基質(zhì)金屬蛋白酶?9、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑?1測(cè)定在慢性腎衰竭患者中的變化

解 冰，江利萍，王 軍，夏 商 （江蘇省鎮(zhèn)江市丹徒區(qū)中醫(yī)院，江蘇鎮(zhèn)江212028）

基質(zhì)金屬蛋白酶?9、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑?1測(cè)定在慢性腎衰竭患者中的變化

解 冰，江利萍，王 軍，夏 商 （江蘇省鎮(zhèn)江市丹徒區(qū)中醫(yī)院，江蘇鎮(zhèn)江212028）

目的：測(cè)定基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMPs）在慢性腎衰竭患者中的結(jié)果，以期了解這兩種物質(zhì)在慢性腎衰竭病變中的作用．方法：選擇不同期的慢性腎衰竭患者作為研究對(duì)象，采用ELISA法測(cè)定血清中的MMP?9和TIMP?1的濃度．結(jié)果：血清中MMP?9雖然在CRF病例中較高但方差分析提示，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）；血清TIMP?1的結(jié)果按腎功能衰竭的程度呈上升趨勢(shì)，以CRFⅣ組的結(jié)果為最高，CRFⅠ組最低，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．001）；尿液中TIMP?1的結(jié)果以CRFⅣ組的結(jié)果為最高，CRFⅠ組最低，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．001）．慢性腎衰竭患者除CRFⅠ組α1?MG、β2?MG指標(biāo)外，其余指標(biāo)均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）．結(jié)論：通過(guò)檢測(cè)血清MMP?9、TIMP?1以及尿液TIMP?1的濃度可以更好地了解慢性腎衰竭的程度和腎間質(zhì)纖維化的形成原因．

MMP?9；TIMP?1；慢性腎衰竭；腎功能；腎間質(zhì)纖維化；腎小管標(biāo)志物

0 引言

腎間質(zhì)纖維化（renal interstitial fibrosis，RIF）幾乎是所有腎臟疾病發(fā)展的最終結(jié)果，其形成受細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）影響，最終結(jié)局是大量ECM的過(guò)度積聚形成纖維化，導(dǎo)致腎衰竭進(jìn)入終未期腎衰．近年來(lái)對(duì)腎間質(zhì)纖維化研究關(guān)于細(xì)胞外基質(zhì)降解的內(nèi)容較多，其中基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metallo proteinases，MMPs）是最重要的一種，基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of matrix metallo proteinases，TIMPs）是一組特異性抑制因子［1］；MMPs／TIMPs平衡失調(diào)是腎間質(zhì)纖維化發(fā)病的關(guān)鍵．本研究通過(guò)分析慢性腎衰竭各期患者血清中MMP?9、TIMP?1及尿液中TIMP?1的濃度，以期了解其對(duì)腎臟病發(fā)病的意義，現(xiàn)報(bào)道如下．

1 資料和方法

1．1 一般資料選擇2013－06／2016－06江蘇省鎮(zhèn)江市丹徒區(qū)中醫(yī)院住院患者160例，其中男97例，女63例．平均年齡（43．6±15．7）歲．其中慢性腎衰竭Ⅰ期（CRFⅠ）39例；CRFⅡ期74例；CRFⅢ期34例；CRFⅣ期13例．所有病例診斷均符合中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟病診斷與治療及療效標(biāo)準(zhǔn)［2］．正常對(duì)照組20例．

1．2 標(biāo)本留取血清標(biāo)本抽取新入院患者空腹血，及時(shí)分離血清置－70℃冰箱保存；尿液采用二次晨尿法留取標(biāo)本，取10 mL離心后再取上清液1 mL置－70℃冰箱保存．測(cè)定時(shí)放37℃水浴箱速融，檢測(cè)過(guò)程避免反復(fù)凍融．

1．3 儀器BS?200全自動(dòng)生化分析儀（深圳邁瑞）；ST?360酶標(biāo)儀（上?？迫A）；MF?192深低溫冰箱（日本三洋）．

1．4 試劑及測(cè)定方法MMP?9、TIMP?1采用ELISA法，由武漢華美生物工程有限公司提供的CUSABIO（美國(guó)）試劑，由專人嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作；腎功能指標(biāo)如BUN、Cr、胱抑素C（CysC）、UA等均采用常規(guī)方法在生化分析儀上操作；腎小管標(biāo)志物α1?MG采用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法（試劑購(gòu)自浙江夸克生物科技有限公司）、β2?MG采用比濁法，（試劑購(gòu)自寧波美康生物科技股份有限公司）．1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用±s表示，組間比較采用一維方差分析，P＜0．05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義．

2 結(jié)果

血清MMP?9濃度比較，雖然CRF組中濃度較高，但方差分析提示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）；血清TIMP?1濃度比較，腎功能衰竭的程度均呈上升趨勢(shì)，其中CRFⅣ組濃度最高，CRFⅠ組濃度最低，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．001）；尿液中TIMP?1濃度比較，CRFⅣ組最高，CRFⅠ組最低，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．001，表1）．慢性腎衰竭患者除CRFI組α1?MG、β2?MG指標(biāo)外，其余指標(biāo)均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05，表2、3）．

表1 MMP?9、TIMP?1、尿TIMP?1結(jié)果 （±s）

表1 MMP?9、TIMP?1、尿TIMP?1結(jié)果 （±s）

aP＜0．05 vs對(duì)照組．

組別 n 血清MMP?9（ng／mL）血清TIMP?1（ng／mL）尿液TIMP?1（pg／mL）CRFⅠ組 39 1．19±0．84 2．67±1．24a 802．3±399．6aCRFⅡ組 74 1．05±0．83 3．91±2．22a 3223．1±1403．8aCRFⅢ組 34 1．01±0．57 5．60±2．91a 8353．1±3126．3aCRFⅣ組 13 0．69±0．39 6．70±3．61a 12915．9±4890．5a對(duì)照組 20 0．82±0．28 0．86±0．48 78．1±38．1

表2 各組腎功能的結(jié)果 （±s）

表2 各組腎功能的結(jié)果 （±s）

aP＜0．05 vs對(duì)照組．

組別 n BUN（mg／dL）Cr（mg／dL）CysC（mg／L）UA（μmol／L）CRFⅠ組 39 27．28±11．57a 1．65±0．80a 1．97±0．54a 417．4±124．6aCRFⅡ組 74 42．93±13．80a 3．02±0．80a 2．79±0．61a 427．5±94．8aCRFⅢ組 34 68．20±21．30a 5．61±1．05a 4．02±1．32a 470．7±102．8aCRFⅣ組 13 90．30±21．90a 9．03±2．92a 4．59±1．88a 431．2±112．3a對(duì)照組 20 12．10±3．56 0．85±0．23 0．95±0．21 302．3±62．5

表3 各組尿液腎小管標(biāo)志物的結(jié)果 （±s）

表3 各組尿液腎小管標(biāo)志物的結(jié)果 （±s）

aP＜0．05 vs對(duì)照組．

組別 n α1?MG（mg／L） β2?MG（mg／L） NAG（U／L）CRFⅠ組 39 16．50±12．60 1．14±0．79 20．65±15．50aCRFⅡ組 74 26．00±18．30a 4．46±3．21a 24．60±12．00aCRFⅢ組 34 49．70±25．60a 7．02±5．34a 27．00±9．33aCRFⅣ組 13 40．30±22．80a 6．18±4．22a 19．80±9．77a對(duì)照組 20 7．60±4．86 0．18±0．16 8．52±3．45

3 討論

研究表明，MMPs／TIMPs的平衡失調(diào)與腎間質(zhì)纖維化間存在相關(guān)性，腎功能衰竭患者無(wú)論病因如何，最終均表現(xiàn)為血清TIMP?1和尿液TIMP?1含量增高；且TIMP?1的高表達(dá)更為重要［1，3］．雖有研究發(fā)現(xiàn)腎臟病患者腎小管間質(zhì)MMP?9表達(dá)較正常組顯著增強(qiáng)，間質(zhì)纖維化程度越重則其表達(dá)越弱［4－5］，但本研究血清MMP?9的結(jié)果組間差異不大．有文獻(xiàn)［6－7］報(bào)道認(rèn)為腎小管間質(zhì)TIMP?1的表達(dá)與病變腎小管腎間質(zhì)呈顯著正相關(guān)，這和本研究結(jié)果較為相似，表明TIMP?1表達(dá)增高，導(dǎo)致ECM降解減少，最終導(dǎo)致腎組織纖維化的發(fā)生．所以TIMP?1在腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生中起著不可替代的作用．曹靈等［8］研究發(fā)現(xiàn)TIMP?1升高參與了腎小球基底膜和腎小管基底膜的增厚，在膜性腎病的發(fā)病機(jī)理中起著重要作用．

所以使用相應(yīng)的藥物特別是中藥來(lái)起著提升MMP?9，抑制TIMP?1的作用，緩解腎間質(zhì)的纖維化，從而延遲進(jìn)入終未期腎衰，一直是臨床工作的追求．葉婷婷［9］研究發(fā)現(xiàn)，腎炎康復(fù)片可以下調(diào)TIMP?1在UUO模型SD大鼠腎間質(zhì)中的表達(dá)，從而延緩腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展．有研究使用腎衰康膠囊、保元強(qiáng)腎I號(hào)、等藥物治療慢性腎衰竭患者均取得較好療效［10－12］；另外，還有研究發(fā)現(xiàn)中藥對(duì)抗腎臟纖維化有著較為重要的作用［13－15］．腎衰康膠囊、保元強(qiáng)腎I號(hào)均是本院制劑，已取得了省藥監(jiān)局的批文．

本研究探討了MMP?9和TIMP?1在慢性腎衰竭患者中的表達(dá)，但對(duì)于中藥對(duì)MMP?9和TIMP?1的作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究．

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The expression of matrix metalloproteinase?9 and tissue inhibitor of matrix metalloprotein?ase?1 in patients with chronic renal failure

XIE Bing，JIANG Li?Ping，WANG Jun，XIA Shang
Hospital of traditional Chinese Medicine of Dantu District，Zhen?jiang 212028，China

AIM：To investigate the effect of matrix metallopro?teinase?9（MMP?9） and tissue inhibitor of tissue inhibitor of matrix metalloproteinase?9（TIMP?1）in the pathological changes of chronic renal failure by measuring the expression of MMP?9 and TIMP?1 in patients with chronic renal failure．METHODS：The concentration of MMP?9 and TIMP?1 in serum was determined by ELISA method in patients with different stages of chronic renal failure．RESULTS：The serum level of MMP?9 had no significant differences among different groups（P＞0．05），the serum and urine level of TIMP?1 had an ascending tendency with the severity of renal failure，and there were significant differences among different groups（P＜0．05）．All index except α1?MG and β2?MG in patients with chronic renal failure were significantly higher than those of control group（P＜0．05）．CONCLUSION：Through the detection of serum MMP?9，TIMP?1 and urine TIMP?1 concentra?tions，we can better understand the degree of chronic renal failure and the formation of renal interstitial fibrosis．

MMP?9；TIMP?1；Renal function；Renal interstitial fibrosis；Renal tubular markers

R692

A

2095?6894（2017）02?37?03

2016－11－22；接受日期：2016－12－15

解 冰．E?mail：499156048＠qq．com