甲狀腺腫瘤組織中P73蛋白與VEGF水平的相關(guān)性分析

羅趙鑫，陳仰新，馬智勇，李梅

（廣東省佛山市第五人民醫(yī)院病理科，廣東 佛山 528211）

甲狀腺腫瘤組織中P73蛋白與VEGF水平的相關(guān)性分析

羅趙鑫，陳仰新，馬智勇，李梅

（廣東省佛山市第五人民醫(yī)院病理科，廣東 佛山 528211）

目的：探討甲狀腺腫瘤組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）與P73蛋白水平的相關(guān)性。方法：選擇我院2010年7月至2015年6月收治的50例甲狀腺惡性腫瘤患者為A組，選擇同期在我院接受治療的50例甲狀腺良性腫瘤患者為B組，另選50例體檢健康者為C組，采用免疫組織化學(xué)法分別檢測3組受檢者VEGF與P73蛋白水平，分析其相關(guān)性。結(jié)果：A、B組VEGF陽性率分別為82.0%、86.0%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），C組VEGF陽性率為0，與B組、A組對比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；A、B組P73陽性率分別為88.0%、90.0%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），C組P73陽性率為0，與A組、B組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；P73蛋白與VEGF水平在惡性甲狀腺腫瘤組織中呈正相關(guān)性（r= 0.379，P＜0.05）。結(jié)論：P73蛋白與VEGF在甲狀腺腫瘤組織中呈高表達，在正常甲狀腺組織中無表達，二者在甲狀腺良性腫瘤與惡性腫瘤中均呈正相關(guān)性，可作為甲狀腺腫瘤診斷指標(biāo)，具有一定參考價值。

甲狀腺腫瘤；P73蛋白；免疫組織化學(xué)；血管內(nèi)皮生長因子

甲狀腺腫瘤為常見的內(nèi)分泌腫瘤之一，多見于女性，因腫塊位于頸部，會導(dǎo)致患者出現(xiàn)聲嘶、呼吸困難、吞咽困難等，嚴重影響患者生存質(zhì)量［1］。甲狀腺腫瘤發(fā)病機制復(fù)雜，且發(fā)生及發(fā)展過程為多因素共同參與，早期診斷難度大。目前，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）作為作用最強的血管通透因子，對腫瘤血管生成具有重要作用。p73定位于1號染色體短臂（1p36.33），此區(qū)在人類腫瘤發(fā)生中缺失頻率高，隱藏多個不同抑癌基因。本研究分別對甲狀腺腫瘤及正常甲狀腺標(biāo)本進行檢測，分析P73蛋白與VEGF在甲狀腺腫瘤組織中的表達，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2010年7月至2015年6月收治的50例甲狀腺惡性腫瘤患者為A組，選擇同期在我院接受治療的50例甲狀腺良性腫瘤患者為B組，所有患者均接受病理診斷，符合甲狀腺腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。A組：男6例，女44例，年齡23～68歲，平均年齡（48.3±8.6）歲；B組：男8例，女42例，年齡21～66歲，平均年齡（46.9± 8.2）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合甲狀腺腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)；同意參與本研究；18歲以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期、哺乳期女性；合并其他嚴重內(nèi)分泌疾病者；嚴重外傷者。另選50例體檢健康者為C組，男10例，女40例，年齡23～68歲，平均年齡（46.3± 8.1）歲。3組受檢者一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），存在可比性。

1.2 試劑 鼠抗人VEGF單克隆抗體（mxMAB-0243，福州邁新生物制劑有限公司），鼠抗人P73單克隆抗體（zsZM-0409）、SP試劑盒（SP-900）、PBS磷酸鹽緩沖液（zsZLI-9062）、pH9.0 EDTA抗原修復(fù)液（zsZLI9096）、DAB染色劑、Citrate枸櫞酸鹽緩沖液（zxZLI-9065）等為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法 活檢取A組、B組、C組患者甲狀腺標(biāo)本，以10%福爾馬林固定，石蠟包埋，制作為干切片，以SP法染色，加鼠抗人VEGF單克隆抗體、鼠抗人P73單克隆抗體，PBS磷酸鹽緩沖液做空白對照，陽性切皮做陽性對照，嚴格根據(jù)試劑盒說明書操作。

1.4 觀察指標(biāo) 以IsrKi K綜合計分法判斷P73、VEGF在組織中的陽性表達，VEGF蛋白染色表達為細胞漿內(nèi)或細胞膜出現(xiàn)棕褐色或黃色顆粒，P73染色表達為細胞核內(nèi)呈棕褐色及棕黃色顆粒，部分為細胞漿或細胞膜表達。隨機計數(shù)5個視野，根據(jù)陽性染色深度與細胞數(shù)計分，陽性細胞數(shù)＜10%為0分，10%～45%為1分，46%～70%為2分，＞70%為3分；染色深度為細胞呈色反應(yīng)為準(zhǔn)，不著色為0分，淺黃色為1分，深黃色為2分，棕黃色為3分。上述兩項計分總分對陽性結(jié)果分級，0分為陰性，1～2分為弱陽性，3～4分為陽性，5分以上為強陽性，弱陽性、陽性、強陽性均視為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗或確切概率法檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Spearman等級相關(guān)性分析比較相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 VEGF與P73蛋白表達 A組、B組VEGF陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.5952，P＞0.05），C組與B組、A組對比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2= 58.432，P＜0.05）；A組、B組P73陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.2043，P＞0.05），C組與A組、B組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=60.378，P＜0.05），見表1。

表1 3組受檢者的P73蛋白與VEGF表達情況分析［n（%）］

2.2 相關(guān)性分析 50例甲狀腺惡性腫瘤患者中，43例VEGF蛋白表達陽性，其中有40例P73蛋白表達陽性，7例VEGF蛋白表達陰性患者中有4例為P73蛋白表達陽性，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示，VEGF與P73蛋白表達呈正相關(guān)（r=0.379，P＜0.05）。

3 討論

惡性甲狀腺癌占人類惡性腫瘤1%，是最常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤。早期診斷甲狀腺腫瘤不僅需要進行細胞穿刺病理檢查，還需要借助特異分子生物學(xué)標(biāo)記輔助診斷，為臨床治療提供參考依據(jù)。腫瘤生長與血管生成相互依賴，血管生存是瘤體產(chǎn)生及發(fā)展的重要條件，而VEGF是誘發(fā)血管生長的主要因素，直接參與腫瘤血管生成。有研究表明，VEGF表達過度與腫瘤生長及侵襲呈密切相關(guān)性［3］。因此，將VEGF作為特異性腫瘤血管生成標(biāo)志物，檢測VEGF為腫瘤治療提供參考。有研究顯示，VEGF在腫瘤組織中表達對原發(fā)瘤生長與浸潤造成直接影響，可將VEGF作為腫瘤獨立預(yù)后判斷指標(biāo)［4］。有研究對甲狀腺惡性腫瘤、良性腫瘤及正常標(biāo)本進行VEGF檢測顯示，正常標(biāo)本VEGF呈陰性表達，在甲狀腺良性腫瘤中表達較弱，而在惡性腫瘤中表達較強，其水平越高，腫瘤的惡性程度越高［5］。

本研究對甲狀腺良性腫瘤、惡性腫瘤及正常標(biāo)本進行VEGF測定，A組VEGF陽性率與B組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），表示VEGF在甲狀腺腫瘤中均為高表達，可能與本研究中淋巴轉(zhuǎn)移組織類型病例較少相關(guān)。

p53基因為人類發(fā)現(xiàn)與腫瘤相關(guān)性最高的基因，而p73是p53家族成員，其功能具有相似性，為潛在抑癌基因［6］。本研究對甲狀腺腫瘤與正常組織進行P73蛋白檢測，結(jié)果顯示，甲狀腺腫瘤P73陽性表達與正常組織差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但是甲狀腺惡性腫瘤與甲狀腺良性腫瘤差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），表明，P73蛋白表達可能與是否存在淋巴組織轉(zhuǎn)移無關(guān)。抑癌基因可直接對VEGF水平進行調(diào)控，影響腫瘤的發(fā)生及發(fā)展［7］。本研究顯示，P73蛋白與VEGF呈陽性表達，二者呈正相關(guān)，P73可對VEGF表達進行調(diào)控，也能促進腫瘤血管生成，表明腫瘤血管調(diào)控不僅與血管生長因子相關(guān)，也與活性基因相關(guān)［8］。

綜上所述，甲狀腺腫瘤組織中VFGF水平與P73蛋白呈正相關(guān)，均參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，可通過測定VEGF、P73蛋白陽性表達為臨床治療提供指導(dǎo)。本研究例數(shù)較少，需要更多前瞻性研究進一步探討。

［1］馮娜，楊琛.甲狀腺腫瘤超聲影像評估系統(tǒng)研究進展［J］.中國腫瘤，2014，23（7）：591-596.

［2］蔡安慶，吳新勇.甲狀腺腫瘤外科治療134例臨床分析［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2014，20（18）：3407-3408.

［3］何章彪，曹翠萍，劉衛(wèi)華，等.Netrin-1及VEGF在食管鱗癌組織中的表達水平及其相關(guān)性研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2013，42（17）：1965-1967.

［4］鄭偉，張新，賈琳.Survivin蛋白及VEGF在子宮內(nèi)膜癌中的表達及相關(guān)性分析［J］.中國實驗診斷學(xué)，2013，17（3）：498-500.

［5］李銳，李冬梅，馬洪喜.宮頸鱗癌組織中p21和VEGF蛋白表達的實驗研究［J］.中國婦幼保健，2014，29（14）：2241-2242.

［6］王瑞才，朱建友，張海鵬，等.胃腺癌組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-13和p73的表達及意義［J］.國際腫瘤學(xué)雜志，2015，42（8）：576-579.

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［8］田曉慧，胡斌，秦溶，等.血清IGF-1水平及癌組織VEGF表達在結(jié)腸癌患者診斷和治療中的臨床意義［J］.實用臨床醫(yī)藥雜志，2014，18（3）：9-11.

（吳迪編輯）

Analysis of Correlation between P73 Protein and VEGF Level in Thyroid Tumor Tissue

LUO Zhaoxin，CHEN Yangxin，MA Zhiyong，LI Mei

（Ddpartment of Pathology，F(xiàn)oshan Fifth People's Hospital of Guangdong Province，F(xiàn)oshan 528211，China）

Objective：To explore the correlation between the level of vascular endothelial growth factor（VEGF）and P73 protein in thyroid tumor tissue.Methods：A total of 50 cases of patients with thyroid malignant tumor treated in our hospital from Jul 2010 to Jun 2015 were selected as group A，and 50 cases of patients with benign thyroid tumor in the same period were selected as group B，while another 50 healthy subjects were enrolled as group C.The levels of VEGF and P73 protein of three groups were detected by immunohistochemistry respectively，and the correlation between them was analyzed.Results：The positive rate of VEGF in group A and group B was 82.0%and 86.0%，and there was no significant difference（P＞0.05）.The positive rate of VEGF in group C was 0，compared with that in group B and group C，the difference was statistically significant（P＜0.05）.The positive rate of P73 in group A and group B was 88.0%and 90.0%，and there was no significant difference between the two groups（P＞0.05）. The positive rate of P73 in group C was 0，compared with that in group A and group B，the difference was statistically significant（P＜0.05）.There was a positive correlation between P73 protein and VEGF level in the malignant thyroid tumor tissues（r=0.379，P＜0.05）.Conclusions：The P73 protein and VEGF in thyroid tumor tissue show high-level expression，which are not espressed in normal thyroid tissue.There are positive correlation between P73 protein and VEGF level in the benign thyroid tumors and malignant，which can be used as diagnostic indicators of thyroid tumors.

thyroid neoplasms；P73 protein；immunohistochemistry；vascular endothelial growth factor

R736.1

A

1008-2344（2017）01-0018-03

10.16753/j.cnki.1008-2344.2017.01.005

2016-07-05