膽清膠囊的薄層色譜研究

孫明玉+萇玲+舒柯+王定兵+龍建丹+朱丹

【摘要】目的：探討膽清膠囊中牛膽汁和鳳尾草的薄層色譜鑒別方法。方法：采用薄層色譜法。結(jié)果：薄層色譜鑒別斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于膽清膠囊中牛膽汁和鳳尾草的薄層色譜鑒別。

【關(guān)鍵詞】膽清膠囊；牛膽汁；鳳尾草；薄層色譜鑒別

【中圖分類號(hào)】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）05-0035-02

膽清膠囊由虎耳草、鳳尾草、大黃、牛膽汁等四味藥材組方，具有清熱利濕、舒肝利膽的功效，臨床主要用于肝膽濕熱所致的脘肋疼痛、呃逆嘔惡、口干口苦、大便秘結(jié)、以及膽囊炎、膽石癥見(jiàn)上述證候者[1]。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中牛膽汁和鳳尾草的薄層色譜鑒別[1]，斑點(diǎn)不清晰，分離度不好，而且現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中鳳尾草的薄層鑒別所使用的展開(kāi)劑中含有劇毒化學(xué)物質(zhì)苯，對(duì)檢驗(yàn)人員危害大。筆者通過(guò)深入研究，對(duì)牛膽汁和鳳尾草的薄層色譜鑒別方法進(jìn)行了改進(jìn)，使得斑點(diǎn)清晰，分離度好，且陰性無(wú)干擾，改進(jìn)了該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建立了可用于膽清膠囊質(zhì)量控制的新的薄層色譜鑒別方法。

1儀器與材料

11儀器超聲波清洗器（北京醫(yī)療設(shè)備廠，功率250W，頻率33kHz）；電子分析天平（梅特勒XPE205）；薄層色譜硅膠G（青島海洋化工有限公司）。

12材料膽酸（批號(hào)：100078-201415）、木犀草素（批號(hào)：111520-200504）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。乙腈為色譜純、水為超純水，其他試劑為分析純。樣品由廠家提供，陰性樣品自制。

2方法與結(jié)果

21牛膽汁的薄層色譜鑒別取本品內(nèi)容物15g，加甲醇20mL，超聲處理20min，濾過(guò)，棄掉濾液，濾渣揮干溶劑，加入三氯甲烷20mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?mL使溶解，作為供試品溶液，另取膽酸對(duì)照品，加乙醇制成1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（3∶2∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光斑點(diǎn)。結(jié)果表明，樣品斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無(wú)干擾，方法具有專屬性。見(jiàn)圖1。

22鳳尾草的薄層色譜鑒別取本品內(nèi)容物2g，加75%乙醇50mL，超聲處理45min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)来斡檬兔眩?0～90℃）、二氯甲烷各5mL，分別浸漬5min，棄去石油醚（60～90℃）液與二氯甲烷液，揮干，殘?jiān)铀?mL使溶解，以2000r/min的速度離心5min，取上清液通過(guò)AB-8大孔吸附樹(shù)脂（50g，濕法裝柱，內(nèi)徑為15cm），用水120mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇120mL洗脫，棄去洗脫液，繼用75%乙醇70mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；另取木犀草素對(duì)照品，加甲醇制成1mL含02mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液3μL、對(duì)照品溶液2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸（8∶9∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)min， 置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光斑點(diǎn)。同時(shí)，3批樣品斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無(wú)干擾，方法具有專屬性。見(jiàn)圖2。

23溫度的考察對(duì)室溫、低溫（5℃）和高溫（40℃）進(jìn)行了考察，結(jié)果展開(kāi)溫度為室溫、5℃和40℃時(shí)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無(wú)干擾，表明不同溫度展開(kāi)條件對(duì)本試驗(yàn)建立的方法無(wú)明顯影響。

24濕度的考察對(duì)高濕度（88%）、中等濕度（47%）和低濕度（32%）進(jìn)行了考察，結(jié)果在展開(kāi)溫度為室溫、濕度分別為88%、47%和32%時(shí)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無(wú)干擾，表明不同濕度展開(kāi)條件對(duì)本試驗(yàn)建立的方法無(wú)明顯影響。

25 薄層板的考察選用青島海洋化工廠分廠硅膠G預(yù)制板（批號(hào)20100702），自制硅膠G板2種薄層板，斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾，表明不同薄層板展開(kāi)對(duì)本試驗(yàn)建立的方法無(wú)明顯影響。

3討論

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中根據(jù)膽酸的性質(zhì)，曾使用乙酸乙酯-三氯甲烷-冰醋酸（25∶25∶02）、乙酸乙酯-甲醇-稀乙酸（5∶3∶2）、異辛烷-乙酸乙酯-冰乙酸（15∶7∶5）、三氯甲烷-乙醚-冰乙酸（4∶5∶1）、三氯甲烷-乙醚-冰乙酸（2∶2∶1）、正己烷-乙酸乙酯-冰乙酸-甲醇（6∶32∶1∶1）等展開(kāi)系統(tǒng)，經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，最后采用本研究所使用的展開(kāi)系統(tǒng)，結(jié)果斑點(diǎn)清晰，分離效果最優(yōu)。

文獻(xiàn)表明鳳尾草主要含黃酮類有效成分[2]，本文采用AB-8大孔吸附樹(shù)脂對(duì)鳳尾草醇提物中黃酮類成分進(jìn)行純化后，再進(jìn)行薄層色譜鑒別，使得斑點(diǎn)清晰，分離度更好。

由于鳳尾草薄層鑒別現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中的展開(kāi)系統(tǒng)含有苯，對(duì)檢驗(yàn)人員有很大的危害，本文通過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，曾使用了三氯甲烷-甲醇-乙酸（6∶1∶1）、三氯甲烷-甲醇-甲酸（5∶2∶02）、環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸（10∶5∶2）、環(huán)己烷-乙酸丁酯-乙酸（15∶5∶04）等展開(kāi)系統(tǒng)，最后采用本文方法所使用的展開(kāi)系統(tǒng)，結(jié)果斑點(diǎn)清晰，分離效果最優(yōu)，陰性無(wú)干擾。

綜上，研究在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，改進(jìn)了牛膽汁和鳳尾草的薄層色譜鑒別方法，以使質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)更趨完善，更有效控制了膽清膠囊的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] WS-10049（ZD-0049）-2002-2011Z .國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2] 劉建群，劉健，蔣偉，等.鳳尾草藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)中藥雜志，2015，40（10）：1855-1859.