益氣活血解毒湯對(duì)心肌缺血大鼠TNF-α、IL-6及心肌組織的影響*

陳 浩胡業(yè)彬

（1.江蘇省無(wú)錫市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 無(wú)錫 214001，2.安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥230031）

急性心肌缺血是由于心肌供血不足和 （或）心肌耗氧量增加，引起一系列心肌血氧供需平衡障礙，可導(dǎo)致心肌壞死。心肌缺血最常見(jiàn)的原因是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈管腔狹窄或閉塞，以及在狹窄的基礎(chǔ)上發(fā)生冠狀動(dòng)脈痙攣而出現(xiàn)急性或慢性心肌供血不足［1］。本課題組認(rèn)為，本病乃本虛標(biāo)實(shí)之證，氣虛為發(fā)病的始動(dòng)因素，氣虛無(wú)力行血而致瘀血內(nèi)阻，血瘀日久釀生毒邪，瘀毒阻絡(luò)為急性心肌缺血的基本病機(jī)。因此，本研究擬觀察中藥益氣活血解毒湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血大鼠心電圖、腫瘤壞死因子－α（TNF-α）、白細(xì)胞介素（IL-6）及心肌組織的影響，探討其抗心肌缺血的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用健康成年Wistar大鼠70只，雌雄各半，體質(zhì)量200～220 g，由安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所提供。合格證號(hào)：皖醫(yī)動(dòng)準(zhǔn)字081646號(hào)。顆粒飼料，購(gòu)于安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所。

1.2 儀器 80-2離心機(jī)：上海手術(shù)器械廠；511大鼠心電圖儀：上海光電醫(yī)學(xué)儀器公司；Olympusbx顯微鏡：日本Olympus公司生產(chǎn)；石蠟切片機(jī)：德國(guó)徠卡公司；GC-910放射免疫計(jì)數(shù)器：中國(guó)科技大學(xué)創(chuàng)新股份有限公司；KDC-2046低速冷凍離心機(jī)：中國(guó)科技大學(xué)創(chuàng)新股份有限公司；興建干燥儀：青島化工制造廠；SH-801放免計(jì)數(shù)儀：國(guó)營(yíng)二六二廠。

1.3 試藥 TNF-α試劑盒：解放軍總醫(yī)院科技中心放免所，批號(hào)：20080611；IL-6試劑盒：解放軍總醫(yī)院科技中心放免所，批號(hào)：20080611；復(fù)方丹參滴丸：天津天士力制藥股份有限公司生產(chǎn)。硝酸異山梨酯片：5 mg/粒，由天津太平洋制藥有限公司生產(chǎn)；異丙腎上腺素注射液：1 mg/支，由上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)；水合氯醛：北京化學(xué)試劑公司生產(chǎn)。益氣活血解毒湯：由紅參5 g，丹參 10 g，水蛭 3 g，丹皮 10 g，連翹 10 g，黃芩 10 g等組成，為成人每日劑量，原生藥共計(jì)48 g。生藥飲片一次性購(gòu)于安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院。除水蛭、紅參外的藥物先浸泡30 min；水蛭研粉，打末后混于藥液中；紅參另煎成汁液后兌入。

1.4 分組與給藥 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為7組，分別為益氣活血解毒湯高、中、低劑量組，空白對(duì)照組，模型組，復(fù)方丹參滴丸組，硝酸異山梨酯組，每組10只。益氣活血解毒湯高、中、低劑量組分別按成人等效劑量的14倍、7倍、3.5倍灌胃給藥（1 mL/100 g 體質(zhì)量），生藥劑量分別為 11.2、5.6、2.8 g/kg。復(fù)方丹參滴丸組：復(fù)方丹參滴丸用蒸餾水溶解為0.35粒/100 mL，按1 mL/100 g體質(zhì)量灌胃。硝酸異山梨酯組：硝酸異山梨酯片用蒸餾水溶解為0.35 mg/100 mL，按1 mL/100 g體質(zhì)量灌胃?？瞻讓?duì)照組和模型組予蒸餾水按1 mL/100 g體質(zhì)量灌胃。每日1次，連續(xù)7 d。

1.5 模型制備 于給藥第6、7日，大鼠腹腔注射異丙腎上腺素（ISO）10 mg/kg，空白對(duì)照組腹腔注射0.9%氯化鈉注射液2 mL。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè)

1.6.1 心電圖 給藥第6日灌胃30 min后給予大鼠水合氯醛麻醉，四肢、胸前放置電極，記錄動(dòng)物正常標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ、V1導(dǎo)聯(lián)心電圖。 造模后即于 30 s、1 min、2 min、3 min、5 min、10 min、30 min記錄Ⅱ?qū)?lián)、V1導(dǎo)聯(lián)心電圖。按文獻(xiàn)報(bào)道的方法［2］觀察各組上述時(shí)間點(diǎn)J點(diǎn)（QRS波群與T波交點(diǎn)）的下降和上升的絕對(duì)值（記為△J值=注射ISO后各時(shí)間點(diǎn)J點(diǎn)值-注射前J點(diǎn)值），以ΣΔJ總偏移值的平均值作為衡量心肌損傷程度的觀察指標(biāo)。ECG紙速調(diào)整為50 mm/s。

1.6.2 血液指標(biāo) 給藥第7日灌胃30 min后給予大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血約5～6 mL，離心取血清按試劑盒規(guī)定檢測(cè) TNF-α、IL-6。

1.6.3 心肌組織形態(tài)學(xué) 取血處死大鼠后，取出心臟，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分，取左室游離壁橫斷面心肌組織。按以下步驟操作：將左心室組織浸泡4%多聚甲醛充分固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，常規(guī)石蠟包埋，蠟塊從左心室心尖部作連續(xù)切片，厚度為5 μm；HE染色，光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件分析。計(jì)量資料以（±s）表示，采用單因素方差分析及LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠TNF-α、IL-6水平比較 見(jiàn)表1。模型組大鼠血清TNF-α、IL-6含量最高，與其余各組比較均有顯著差異（P＜0.05或0.01）。各用藥組比較雖然有輕微差異，但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果表明益氣活血解毒湯能降低急性心肌缺血大鼠的TNF-α、IL-6含量，改善急性心肌缺血大鼠的內(nèi)環(huán)境紊亂。

表1 各組大鼠 TNF-α、IL-6 水平比較（ng/mL，±s）

表1 各組大鼠 TNF-α、IL-6 水平比較（ng/mL，±s）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組 別 n TNF-α IL-6空白對(duì)照組 7 1.24±0.17** 143.18±24.36**模型組 8 2.08±0.42 215.06±40.69復(fù)方丹參滴丸組 8 1.52±0.23* 191.27±34.29*硝酸異山梨酯組 8 1.54±0.41* 193.46±27.7*益氣活血解毒湯低劑量組 8 1.49±0.28* 202.25±18.9*益氣活血解毒湯中劑量組 8 1.34±0.15** 169.27±42.2**益氣活血解毒湯高劑量組 8 1.29±0.11** 157.31±15.5**

2.2 各組大鼠造模前后ΣΔJ總偏移值的平均值變化 見(jiàn)表2。模型組J點(diǎn)總偏移值的平均值最大，提示心肌損傷最為嚴(yán)重。模型組與益氣活血解毒湯高劑量組、硝酸異山梨酯組比較有顯著性差異（P＜0.01）。與益氣活血解毒湯中劑量組、低劑量組、復(fù)方丹參滴丸組比較有差異（P＜0.05）。表明益氣活血解毒湯對(duì)ISO導(dǎo)致的心肌損傷具有一定的保護(hù)作用，以高劑量組效果最為顯著。

表2 各組大鼠造模前后ΣΔJ總偏移值的平均值比較（±s）

表2 各組大鼠造模前后ΣΔJ總偏移值的平均值比較（±s）

組 別 n ΣΔJ（mV）空白對(duì)照組 7 0.57±0.21模型組 8 1.56±0.59復(fù)方丹參滴丸組 8 0.76±0.41硝酸異山梨酯組 8 0.61±0.33**益氣活血解毒湯低劑量組 8 0.73±0.36*益氣活血解毒湯中劑量組 8 0.83±0.58*益氣活血解毒湯高劑量組 8 0.65±0.32**

2.3 對(duì)心肌缺血大鼠心肌病理?yè)p傷程度的影響 見(jiàn)圖1?？瞻讓?duì)照組心肌細(xì)胞排列整齊，無(wú)明顯變性壞死，間質(zhì)無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)水腫；模型組主要表現(xiàn)為心肌廣泛水腫，間質(zhì)增寬，小灶性心肌細(xì)胞變性壞死，壞死處心肌細(xì)胞肌漿溶解或空泡變，局部有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，部分區(qū)域心肌橫紋消失、扭曲、紊亂，心肌間質(zhì)血管擴(kuò)張充血，心肌細(xì)胞胞漿淡染；益氣活血解毒各給藥組均能減輕心肌病理?yè)p傷的作用，尤以高劑量組最佳。

圖1 各組心肌組織形態(tài)學(xué)（HE，×200）

3 討 論

急性心肌缺血及冠狀內(nèi)皮損傷后，可引起局部的炎癥反應(yīng)，使冠脈收縮和痙攣，進(jìn)一步損傷血管和心肌。研究表明［3-5］，TNF-α、IL-6與急性心肌缺血關(guān)系密切，本研究表明益氣活血解毒湯可降低TNF-α、IL-6的水平，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，證實(shí)益氣活血解毒湯可抑制炎癥反應(yīng)對(duì)缺血心肌起保護(hù)作用。

ISO是β受體激動(dòng)劑，ISO與β受體結(jié)合后，促進(jìn)Gs蛋白釋放β亞單位激活乙酰膽堿誘導(dǎo)的離子通道，減少細(xì)胞質(zhì)Ca2+濃度和Na+內(nèi)流，并成線粒體鈣超載，從而引起心肌電生理變化，表現(xiàn)心電圖曲線中J點(diǎn)下移，T波下降［6］。已有研究表明注射ISO前后比較T波下降并無(wú)顯著差異。本實(shí)驗(yàn)選用J點(diǎn)下移值作為陽(yáng)性指標(biāo)本試驗(yàn)型組大鼠J點(diǎn)下移值，生化指標(biāo)與正常組比較有著差異，反映了心肌缺血時(shí)主要指標(biāo)的改變，說(shuō)明用ISO注射法復(fù)制模型成功［7］。益氣活血解毒湯各劑量組均可抑制注射ISO后引起的J點(diǎn)下降或抬高，能減輕心肌病理?yè)p傷的作用，尤以高劑量組最佳；說(shuō)明益氣活血解毒湯可顯著改善ISO引起的大鼠急性心肌缺血；其作用機(jī)制可能在于減輕細(xì)胞膜損傷程度，穩(wěn)定細(xì)胞膜，使缺血損傷后心臟水腫降低有關(guān)。

急性心肌缺血?dú)w屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”、“胸痹心痛”等范疇。本研究益氣、活血、解毒治法相結(jié)合，以紅參大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)益肺脾腎，益氣生血，氣血同調(diào)為君藥。丹參，活血化瘀，以通為補(bǔ)，通行血脈；紅參配丹參，補(bǔ)而不滯，氣行則血行，活血而不傷正，祛瘀而不留邪。水蛭為蟲(chóng)藥，破血逐瘀通絡(luò)，入絡(luò)搜邪，解毒通痹，與丹參合而為臣。丹皮活血散瘀，涼血解毒，清血中之伏毒，除脈中之瘀滯；佐以連翹清熱解毒，黃芩清熱燥濕，瀉火解毒，諸藥配伍，補(bǔ)而不滯，通而不破，諸藥合用，共奏益氣活血、解毒通絡(luò)之功。本研究表明，益氣活血解毒湯能顯著對(duì)抗ISO所致大鼠急性心肌缺血、損傷作用，尤以高劑量組為佳，其作用機(jī)制可能與其抑制炎癥反應(yīng)，降低TNF-α、IL-6的水平有關(guān)。

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