血清中亞甲基四氫葉酸還原酶活性與白癜風(fēng)臨床特征相關(guān)性研究

陳佳希 易秀莉 李春英 高天文

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·論著·

血清中亞甲基四氫葉酸還原酶活性與白癜風(fēng)臨床特征相關(guān)性研究

陳佳希 易秀莉 李春英 高天文

目的： 明確白癜風(fēng)患者血清中亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)活性與白癜風(fēng)臨床特征間的關(guān)系。方法： 選擇性別年齡相匹配的白癜風(fēng)患者及健康對(duì)照各90例，采用ELISA法檢測(cè)血清中MTHFR活性。結(jié)果： 白癜風(fēng)患者血清中MTHFR活性為(332.77±92.85)U/L,顯著低于對(duì)照組的(403.66±96.56)U/L，(P<0.0001)。靜止期、進(jìn)展期及快速進(jìn)展期患者血清中MTHFR活性呈逐級(jí)降低趨勢(shì)。MTHFR活性在患者性別、家族史、病程等方面無顯著差異。結(jié)論： 白癜風(fēng)患者血清中MTHFR活性降低可能與白癜風(fēng)疾病發(fā)展相關(guān)。

白癜風(fēng)； 亞甲基四氫葉酸還原酶； 活性

白癜風(fēng)是一種常見的獲得性色素脫失性疾病，臨床表現(xiàn)為皮膚黏膜白斑，病理表現(xiàn)為表皮、黏膜或其他組織內(nèi)黑素細(xì)胞的減少或消失[1]。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是催化葉酸代謝及甲硫氨酸代謝通路的關(guān)鍵分子，是分子量為70～77 KD的黃素蛋白，具有結(jié)合FAD、NAD(P)H、CH2-H2的N端催化結(jié)構(gòu)域及Ado Met的C端調(diào)節(jié)區(qū)。大量文獻(xiàn)提示MTHFR及其代謝通路異常與白癜風(fēng)發(fā)病密切相關(guān)。并且我們前期研究發(fā)現(xiàn)[2]，MTHFR是白癜風(fēng)的易感基因之一，其rs1801133是白癜風(fēng)的易感位點(diǎn)，該位點(diǎn)TT基因型與CT及CC型相比具有明顯降低白癜風(fēng)易感性的作用。然而MTHFR活性與白癜風(fēng)臨床特征之間的關(guān)系并不明確。因此從白癜風(fēng)易感基因MTHFR出發(fā)，分析其活性與白癜風(fēng)臨床特征之間的相關(guān)性，有可能豐富該疾病發(fā)病的機(jī)制，并進(jìn)一步為白癜風(fēng)的治療提供新的思路。

1 研究對(duì)象及方法

1.1 研究對(duì)象 已經(jīng)臨床確診的白癜風(fēng)患者為研究對(duì)象，選擇性別年齡匹配的正常人為對(duì)照。所有病例樣本來自第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院皮膚科，正常對(duì)照來自西京醫(yī)院同期的隊(duì)列研究基地。對(duì)患者病情登記內(nèi)容主要包括一般情況、個(gè)人疾病史、家族史、生活習(xí)慣、主要環(huán)境危險(xiǎn)因素暴露史、臨床資料包括臨床分型、分類等，參照全國(guó)中西醫(yī)皮膚性病學(xué)會(huì)色素病學(xué)組制定的白癜風(fēng)臨床分型及療效標(biāo)準(zhǔn)(2003年修訂稿)。疾病分期依據(jù)國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道[3]及本科臨床經(jīng)驗(yàn)，在本文中將白癜風(fēng)患者分為快速進(jìn)展期、進(jìn)展期、穩(wěn)定期三類。其中，3個(gè)月內(nèi)新發(fā)白斑或白斑面積擴(kuò)大大于10%的患者定義為快速進(jìn)展期，6個(gè)月內(nèi)新發(fā)白斑或白斑面積擴(kuò)大小于10%的患者定義為進(jìn)展期；6個(gè)月內(nèi)白斑無明顯變化定義為穩(wěn)定期。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 留取白癜風(fēng)患者及正常對(duì)照全血，在4℃條件下，于2000 g離心15 min收集血清。通過酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)MTHFR在白癜風(fēng)患者及正常對(duì)照血清中的活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。描述性統(tǒng)計(jì)分析，定性指標(biāo)以百分率或構(gòu)成比描述；定量指標(biāo)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組對(duì)比分析，定性資料采用卡方檢驗(yàn)，fisher精確概率法，Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。定量資料符合正態(tài)分布用單因素方差分析方法(組間進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，以0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，方差不齊時(shí)選用Satterthwaite方法進(jìn)行校正的t檢驗(yàn))，不符合正態(tài)分布的用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。假設(shè)檢驗(yàn)統(tǒng)一使用雙側(cè)檢驗(yàn)，給出檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量及其對(duì)應(yīng)的P值，以P<0.05作為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者臨床特征概況 對(duì)白癜風(fēng)患者臨床特征按照性別、病程、家族史、疾病活動(dòng)性、皮損面積、疾病分型這五個(gè)方面進(jìn)行分類。本研究包含90例白癜風(fēng)患者及性別年齡相匹配的90名健康對(duì)照。在病例組中包含52.2%的男及47.8%的女?；颊卟〕虨?60.15±84.64)個(gè)月。有白癜風(fēng)家族史患者占病例組人數(shù)的17.8%。病例組包含14.4%的穩(wěn)定期患者，70.0%進(jìn)展期患者及15.6%快速進(jìn)展期患者。有56.7%的患者白斑面積<1%，23.3%的患者白斑面積1%～5%，13.3%的患者白斑面積5%～50%，6.7%的患者白斑面積>50%。30%的患者為局限型，3.3%的患者為肢端型，64.5%的患者為散發(fā)型，2.2%的患者為泛發(fā)型。具體分類結(jié)果見表1。

2.2 血清中MTHFR活性與白癜風(fēng)臨床特征相關(guān)性分析 使用ELISA法檢測(cè)白癜風(fēng)患者及正常對(duì)照血清中MTHFR活性后聯(lián)合患者臨床特征進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，白癜風(fēng)患者血清中MTHFR活性明顯低于正常對(duì)照組。(332.77±92.85 vs. 403.66±96.56 U/L;P<0.0001)(圖1)。

MTHFR活性與白癜風(fēng)活動(dòng)性分析結(jié)果顯示，白癜風(fēng)患者血清中MTHFR活性隨著疾病活動(dòng)性增強(qiáng)表達(dá)降低，其活性分別為穩(wěn)定期(375.65±61.14)U/L，進(jìn)展期(330.98±96.09)U/L，快速進(jìn)展期(301.02±92.70)U/L。穩(wěn)定期患者M(jìn)THFR酶活性與對(duì)照組相比無顯著差異(P=0.3128)，進(jìn)展期及快速進(jìn)展期患者M(jìn)THFR酶活性與對(duì)照組相比具有差異顯著(P<0.0001,P=0.0003)(圖2)。

表1 臨床樣本概況 例(%)

MTHFR活性與白癜風(fēng)皮損面積相關(guān)性分析結(jié)果顯示，皮損面積處于<1%、1%～5%、5%～50%、>50%范圍的患者M(jìn)THFR活性分別為(343.73±91.73)U/L，(292.16±81.87)U/L，(356.63±112.24)U/L，(334.05±72.59)U/L。皮損面積在5%范圍內(nèi)，隨著皮損面積的增加，MTHFR活性降低，當(dāng)皮損面積>5%，隨著皮損面積的增加，MTHFR活性升高。皮損面積<1%、1%～5%的患者血清中MTHFR活性與對(duì)照組相比具有顯著差異(P=0.0004，P<0.0001)，皮損面積5%～50%、>50%的患者血清中MTHFR活性與對(duì)照組相比無顯著差異(P=0.123,P=0.087)(圖3)。

圖1 白癜風(fēng)患者組及對(duì)照組MTHFR活性差異(***P<0.001) 圖2 MTHFR活性與白癜風(fēng)活動(dòng)性分析(***P<0.001)

圖3 MTHFR活性與白癜風(fēng)皮損面積相關(guān)性分析(***P<0.001)

MTHFR活性與白癜風(fēng)臨床分型相關(guān)性分析顯示，局限型、肢端型、散發(fā)型、泛發(fā)型患者血清中MTHFR活性分別為(334.23±94.61)U/L，(377.74±89.79)U/L，(326.58±92.58)U/L，(308.58±121.86)U/L。局限型及散發(fā)型患者M(jìn)THFR活性顯著低于對(duì)照組(P=0.003，P<0.0001)，肢端型及泛發(fā)型患者M(jìn)THFR活性與對(duì)照組相比無顯著差異(P=0.4665，P=0.1732)(圖4)。

圖4 MTHFR活性與白癜風(fēng)臨床分型相關(guān)性分析 (**P<0.01,***P<0.001)

進(jìn)一步分析結(jié)果顯示，不同性別的白癜風(fēng)患者的MTHFR活性無顯著差異(P=0.7147)。不同家族史的白癜風(fēng)患者M(jìn)THFR活性無顯著差異(P=0.9022)。不同病程的患者M(jìn)THFR活性無顯著差異(P=0.572，r=0.060)。

3 討論

MTHFR活性與白癜風(fēng)臨床特征相關(guān)性分析結(jié)果表明，MTHFR在白癜風(fēng)患者血清中呈低活性，與性別、家族史、病程無關(guān)，與疾病進(jìn)展程度、皮損面積及臨床分型相關(guān)。其中，靜止期、進(jìn)展期及快速進(jìn)展期患者血清中MTHFR活性呈逐級(jí)降低趨勢(shì)。進(jìn)展期及快速進(jìn)展期患者，皮損面積<5%的患者，局限型及散發(fā)型患者血清中MTHFR活性顯著低于正常對(duì)照組，以上分析結(jié)果提示MTHFR在白癜風(fēng)疾病的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。

MTHFR可參與葉酸代謝及甲硫氨酸代謝循環(huán)，是兩條代謝通路中的關(guān)鍵調(diào)控單元。一方面MTHFR可催化5,10-亞甲基四氫葉酸(5,10-MTHF)轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基四氫葉酸(5-MTHF)，促進(jìn)機(jī)體內(nèi)葉酸發(fā)揮功能；另一方面MTHFR的催化產(chǎn)物5-MTHF在甲硫氨酸合成酶及其輔酶維生素B12的催化下提供一個(gè)甲基給同型半胱氨酸(Hcy)使之轉(zhuǎn)化成為甲硫氨酸，從而維持體內(nèi)甲硫氨酸水平并減少Hcy的堆積。研究表明葉酸作為MTHFR代謝通路的底物在白癜風(fēng)的治療中可起到較好的療效。方春紅等研究了表皮移植聯(lián)合葉酸及腺苷鈷胺治療白癜風(fēng)的療效，結(jié)果顯示，葉酸及腺苷鈷胺用于表皮移植術(shù)，可使皮損部位復(fù)色時(shí)間提前并克服了色素生長(zhǎng)欠均勻的缺陷[4]。此外，Montes等[5]研究發(fā)現(xiàn)，給予白癜風(fēng)患者葉酸及維生素B12治療，有一定的輔助治療效果。而與之相對(duì)應(yīng)MTHFR代謝通路中間產(chǎn)物的堆積則與白癜風(fēng)發(fā)病密切相關(guān)。Shaker等研究發(fā)現(xiàn)與正常對(duì)照相比白癜風(fēng)患者血清中及白斑皮損部位同型半胱氨酸(Hcy)水平顯著增高[6-9]，表明白癜風(fēng)患者中MTHFR可能存在障礙從而導(dǎo)致底物利用不足以及中間產(chǎn)物堆積最終造成疾病的發(fā)生。因此，合理升高M(jìn)THFR活性，可在一定程度上抑制白癜風(fēng)疾病的發(fā)展，為治療白癜風(fēng)這一頑固性疾病提供新思路。

[1] Fistarol SK, Itin PH. Disorders of pigmentation[J]. J Dtsch Dermatol Ges,2010,8(3):187-201.

[2] Chen JX, Shi Q, Wang XW, et al. Genetic polymorphisms in the methylenetetrahydrofolate reductase gene (MTHFR) and risk of vitiligo in Han Chinese populations: a genotype-phenotype correlation study[J]. Br J Dermatol,2014,170(5):1092-1099.

[3] Lang KS, Caroli CC, Muhm A, et al. HLA-A2 restricted, melanocyte-specific CD8(+) T lymphocytes detected in vitiligo patients are related to disease activity and are predominantly directed against MelanA_MART1[J]. J Invest Dermatol,2001,116(6):891-897.

[4] 方春紅,梁虹,張啟國(guó).表皮移植聯(lián)合葉酸及腺苷鈷胺治療白癜風(fēng)臨床療效觀察[J].中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志,2005,21(7):505-506.

[5] Montes LF, Diaz ML, Lajous J, et al. Folic acid and vitamin B12 in vitiligo: a nutritional approach[J]. Cutis,1992,50(1):39-42.

[6] Anbar T, Zuel-Fakkar NM, Matta MF J, et al. Elevated homocysteine levels in suction induced blister fluid of active vitiligo lesions[J]. Eur J Dermatol,2016,26(1):64-67.

[7] Shaker OG, El-Tahlawi SM. Is there a relationship between homocysteine and vitiligo? A pilot study[J]. Br J Dermatol,2008,159(3):720-724.

[8] Karadag AS, Tutal E, Ertugrul DT, et al. Serum holotranscobalamine, vitamin B12, folic acid and homocysteine levels in patients with vitiligo[J]. Clin Exp Dermatol,2012,37(1):62-64.

[9] Silverberg JI, Silverberg NB. Serum homocysteine as a biomarker of vitiligo vulgaris severity: a pilot study[J]. J Am Acad Dermatol,2011,64(2):445-447.

(收稿：2016-09-07 修回：2016-10-26)

Correlation between serum MTHFR activity and clinical features of the patients with vitiligo

CHENJiaxi,YIXiuli,LIChunying,GAOTianwen.

Departmentofdermatology,XijingHospital,Fourthmilitarymedicaluniversity,Xi'an710032,ChinaCorrespondingauthor:GAOTianwen,E-mail:gaotw@fmmu.edu.cn

Objective:To determine the correlation between the serum methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) activity and clinical features of the patients with vitiligo. Methods: The MTHFR activity was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 90 patients with vitiligo and 90 controls with matched age and sex. Results: The mean level of MTHFR was 332.77±92.85 U/L in vitiligo, which was lower than that in controls (403.66±96.56 U/L), (P<0.0001). The level of MTHFR activity in stable vitiligo, progressive vitiligo and rapid progressive vitiligo was decreased in a descending manner. There was no significant difference of MTHFR activity in sex, family history and duration of the disease. Conclusion: Reduction of MTHFR activity may be associated with the development of vitiligo.

vitiligo; MTHFR; activity

西京醫(yī)院助推項(xiàng)目(編號(hào)：XJZT15M15)

第四軍醫(yī)大學(xué)西京皮膚醫(yī)院，西安，710032

高天文，E-mail: gaotw@fmmu.edu.cn