黎藥復(fù)體力湯抗疲勞和增強免疫力功能研究

李誠叢+高香奇+周星

【摘要】目的：研究海南黎藥復(fù)體力湯對運動小鼠抗疲勞和增強免疫力作用，為藥物開發(fā)提參考依據(jù)。方法：使用小鼠為實驗對象進行海南黎藥復(fù)體力湯抗疲勞和增強免疫力試驗。結(jié)果：抗疲勞試驗中，高劑量組（30g/kg·bw）小鼠游泳至力竭的時間、小鼠肝組織中SOD的活性與對照組比較，均有明顯延長或增加（P<005）， MDA濃度顯著減少（P<001）；增強免疫力試驗中，高劑量組（30g/kg·bw）能極顯著提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、conA誘導(dǎo)小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力、碳廓清能力和巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力（P<001）。結(jié)論：海南黎藥復(fù)體力湯具有抗疲勞和增強免疫力的效果。

【關(guān)鍵詞】海南黎藥；復(fù)體力湯；抗疲勞功能；增強免疫力功能

【中圖分類號】R96【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）05-0060-03

黎藥是黎族人民傳統(tǒng)使用的民間藥物的簡稱，是黎族用以保健、預(yù)防和治療疾病的物質(zhì)[1]。黎藥復(fù)體力湯是將多種黎藥藥材搭配做成的湯劑，處方主要由雞血藤、杜仲、千斤拔、七葉蓮、散血丹、牛大力等組成。前期對黎藥復(fù)體力湯的提取工藝和安全性進行研究評價顯示，黎藥復(fù)體力湯屬于實際無毒級，未顯示有急性、亞急性和遺傳毒性作用[2-3]。根據(jù)安全性研究結(jié)果，現(xiàn)進行黎藥復(fù)體力湯的抗疲勞和增強免疫力試驗，為開發(fā)具有抗疲勞和增強免疫力功能的海南黎藥復(fù)體力湯提供理論依據(jù)。

1儀器與材料

11儀器3K-18超速離心機（美國SIGMA公司）；UV2550紫外分光光度計（日本SHIMADZU公司）；MOC-15二氧化碳培養(yǎng)箱（日本三洋）、ST-260酶標(biāo)儀（上?？迫A）、SW-CJ-2FD超凈工作臺（蘇州凈化）、Nikon 50i顯微鏡（日本尼康）、YSQ-LS-50SF高壓滅菌器（江陰濱江）、XM7E-8112恒溫水?。ㄉ虾＞辏RH-150L生化培養(yǎng)箱（上海一恒）、游標(biāo)卡尺（精密度002mm）（上海九量）、AUW220D電子分析天平（日本島津）。

12藥物牛磺酸（500mg/片，批號 012022，美國GNC健安喜）。黎藥復(fù)體力湯由海南省五指山市黎族民間醫(yī)藥研究協(xié)會提供處方和藥材。取配方量的藥材，反復(fù)加水，煎煮3次，每次3h，合并三次濾液濃縮成所需濃度。

13動物SPF級昆明種小鼠，由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實驗動物科技服務(wù)部提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2009-0012。飼養(yǎng)環(huán)境為屏障級。

14統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS100軟件處理，以均數(shù)加減標(biāo)準差（x±s）表示，方差齊時采用t檢驗，方差不齊時采用t′檢驗，P<005表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2方法

21抗疲勞試驗選取檢疫合格小鼠50只，按體重隨機分為復(fù)體力湯高劑量組、中劑量組、低劑量組、陰性對照組和陽性對照組，每組雌雄各半。高、中、低劑量組給藥劑量分別為生藥30g/kg、20g/kg、10g/kg（分別相當(dāng)于人體推薦劑量的15、10和5倍），陰性對照組給予等體積純化水，陽性對照組為800mg/kg?；撬?，配制成濃度80mg/mL?；撬崛芤菏褂?，配制方法：取4片牛磺酸片，入研缽研碎，加入25mL氯化鈉注射液，混勻即得。各組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)21d，灌胃體積均為01mL/10g體重。

221小鼠5%負重游泳試驗[4]末次給藥1h后，將小鼠置于游泳箱中，注水保持溫度于（25±2）℃（最適宜小鼠游泳溫度），于尾部上方負重該小鼠體重5%重量的保險絲，負重過程中不影響小鼠運動。放入水池后開始記錄時間至小鼠沉入水池底部力竭為止。力竭標(biāo)準：小鼠沉入水中超過10s，且放在平面上無法完成翻整反射。記錄游泳開始到小鼠力竭的時間。

212小鼠力竭運動后血清中SOD/MDA測定試驗[5]在小鼠5%負重游泳試驗計時結(jié)束后，將力竭小鼠眼球取血，加入離心管中，1500rpm離心10min，備用。SOD/MDA的測定按南京建成生物工程研究所提供的試劑盒給出的方法進行。

22增強免疫力試驗[6]選取體重18～22g的KM小鼠200 只，雄性，每40 只小鼠1 個大組，共分5 個大組。分別進行碳廓清試驗（免疫Ⅰ組），ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗、NK細胞的活性試驗（免疫Ⅱ組），臟體比值測定、半數(shù)溶血值（HC50）的測定和抗體生成細胞數(shù)的測定（免疫Ⅲ組），遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗（免疫Ⅳ組），小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗（免疫Ⅴ組） 。每大組40 只小鼠按照體重隨機分為4 個小組，分別為對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組。高、中、低劑量同抗疲勞試驗，對照組給予等體積純化水。各組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)30d，灌胃體積均為01mL/10g體重[7]。連續(xù)灌胃30d后測各項指標(biāo)，包括細胞免疫功能指標(biāo)、體液免疫功能指標(biāo)、單核-巨噬細胞吞噬指標(biāo)及NK細胞活性測定。

3結(jié)果

31 抗疲勞試驗

311小鼠5%負重游泳試驗與陰性對照組比較，高劑量組小鼠負重游泳時間，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<005）；陽性對照組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<001）；其余劑量組分別無統(tǒng)計學(xué)差異（P>005）。見表1。

312小鼠力竭運動后血清中SOD/MDA測定試驗高劑量組小鼠力竭運動后血清中SOD測定值有明顯提高、MDA測定值顯著下降，兩者分別與對照組比較，均有統(tǒng)計學(xué)差異（P<005，P<001）；中、低劑量組分別與對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>005）。見表2。

32增強免疫力試驗

321黎藥復(fù)體力湯對小鼠細胞免疫功能的影響高劑量組小鼠足跖腫脹度和淋巴細胞增殖能力均明顯分別高于對照組（P<001），表明受試物可提供小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力和小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力。見表3。

322黎藥復(fù)體力湯對小鼠體液免疫功能的影響各劑量組小鼠溶血空斑數(shù)、半數(shù)溶血值分別與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>005）。見表4。

323黎藥復(fù)體力湯對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能的影響

3231巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力各劑量組小鼠吞噬率平方根反正弦轉(zhuǎn)換值、吞噬指數(shù)與陰性對照組比較，高劑量組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<001），低劑量組和中劑量組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>005）。見表5。

3232碳廓清試驗各劑量組吞噬指數(shù)與對照組的比較，高劑量組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<001）；低劑量組和中劑量組，無統(tǒng)計學(xué)意義（P>005）。見表6。

325黎藥復(fù)體力湯對小鼠體重的影響和臟器比值的測定

3251黎藥復(fù)體力湯對小鼠體重的影響各劑量組試驗前、試驗中期、試驗?zāi)┢谛∈篌w重與對照組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>005）。

3252黎藥復(fù)體力湯對小鼠免疫器官臟器比值的影響各劑量組小鼠脾臟/體重比值、胸腺/體重比值與對照組的比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>005）。見表8。

4結(jié)論與討論

隨著社會節(jié)奏的加快，社會競爭日益激烈，疲勞已成為威脅人類健康的重要因素。因而延緩疲勞的發(fā)生和促進疲勞的恢復(fù)成為營養(yǎng)衛(wèi)生學(xué)、航天醫(yī)學(xué)、軍事醫(yī)學(xué)、運動醫(yī)學(xué)、保健醫(yī)學(xué)、康復(fù)醫(yī)學(xué)等學(xué)科的研究重點。近年來，在民間醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代科學(xué)實驗基礎(chǔ)上，不少學(xué)者在中藥抗疲勞方面做了大量的工作，取得了一定成效。海南黎藥復(fù)體力湯是海南黎族民間長期使用且具有良好效果的經(jīng)驗方，該方對于身體虛弱者可以增強體力，緩解體力疲勞，解除人體亞健康狀態(tài)。牛磺酸具有促進有機體免疫力的增強和抗疲勞的作用，是臨床上用于抗疲勞的常用藥物之一，本課題通過與?；撬岬目蛊谛Ч容^，顯示黎藥復(fù)體力湯抗疲勞效果與?；撬嵯喈?dāng)，但?；撬徇^多使用會增加人體血壓和心率，影響心臟功能，但黎藥復(fù)體力湯由多種中草藥組成，具有延緩并消除疲勞、改善激素分泌，無明顯不良發(fā)應(yīng)，且黎藥復(fù)體力湯還具有增強免疫力的功能。

經(jīng)過21d連續(xù)灌胃海南黎藥復(fù)體力湯，高劑量組（30g/kg）和陽性對照組小鼠的力竭游泳時間比陰性對照組明顯延長（P<005，P<001），能顯著提高小鼠肝組織中SOD的活性（P<005，P<001）、降低MDA濃度（P<001），表明該方可阻止細胞膜的脂質(zhì)過氧化，有利于運動耐力的提高，減少有氧代謝產(chǎn)物的生成，從而降低體內(nèi)能源物資的消耗，延緩疲勞的發(fā)生，有明顯的抗疲勞和抗氧化功能。中、低劑量組的力竭游泳時間、SOD活性和MDA濃度與陰性對照組比較，均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>005），高劑量組的與?；撬彡栃詫φ战M抗疲勞作用效果相當(dāng)，提示該方具有開發(fā)意義。

經(jīng)口灌胃給予小鼠10、20、30g/kg·bw劑量的復(fù)體力湯30d后，與對照組比較，高劑量組（30g/kg·bw）能提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、conA誘導(dǎo)小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力、碳廓清能力和巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力（P<001）；各劑量復(fù)體力湯對小鼠體重增長、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、半數(shù)溶血值、抗體細胞生成數(shù)和NK細胞活性均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>005）。根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2003年版） 中增強免疫力功能的判斷標(biāo)準，本實驗中細胞免疫功能和單核巨噬細胞功能結(jié)果均為陽性，表明復(fù)體力湯具有增強免疫力的功能。

參考文獻

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