正交試驗(yàn)法優(yōu)選化濕潤(rùn)女膠囊的提取工藝*

李佰成，劉軍峰，杜穩(wěn)俠，陳久霞

1.陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安710003)，2.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院(西安710004)

·方藥縱橫·

正交試驗(yàn)法優(yōu)選化濕潤(rùn)女膠囊的提取工藝*

李佰成1，劉軍峰1，杜穩(wěn)俠2，陳久霞2△

1.陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安710003)，2.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院(西安710004)

目的：優(yōu)選化濕潤(rùn)女膠囊的提取工藝。方法：根據(jù)水提部分主要藥材所含化學(xué)成分，選擇連翹中的咖啡酸作為指標(biāo)性成分，再結(jié)合干浸膏得率，以煎煮次數(shù)，加水量，煎煮時(shí)間為考察因素，通過正交試驗(yàn)法確定最佳提取工藝。結(jié)果：最佳提取工藝為：藥材加水煎煮3次，每次10倍量，煎煮1.5 h。結(jié)論：經(jīng)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明最佳提取工藝為藥材加水煎煮3次，每次10倍量，煎煮1.5 h，所得干浸膏得率和咖啡酸含量均較高。

化濕潤(rùn)女膠囊由清半夏、白花蛇舌草、連翹等中藥組成,具有健脾利濕，理氣化濁等功效[1-2],用于婦女不孕癥，屬脾失健運(yùn)，濕濁壅塞經(jīng)絡(luò)、胞宮所致不孕者[3]。處方連翹和半夏中均含有咖啡酸，且咖啡酸水溶性較好因此，以咖啡酸含量和有效部位提取量為考察指標(biāo)，對(duì)其水煎煮工藝進(jìn)行優(yōu)選。試驗(yàn)方法采用正交試驗(yàn)法，咖啡酸含量測(cè)定方法采用高效液相色譜法。

材料與方法

1 材 料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器:高效液相色譜儀(日本,Shimadzu LC-2010A)；電子分析天平(北京,賽多利斯,型號(hào)：BS210S ,d=0.1 mg)；電子分析天平(北京,賽多利斯,型號(hào)：BT25S,d=0.01 mg)； 離心機(jī)(南京,型號(hào)：LXJ-Ⅱ)；水浴鍋(天津,泰斯特,型號(hào)：DK-98-ⅡA)；超聲提取儀(南京，熊貓集團(tuán)，型號(hào)：UP3200H型)。

1.2 藥材:處方中所用川楝子、白芥子、白花蛇舌草、連翹等藥材采購(gòu)于西安市萬壽路藥材市場(chǎng)；咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)品為供含量測(cè)定用對(duì)照品，由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；甲醇購(gòu)自美國(guó)Fisher公司，為色譜純?cè)噭黄渌噭┵?gòu)自天津市化學(xué)試劑廠，均為分析純；蒸餾水自制。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì): 按處方量比例，稱取川楝子、 白芥子、皂角刺、白花蛇舌草各12 g，清半夏、蜂房各10 g，莪術(shù)9 g，連翹6 g，共計(jì)83 g，平行9份，隨機(jī)取樣編為1～9個(gè)試驗(yàn)號(hào)。按正交表L9(34)中每個(gè)試驗(yàn)號(hào)要求進(jìn)行試驗(yàn)，合并提取液，濾過，精密量取離心(3000轉(zhuǎn)/min)濾過后的濾液100，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，對(duì)藥材水提取效率影響較大的因素有：溶劑用量、提取次數(shù)，提取時(shí)間，因此本實(shí)驗(yàn)采用L9(34)正交試驗(yàn)法對(duì)這三個(gè)因素進(jìn)行考察。實(shí)驗(yàn)因素水平表見表1。

表1 試驗(yàn)因素水平表

2.2 咖啡酸的HPLC測(cè)定方法

2.1.1 樣品制備：按L9(34)正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，取各樣品離心后的濾液適量，置于100℃水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇轉(zhuǎn)移至25 ml量瓶中，超聲提取30 min，放涼，加70%甲醇至刻度，搖勻，備用。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)品4.45 mg，加70%甲醇配制為每1 ml含咖啡酸0.0356 mg的溶液，作為咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.1.3 HPLC測(cè)定方法: DIKMA HPLC色譜柱(5u 250×4.6 mm)；流動(dòng)相：甲醇-磷酸鹽緩沖液(pH值3.8～4.0)(21:79)；檢測(cè)波長(zhǎng)：323 nm；流速：1.0 ml/min。理論塔板數(shù)應(yīng)不低于3000(按咖啡酸峰計(jì)算)。進(jìn)樣量：10 μl。

2.3 提取物測(cè)定方法：取各樣品離心后的濾液100 ml，置于100℃水浴蒸干，105℃干燥3 h，置干燥器中，放涼至室溫，迅速稱定重量，計(jì)算干浸膏得率。

結(jié) 果

1 正交試驗(yàn)結(jié)果 化濕潤(rùn)女膠囊L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果，見表2。

2 方差分析 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表3)可見，以提取物得率為考察指標(biāo)時(shí)，提取效率最高的工藝組為A3B2C3；方差分析顯示，三個(gè)因素中提取次數(shù)對(duì)提取率影響最大，提取時(shí)間和加水量對(duì)提取率影響較小。以咖啡酸提取量為考察指標(biāo)時(shí)，結(jié)果與上述試驗(yàn)結(jié)果一致，提取效率最高的工藝組為A3B2C3；方差分析同樣顯示，三個(gè)因素中提取次數(shù)對(duì)提取率影響最大，提取時(shí)間和加水量對(duì)提取率影響較小。因此，綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定最優(yōu)提取工藝為A2B2C3。

3 驗(yàn)證試驗(yàn) 正交實(shí)驗(yàn)得出的最佳提取工藝不在正交試驗(yàn)的9個(gè)實(shí)驗(yàn)中，因此需對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證，按處方量比例，稱取川楝子、 白芥子、皂角刺、白花蛇舌草各12 g，清半夏、蜂房各10 g，莪術(shù)9 g，連翹6 g，共計(jì)83 g，平行三份，按照A2B2C3實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定咖啡酸提取量和提取物得率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正交實(shí)驗(yàn)得出的最佳提取工藝其咖啡酸提取量和提取物得率均較高，且重復(fù)性良好，因此確定A2B2C3為最優(yōu)提取工藝，即藥材加水煎煮3次，每次10倍量，每次煎煮時(shí)間為1.5 h，見表4。

表2 化濕潤(rùn)女膠囊L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 干浸膏得率及咖啡酸得量方差分析

F0.1(2.2)=9.00 F0.05(2.2)=19.00 F0.01(2.2)=99.00

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

討 論

復(fù)方制劑提取工藝的優(yōu)化對(duì)制劑的質(zhì)量控制和臨床療效至關(guān)重要，本實(shí)驗(yàn)采用處方中主要有效成分咖啡酸和提取物得量為考察指標(biāo)篩選最佳提取工藝。實(shí)驗(yàn)建立的咖啡酸HPLC測(cè)定法分離度良好，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性均較好，可準(zhǔn)確測(cè)定樣品中咖啡酸含量，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用A2B2C3工藝條件，即加水煎煮3次，每次10倍量，煎煮1.5 h，咖啡酸含量和有效部位提取量最高，且重復(fù)性良好，因此確定為最佳提取工藝。

[1] 張海燕.連翹化學(xué)成分及藥理活性的研究進(jìn)展[J].中藥材，2001, 23(10): 657-660.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.

[3] 黃 硯, 楊俊卿, 謝靈瑤. 咖啡酸對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元鋁鹽損傷的保護(hù)作用 [J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2009, 25(12):1605.

(收稿：2016-10-15)

* 陜西省社會(huì)發(fā)展科技攻關(guān)基金資助項(xiàng)目(2016SF-370)

色譜法，高壓液相 @化濕潤(rùn)女膠囊 正交試驗(yàn) 提取工藝

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A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.04.057

△通訊作者