正交試驗法優(yōu)化固本明目顆粒中紅花丁香油的包合工藝

姬濤+李懷平+孫緒丁

【摘要】目的：優(yōu)選膠體磨法制備紅花丁香油-β-環(huán)糊精包合物的最佳工藝。方法：采用正交試驗法，以包合物收率和包合率為評價指標，考察β-CD與水的比例、揮發(fā)油與β-CD的比例和包合時間對包合工藝的影響。結(jié)果：β-CD 包合紅花丁香油的最佳工藝為β-CD與水的比例為1∶4，β-CD與紅花丁香油的比例為5∶1，包合時間為30min。結(jié)論：膠體磨法包合紅花丁香油合理可行。

【關(guān)鍵詞】固本明目顆粒；紅花丁香揮發(fā)油；膠體磨；包合工藝

【中圖分類號】R284【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）05-0029-03

固本明目顆粒[1]由紅花、訶子、塞北紫堇、丁香、冰片、熊膽粉等6味藥材組成，具有調(diào)節(jié)潰氣、平肝健脾、化瘀明目的功效。標準工藝中對紅花、丁香進行揮發(fā)油提取，再以乙醇溶解噴入制好的顆粒中，制得成品。由于揮發(fā)油本身的麻舌、苦澀等不良口感及其易揮發(fā)性，使得成品顆粒不僅口感較差，且質(zhì)量不穩(wěn)定。而以β-環(huán)糊精對揮發(fā)油進行包合，可以明顯克服上述缺點[2-3]。膠體磨法[4]依靠設(shè)備內(nèi)齒輪的相對運動，使β-CD 和藥物的混合物在剪切、擠壓等作用下實現(xiàn)包合，具有收率高、工藝條件易控制、設(shè)備占用空間小等特點，適合工業(yè)化生產(chǎn)。本文即采用膠體磨法，通過正交試驗優(yōu)選了紅花丁香油的最佳包合工藝。

1儀器與試藥

11儀器JM-50型膠體磨（上海愛思杰制泵有限公司）；101型電熱鼓風干燥箱（北京永光明醫(yī)療儀器廠）；GC-2014C高效氣相色譜儀（日本島津）；KQ-300B超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

12材料β-環(huán)糊精（批號：160301，安徽山河藥用輔料股份有限公司）；丁香酚對照品（批號：110725-201414，中國食品藥品檢定研究院）； 紅花丁香揮發(fā)油（自制），甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

21包合物制備取紅花丁香揮發(fā)油加無水乙醇配成體積分數(shù)50%的溶液，備用；取適量蒸餾水置膠體磨中，加入一定量的β-環(huán)糊精，研磨5min，緩慢加入一定量的50%揮發(fā)油的乙醇溶液，再研磨一定時間，靜置過夜，濾過，沉淀于50℃干燥，即得。

22考察因素及水平為得到最佳包合工藝，根據(jù)預實驗結(jié)果，對β-環(huán)糊精與水的比例、β-環(huán)糊精與揮發(fā)油比例、包合時間3個因素[5]進行考察，按L9（3）4正交表安排實驗，因素水平見表1。

23評價指標

231包合物收率測定收率=包合物重量 ∕（揮發(fā)油重量+環(huán)糊精重量）×100%。

232包合率測定

2331色譜條件以Waters C18柱（250mm×46mm，5μm）為固定相；以甲醇-水（55∶45）為流動相；檢測波長為280nm；流速10mL/min；柱溫35℃。

2332標準曲線制備取丁香酚對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成濃度為1mg/mL的溶液。精密量取丁香酚對照品溶液1、2、3、5、7、10mL，分別置10mL棕色容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，自動進樣器進樣10μl，記錄丁香酚峰的峰面積，以峰面積（A）對對照品濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程為A=10911C+91933，r=09996（n=5），在10008～100080μg濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2333精密度試驗將同一濃度對照品溶液進樣6次，計算RSD=057%（n=6），表明系統(tǒng)精密度良好。

2334穩(wěn)定性試驗供試品溶液制備完成后，分別于0、1、2、4、6、8h分別進樣10μl，計算RSD=081%（n=6），結(jié)果表明供試品溶液在8h內(nèi)測定丁香酚結(jié)果穩(wěn)定。

2335加樣回收率試驗取已知含量樣品適量，置50mL棕色容量瓶中，各精密稱取6份，精密加入丁香酚對照溶液（10008mg/mL）15mL，再加入70%乙醇25mL，超聲處理20min，超聲完畢后，放冷后，用70%乙醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，測定，計算丁香酚對照品的平均加樣回收率x=9689%（n=6），RSD=101%（n=6），表明該丁香酚測定方法準確性良好。

2336樣品測定取樣品適量（約相當于含丁香酚20mg），以30mL石油醚分三次洗滌，洗滌后樣品揮干石油醚，置50mL棕色容量瓶中，加70%乙醇溶液40mL，超聲處理2min，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，濾過，得續(xù)濾液，精密吸取上述續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定。

注：紅花丁香油中丁香酚含量為678%。

233綜合評分[6]包合率是衡量揮發(fā)油利用率的重要指標，而收率在大生產(chǎn)中也有著重要的意義，因此以包合率為主要指標，權(quán)重系數(shù)為08；收率為次要指標，權(quán)重系數(shù)為02。將加權(quán)后的值作為綜合評分結(jié)果。計算公式如下。

綜合評分=02×收率∕最大收率×100+08×包合率∕最大包合率×100

24結(jié)果以包合收率和包合率為考察指標，從表3方差分析可知，因素A和B對結(jié)果有顯著性影響（P<005），因素C差異沒有統(tǒng)計學意義，結(jié)合表2直觀分析極差R值，綜合考慮，確定最佳包合工藝為A2B2C2，即β-環(huán)糊精∶水為1∶4，β-環(huán)糊精∶揮發(fā)油為5∶1，膠體磨研磨包合30min。

25驗證實驗按上述優(yōu)選的最佳工藝，制備包合物，即取紅花丁香揮發(fā)油20g，加無水乙醇20mL配成體積分數(shù)50%的溶液，備用；取蒸餾水400mL置膠體磨中，加入β-環(huán)糊精100g，研磨5min，緩慢加入上述揮發(fā)油乙醇溶液，再研磨30min，靜置過夜，濾過，沉淀于50℃干燥，即得，共制備3批，測定收率分別為8024%、8211%、8381%，包合率分別為7834%、7925%、7719%，表明該工藝穩(wěn)定可行。

26包合物的驗證采用薄層色譜法[7]，取丁香揮發(fā)油，加無水乙醇配成2%的溶液；揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物加無水乙醇配成相同濃度的樣品。按薄層色譜法《中國藥典》2015年版四部（通則0502）實驗，吸取2種樣品溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（7∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液顯色，結(jié)果顯示，包合物在揮發(fā)油相同的位置上沒有斑點出現(xiàn)，表明揮發(fā)油已與β-環(huán)糊精形成包合物。

3結(jié)論

試驗所用揮發(fā)油為實驗室自提紅花丁香混合油，其中丁香油約占90%，因此以丁香油中丁香酚的含量為依據(jù)進行了包合率的計算。同時以HPLC法測定丁香酚的含量，相較與藥典[8]中氣相色譜法具有操作簡便、靈敏度高、準確性好的特點，同時HPLC法不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的影響，分離溫度低，各組分容易被分離[9]。本文以優(yōu)化的膠體磨法制備紅花丁香油包合物，產(chǎn)品得率高，包合時間短，且包合過程無需加熱，有利于提高產(chǎn)品質(zhì)量，尤其適合工業(yè)化生產(chǎn)。

參考文獻

[1] WS-10485（ZD-0485）-2002-2012Z，國家藥品標準[S].[2002-12-01]

[2] 葉卯祥，嚴雪黎. β環(huán)糊精包合技術(shù)在中藥揮發(fā)油制劑中的應(yīng)用研究[J]. 醫(yī)學綜述，2010，16（24）：3793-3796.

[3] 郝晶晶，李海亮，龔慕辛. 揮發(fā)油環(huán)糊精包合技術(shù)的研究進展及存在問題分析[J]. 中國實驗方劑學，2013，19（2）：352-356.

[4] 熊曉莉，李寧，陳錦錦. 環(huán)糊精包合技術(shù)研究進展[J]. 中國藥房，2008，19（25）：1988-1990.

[5] 趙陽，張純，郭澄，等.丁香油-β-環(huán)糊精制備工藝的研究[J]. 中國中醫(yī)藥信息，2000，7（3）：19-21.

[6] 韓林，張艷俠.丁香揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物的制備研究[J]. 西北藥學，2011，26（6）：447-449.

[7] 胡伊力格其. β-環(huán)糊精包合技術(shù)在中藥制劑中的應(yīng)用概述[J]. 山東中醫(yī)，2015，34 （11）：892-894.

[8] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：4.

[9] 張軍，葉炳，陳威黃，等.HPLC測定復方揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物中桂皮醛、丁香酚、蒼術(shù)素的含量[J]. 中國實驗方劑學，2013，19（3）：86-89.