24%、100.48%和100.23%，平均100.36%，RSD 1.8%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符。

1.2.1.4線性關(guān)系考察 采用移液管精密移取“1.2.1.2②”下對(duì)照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，使用0.1 mol/L鹽酸稀釋至刻度，澄清后，采用0.45 μm微孔濾膜過濾，得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。結(jié)合對(duì)應(yīng)色譜條件，進(jìn)樣10 μl，測(cè)定樣品色譜峰面積，以峰面積和濃度為坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程為：Y=523247X-23331（r=0.9995），提示，鹽酸左氧氟沙星濃度在2.05～51.15 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積存在良好的線性關(guān)系。

1.2.2紫外分光光度法 精密取鹽酸左氧氟沙星對(duì)照品10.31 mg于100 ml容量瓶中，加水溶解后定容至刻度，配置不同濃度的對(duì)照品溶液，以水為空白對(duì)照，測(cè)定其吸光度，并以吸光度及濃度進(jìn)行線性回歸，得到線性方程為：Y=43234X-25431（r=0.9997），結(jié)果表明，鹽酸左氧氟沙星濃度在2.06～51.55 μg/ml范圍內(nèi)與吸光度存在較好線性關(guān)系；另取鹽酸左氧氟沙星20片，研細(xì)后精密稱取100 mg于100 ml容量瓶中，加水溶解后定容至刻度，取上述溶液5 ml于50 ml容量瓶中，加水定容至刻度作為供試品，以水為空白對(duì)照，測(cè)定吸光度。參考“1.2.1.3①～④”項(xiàng)過程并結(jié)合2015版藥典，對(duì)紫外分光光度法進(jìn)行精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果上述RSD均<2%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符。

1.2.3樣品中鹽酸左氧氟沙星含量測(cè)定 結(jié)合上述檢測(cè)條件，分別測(cè)定鹽酸左氧氟沙星對(duì)照品溶液與3批鹽酸左氧氟沙星片供試品溶液（取供試品0.1 g），高效液相色譜法及紫外分光光度法均采用自身對(duì)照法對(duì)供試品內(nèi)含有的鹽酸左氧氟沙星含量進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果

紫外分光光度法測(cè)定鹽酸左氧氟沙星片中鹽酸左氧氟沙星平均含量（與標(biāo)識(shí)量比較）為（100.29±0.015）%，而高效液相色譜法測(cè)定的平均含量為（100.27±0.031）%，兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

3 討論

結(jié)果可知，高效液相色譜法測(cè)定的鹽酸左氧氟沙星含量略低于紫外分光光度法，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），因高效液相法通過色譜柱的分離作用，將鹽酸左氧氟沙星制備過程中的有關(guān)物質(zhì)、雜質(zhì)等干擾有效分離，進(jìn)而可提高其檢測(cè)的準(zhǔn)確性，但本組結(jié)果提示，紫外分光光度法所測(cè)含量與高效液相方法所測(cè)結(jié)果較為接近，可能是因輔料及鹽酸左氧氟沙星片中相關(guān)雜質(zhì)在293 nm處吸收較弱，對(duì)本品影響較小導(dǎo)致。

綜上所述，高效液相法及紫外分光光度法測(cè)定鹽酸左氧氟沙星含量的方法準(zhǔn)確性高、精密度好、重現(xiàn)性均符合相關(guān)要求，但因高效液相法對(duì)設(shè)備要求較高，對(duì)基層機(jī)構(gòu)來說，可考慮將紫外分光光度法作為本品含量測(cè)定的替代方法使用。

參考文獻(xiàn)：

[1]洪麗萍，蔡亞蘭，黃加秀，等.RP-HPLC法測(cè)定鹽酸左氧氟沙星片的含量[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2013，8（32）：256-257.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：154-155.

編輯/王海靜