hTERC、C-MYC基因檢測(cè)在新疆維吾爾族婦女宮頸病變篩查中的意義

范玲玲，黃修菊，劉新蓮，王丹，祖力比艷·依瑪木江，陳志芳

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，烏魯木齊 830054)

hTERC、C-MYC基因檢測(cè)在新疆維吾爾族婦女宮頸病變篩查中的意義

范玲玲，黃修菊，劉新蓮，王丹，祖力比艷·依瑪木江，陳志芳

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，烏魯木齊 830054)

目的 探討人端粒酶RNA(hTERC)及原癌基因C-MYC在新疆維吾爾族婦女宮頸病變篩查中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 收集1 000例新疆維吾爾族婦女的宮頸脫落細(xì)胞，均行宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)、高危型HPV篩查(HR-HPV)及熒光原位雜交技術(shù)(FISH)檢測(cè)hTERC和C-MYC基因，任一指標(biāo)陽性者行陰道鏡下活檢，分析hTERC、C-MYC基因在細(xì)胞學(xué)及病理學(xué)分級(jí)中的表達(dá)水平，ROC曲線分析hTERC和C-MYC基因單一和聯(lián)合檢測(cè)對(duì)高級(jí)別宮頸病變(≥CIN Ⅱ期)的臨床診斷效能。結(jié)果hTERC、C-MYC基因表達(dá)水平均隨宮頸病變程度的升高而升高。hTERC基因單獨(dú)診斷宮頸高級(jí)別病變(≥CIN Ⅱ期)的ROC曲線下面積(AUCROC)為0.879，C-MYC基因?yàn)?.835，兩者聯(lián)合檢測(cè)為0.904，且兩者聯(lián)合檢測(cè)的敏感性(90.77%)、陰性預(yù)測(cè)值(96.00%)和準(zhǔn)確性(90.22%)均高于單一指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)論hTERC、C-MYC基因可作為臨床宮頸病變高級(jí)別篩查的指標(biāo)。

宮頸癌；細(xì)胞學(xué)檢查；高危人乳頭瘤病毒；人端粒酶RNA基因；C-MYC基因

子宮頸細(xì)胞由非典型鱗狀上皮細(xì)胞向子宮頸癌轉(zhuǎn)變的過程中多伴人染色體端粒酶(hTERC)基因的擴(kuò)增[1-2]。而C-MYC基因過度表達(dá)見于多種腫瘤，其編碼的蛋白質(zhì)在細(xì)胞增殖、凋亡、分化及腫瘤形成過程中起著重要的作用[3]。目前已證實(shí)，hTERC、C-MYC基因與宮頸病變程度密切相關(guān)[4]。新疆維吾爾族婦女宮頸癌高發(fā)，且多存在HPV感染[5]。然而目前的研究多集中于對(duì)新疆維吾爾族宮頸癌婦女hTERC基因的檢測(cè)[6]，而對(duì)hTERC、C-MYC基因聯(lián)合檢測(cè)的報(bào)道少見。本研究用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)對(duì)宮頸脫落細(xì)胞行hTERC及C-MYC基因檢測(cè)，旨在探討其在新疆維吾爾族婦女宮頸病變篩查中的臨床價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象 收集2013年9月至2015年8月在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科門診就診的維吾爾族婦女1 000例，年齡37.5±7.5歲，均來自新疆地區(qū)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)有性生活史者，無子宮切除病史。(2)機(jī)會(huì)性篩查者或無臨床癥狀要求體檢者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)已做過陰道鏡活檢者。(2)已經(jīng)確診為CIN者。(3)有子宮切除。(4)既往有過宮頸治療。(5)有盆腔放化療史者。(6)妊娠期、哺乳期、月經(jīng)期、急性生殖道炎癥者。(7)患有重要疾病無法耐受檢查者。于同期本院常規(guī)體檢人群中隨機(jī)抽取20例檢測(cè)正常的新疆維吾爾族婦女宮頸脫落細(xì)胞樣本(年齡25～64歲)作為FISH對(duì)照。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，患者知情同意。

1.2 主要儀器及試劑 薄層液基細(xì)胞學(xué)制片儀(廣州安必平公司)，BX51熒光攝影顯微鏡(日本奧林巴斯公司)，光學(xué)顯微鏡(德國(guó)蔡司光學(xué)儀器公司)，906043．SP型陰道鏡(美國(guó)Wallach公司)；hTERC基因探針(GLPhTERC/ CSP3 DNA 探針)及C-MYC基因探針(GLPC-MYC探針)、HC-Ⅱ試劑盒(美國(guó)Digene公司)。

1.3 TCT及HPV檢測(cè) 對(duì)各研究對(duì)象行宮頸液基薄層細(xì)胞檢測(cè)(TCT)及HPV檢測(cè)，由本院病理科進(jìn)行。細(xì)胞學(xué)結(jié)果診斷參照2001版國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)推薦的伯塞斯達(dá)系統(tǒng)(The Bethesda system，TBS)[7]，其中未見惡性細(xì)胞和上皮內(nèi)病變細(xì)胞(Negative for intraepithelial lesion or malignancy，NILM)組884例，意義不明的非典型鱗狀細(xì)胞(Atypical squamous cell of undetermined signification，ASCUS)組64例，低度鱗狀上皮內(nèi)病變(Low grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)組26例，高度鱗狀上皮內(nèi)病變(High grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)組21例，鱗狀細(xì)胞癌(Squamous cell carcinoma，SCC)組5例。細(xì)胞學(xué)陽性判定:病變?yōu)锳SCUS及以上。按照HC-Ⅱ試劑盒說明書操作檢測(cè)已知的13種HR-HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)及結(jié)果判讀。

1.5 陰道鏡檢查與宮頸活檢組織學(xué)檢查 對(duì)所有研究對(duì)象行TCT、HPV、FISH檢測(cè)，任一指標(biāo)陽性者，由本院婦科醫(yī)師行陰道鏡活檢，并由病理科醫(yī)師進(jìn)行病理組織學(xué)檢查及盲法閱片。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。率的比較用卡方檢驗(yàn)，采用ROC曲線分析hTERC、C-MYC基因單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)高級(jí)別宮頸病變(≥CINⅡ期)的診斷效能。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陰道鏡活檢標(biāo)本的hTERC、C-MYC基因檢測(cè)結(jié)果 1 000例樣本中，經(jīng)陰道鏡下活檢的標(biāo)本共225例，其中TCT異常116例，HPV感染139例，F(xiàn)ISH檢測(cè)該225例標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)hTERC基因異常69例，C-MYC基因異常66例。FISH檢測(cè)hTERC、C-MYC基因結(jié)果見圖1。

注：A，C為正常宮頸炎細(xì)胞；B，D為宮頸癌細(xì)胞。

圖1 FISH檢測(cè)hTERC、C-MYC基因表達(dá)(×100)

2.2hTERC、C-MYC基因擴(kuò)增與細(xì)胞學(xué)分級(jí)的關(guān)系 對(duì)經(jīng)陰道鏡下活檢的225例標(biāo)本進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)hTERC、C-MYC基因陽性率均隨著細(xì)胞學(xué)病變程度的增加而升高，且組間兩兩比較結(jié)果差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

表1 hTERC、C-MYC基因擴(kuò)增與細(xì)胞學(xué)分級(jí)的關(guān)系[n(%)]

注：與NILM組比較，a，P<0.05；與ASCUS組比較，b，P<0.05；與LSIL組比較，c，P<0.05；與HSIL組比較，d，P<0.05。

2.3hTERC、C-MYC基因的擴(kuò)增與病理分級(jí)的關(guān)系 225例標(biāo)本的病理組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，hTERC、C-MYC基因陽性率均隨著病理結(jié)果嚴(yán)重程度的增加而升高，除慢性宮頸炎組與CINⅠ期比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表2。

表2 hTERC、C-MYC基因與病理分級(jí)比較[n(%)]

注：與慢性宮頸炎組比較，a，P<0.05；與CINⅠ組比較，b，P<0.05；與CIN Ⅱ～Ⅲ組比較，c，P<0.05。

2.4hTERC、C-MYC基因在宮頸高級(jí)別病變?cè)\斷效能的比較 以宮頸高級(jí)別病變(≥CIN Ⅱ期)65例患者作為疾病組，160例CINⅠ期及慢性宮頸炎患者為對(duì)照組，以敏感性為縱坐標(biāo)、(1-特異性)為橫坐標(biāo)繪制ROC曲線。ROC曲線見圖2。其在宮頸高級(jí)別病變中的診斷效能見表3。

圖2 hTERC、C-MYC診斷宮頸高級(jí)別病變的ROC曲線

指標(biāo)敏感性(%)特異性(%)陽性預(yù)測(cè)值(%)陰性預(yù)測(cè)值(%)準(zhǔn)確性(%)AUCROChTERC84.6291.2579.7193.5989.330.879C-MYC76.9290.0075.7690.5786.220.835聯(lián)合檢測(cè)90.7790.0078.6796.0090.220.904

3 討論

越來越多的研究表明，hTERC及C-MYC基因在子宮頸癌的早期診斷中具有重要的作用。Chen等[8]研究結(jié)果顯示,hTERC、C-MYC基因在不同的細(xì)胞學(xué)分組(NILM、ASCUS、LSIL、HSIL和SCC)中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，且在不同組織學(xué)分組(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC)中hTERC、C-MYC基因在≥CINⅡ期級(jí)別病變中的擴(kuò)增率明顯高于≤CINⅠ期病變(P<0.05)。Zhao等[9]研究也顯示，hTERC基因擴(kuò)增陽性率隨組織學(xué)異常的嚴(yán)重程度增加而升高，且≥CINⅡ期 患者的hTERC基因的陽性擴(kuò)增率明顯高于≤CINⅠ期 患者(P<0.05)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在不同細(xì)胞學(xué)分組中，hTERC及C-MYC基因的擴(kuò)增陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，并且隨著細(xì)胞學(xué)病變程度的加重而升高(P<0.05)，與Chen等[8]研究結(jié)果較為一致。本研究還發(fā)現(xiàn)在不同病理學(xué)分組中，hTERC及C-MYC基因在慢性宮頸炎組與CIN Ⅰ組間表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但在其余各組間hTERC及C-MYC基因的擴(kuò)增差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，并且隨著宮頸上皮內(nèi)瘤變病變程度的加重而升高，與Zhao等[9]研究結(jié)果較為一致。以上結(jié)果提示hTERC及C-MYC擴(kuò)增可能是宮頸病變中的重要因素，并與宮頸癌變的進(jìn)程密切相關(guān)。

本研究結(jié)果還表明，hTERC(AUCROC：0.879)和C-MYC(AUCROC：0.835)基因單獨(dú)和聯(lián)合(AUCROC：0.904)檢測(cè)在宮頸高級(jí)別病變(≥CIN Ⅱ期)篩查中均具有較高的臨床診斷效能。Gao等[10]報(bào)道的hTERC和C-MYC基因檢測(cè)宮頸高級(jí)別病變的敏感性(72.3%、76.4%)低于本實(shí)驗(yàn)，而特異性(96.3%、96.3%)高于本結(jié)果，而單獨(dú)檢測(cè)的AUCROC(0.843、0.865)與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為接近。存在差異的原因可能與納入的樣本來源存在地域及種族的差異所致。此外，本研究并未對(duì)宮頸高級(jí)別病變(≥CIN Ⅱ期)患者術(shù)后hTERC和C-MYC基因陽性率與病情轉(zhuǎn)歸間進(jìn)行相關(guān)性分析，今后將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量加以驗(yàn)證。

[1]吳澤妮,秦宇,李婷媛，等.透景HPV檢測(cè)試劑在高危HPV DNA檢測(cè)及宮頸上皮內(nèi)瘤變篩查中的應(yīng)用[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2016,34(2):90-94.

[2]Bin H, Ruifang W, Ruizhen L,etal.Detention of HPV L1 capsid protein andhTERCgene in screening of cervical cancer[J]. Iran J Basic Med Sci,2013,16(6):797-802.

[3]Pan XN,Chen JJ,Wang LX,etal.Inhibition ofC-MYCovercomes cytotoxic drug resistance in acute myeloid leukemia cells by promoting differentiation[J]. PLoS One,2014,9(8):1-11.

[4]Li T,Tang L,Bian D,etal.Detection ofhTERCandC-MYCgenes in cervical epithelial exfoliated cells for cervical cancer screening[J]. Int J Mol Med,2014,33(5):1289-1297.

[5]Niyazi M, Sui S, Zhu K,etal.Correlation between methylation of human papillomavirus-16 L1 gene and cervical carcinoma in uyghur women[J].Gynecol Obstet Invest,2017,82(1):22-29.

[6]馬玉蘭,瑪依努爾·尼牙孜,張海萌，等.HPV L1殼蛋白與hTERC基因聯(lián)合檢測(cè)診斷新疆維、漢婦女宮頸病變CIN2+的臨床價(jià)值[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2016,16(7):1281-1284.

[7]Solomon D,Davey D,Kurman R,etal.The 2001 Bethesda System:terminology for reporting results of cervical cytology[J]. JAMA,2002,287(16):2114-2119.

[8]Chen S,Yang Z, Zhang Y,etal.Genomic amplification patterns of human telomerase RNA gene andC-MYCin liquid-based cytological specimens used for the detection of high-grade cervical intraepithelial neoplasia[J].Diagn Pathol,2012,7：40.

[9]Zhao XY,Cui Y,Jiang SF,etal.Human telomerase gene and high-risk human papillomavirus infection are related to cervical intraepithelial neoplasia[J]. Asian Pac J Cancer Prev,2015,16(2):693-697．

[10]Gao K,Menglan E,Zhang JQ,etal.Can genomic amplification of human telomerase gene andC-MYCin liquid-based cytological specimens be used as a method for opportunistic cervical cancer screening?[J]. Gynecol Obstet Invest,2015,80(4):153-163.

(本文編輯：許曉蒙)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.03.11

范玲玲，1987年生，女，碩士研究生，研究方向?yàn)閶D科腫瘤及婦科內(nèi)分泌疾病。

陳志芳，主任醫(yī)師，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail:troy_ru@sina.com。

R737.33

A

2016-12-27)