李臘梅, 張 宏, 黃 青,2
(1. 中國(guó)科學(xué)院 合肥物質(zhì)科學(xué)研究院 技術(shù)生物與農(nóng)業(yè)工程研究所, 合肥 230031;2. 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué), 合肥 230026)
介質(zhì)阻擋放電等離子體滅藻過(guò)程中藻細(xì)胞內(nèi)含物降解規(guī)律的三維熒光光譜研究
李臘梅1, 張 宏1, 黃 青1,2
(1. 中國(guó)科學(xué)院 合肥物質(zhì)科學(xué)研究院 技術(shù)生物與農(nóng)業(yè)工程研究所, 合肥 230031;2. 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué), 合肥 230026)
應(yīng)用介質(zhì)阻擋放電(Dielectric barrier discharge,DBD)等離子體處理有毒有害藍(lán)藻,并對(duì)藍(lán)藻細(xì)胞損傷過(guò)程及藻毒素降解效率進(jìn)行研究。以三維熒光光譜(Three dimensional excitation emission matrix fluorescence spectroscopy,EEM)技術(shù)為手段,通過(guò)區(qū)域熒光體積積分(Fluorescence regional integration,F(xiàn)RI)的方法,考察了介質(zhì)阻擋放電等離子體損傷銅綠微囊藻(Microcysticaeruginosa)過(guò)程中藻細(xì)胞熒光類內(nèi)含物釋放降解的規(guī)律;此外,還利用高效液相色譜(HPLC)技術(shù),檢測(cè)了滅藻過(guò)程中微囊藻毒素(Microcystin-LR,MC-LR)含量的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。結(jié)果表明,隨著放電等離子體處理時(shí)間的延長(zhǎng),藻細(xì)胞內(nèi)含物先釋放到細(xì)胞外后,然后逐漸被降解;分析了藍(lán)藻毒素MC-LR的變化過(guò)程與降解效率,證明它最終可以被等離子體完全氧化降解和去除。研究工作不僅顯示了采用低溫等離子體可以有效滅藻和降解藻毒素,同時(shí)也展示了三維熒光光譜作為一種快速實(shí)時(shí)的觀察分析手段,可以有效應(yīng)用于藻細(xì)胞損傷過(guò)程及相關(guān)機(jī)理研究,這將為發(fā)展新的高效滅藻技術(shù)及其安全評(píng)價(jià)方法提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和依據(jù)。
介質(zhì)阻擋放電(DBD);低溫等離子體;三維熒光光譜;銅綠微囊藻;藻毒素;氧化和降解
水體富營(yíng)養(yǎng)化程度加深導(dǎo)致藻類過(guò)度繁殖,形成藍(lán)藻水華,使得水生態(tài)系統(tǒng)的平衡和穩(wěn)定遭到嚴(yán)重破壞[1]。銅綠微囊藻(Microcysticaeruginosa)是夏季藍(lán)藻水華暴發(fā)時(shí)的優(yōu)勢(shì)種群。因此,近年來(lái)針對(duì)如何殺滅銅綠微囊藻細(xì)胞且不造成水體二次污染的研究變成國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)[2-3]。研究發(fā)現(xiàn)放電等離子體能高效殺滅銅綠微囊藻,并證實(shí)羥自由基、雙氧水等放電產(chǎn)生的活性物質(zhì)在滅藻過(guò)程中起著重要作用。羥自由基攻擊使藍(lán)藻細(xì)胞膜破裂,雙氧水進(jìn)入藍(lán)藻細(xì)胞造成細(xì)胞組分的氧化損傷進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞死亡[4-5]。等離子體殺滅藻細(xì)胞的同時(shí),由于細(xì)胞膜受損,細(xì)胞內(nèi)含物不可避免的向水體釋放,這些內(nèi)含物的釋放規(guī)律如何,被釋放的內(nèi)含物是否也能被有效降解以避免對(duì)水體的二次污染,這些都是等離子體滅藻技術(shù)開(kāi)發(fā)應(yīng)用過(guò)程中急需解決的問(wèn)題。
近年來(lái),三維熒光光譜技術(shù)因具有檢測(cè)速度快、靈敏度高、不破壞樣品結(jié)構(gòu)、多組分同時(shí)檢測(cè)分析等優(yōu)點(diǎn)被廣泛地應(yīng)用于湖泊沉積物,水體、土壤中可溶性有機(jī)物的組成結(jié)構(gòu)及遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律等研究。三維熒光光譜通過(guò)不斷改變激發(fā)波長(zhǎng)以獲取激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的同步變化信息,對(duì)多組分復(fù)雜體系中熒光光譜(激發(fā)/發(fā)射,Ex/Em)重疊的對(duì)象進(jìn)行光譜識(shí)別和表征,屬于一種光譜指紋技術(shù)。對(duì)于每一種熒光物質(zhì),都有其特有的三維熒光光譜信息,具有較高的選擇性,能表征的熒光特性包含與結(jié)構(gòu)、構(gòu)型、官能團(tuán)、非均質(zhì)性、分子內(nèi)及分子間的動(dòng)力學(xué)特性等有關(guān)的信息[6]。國(guó)內(nèi)外報(bào)道顯示,三維熒光技術(shù)結(jié)合有效的數(shù)據(jù)分析可以在線對(duì)水體中分布在可見(jiàn)和紫外光譜范圍的多種物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析,如油類、多環(huán)芳香化合物、酚類化合物等[7]。研究人員利用水華藻類活體的三維熒光光譜特征,建立水華藻類實(shí)時(shí)、快速的熒光識(shí)別測(cè)定技術(shù),監(jiān)測(cè)藻類密度和胞外毒素含量的動(dòng)態(tài)變化[8]。利用三維熒光光譜對(duì)藍(lán)藻培養(yǎng)液中提取的腐殖酸進(jìn)行定性與定量分析,探究水華藍(lán)藻生長(zhǎng)周期中腐殖酸的釋放特性,為藍(lán)藻暴發(fā)時(shí)水體中腐殖酸來(lái)源的研究提供新思路[9-10]。但是,關(guān)于滅藻除藻過(guò)程中藻細(xì)胞內(nèi)含物的釋放規(guī)律以及處理中藻細(xì)胞內(nèi)含物被降解的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程,這方面的實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)還鮮有報(bào)道,而這方面的信息對(duì)深入研究滅藻作用機(jī)理、研發(fā)提高滅藻效率的方法和技術(shù)是至關(guān)重要的。為此,本研究采用三維熒光光譜技術(shù),對(duì)介質(zhì)阻擋放電等離子體在滅活銅綠微囊藻過(guò)程中胞內(nèi)溶解性有機(jī)物釋放降解的過(guò)程進(jìn)行研究,并采用區(qū)域熒光體積積分法對(duì)其變化過(guò)程進(jìn)行定量分析,以期對(duì)等離子體滅藻實(shí)際應(yīng)用提供指導(dǎo)。
1.1 銅綠微囊藻的培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)試劑
銅綠微囊藻藻種(Microcysticaeruginosa, FACHB-905)購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所國(guó)家淡水藻種庫(kù),采用BG11培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。銅綠微囊藻母液在光照培養(yǎng)箱中(26±1)℃下進(jìn)行培養(yǎng),光照強(qiáng)度為5000 Lx,光暗周期為16/8 h。當(dāng)藻細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí),取一定量的藻液離心去培養(yǎng)基后用超純水重懸進(jìn)行放電等離子體處理。放電等離子體電源系統(tǒng)及實(shí)驗(yàn)裝置如圖1所示[5]。染料SYBR green I (Sigma,USA),染料Propidium iodide (PI,sigma,USA)為光譜純;MC-LR標(biāo)準(zhǔn)品(Enzo life science,USA),乙腈和甲醇為色譜純(Tedia Company, USA);所采用其他試劑均為分析純,實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。
圖 1 實(shí)驗(yàn)裝置示意圖[5]
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
采用處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的銅綠微囊藻進(jìn)行DBD處理,實(shí)驗(yàn)前調(diào)節(jié)藻細(xì)胞濃度為107個(gè)/mL,離心后用超純水重懸,取一定量藻細(xì)胞懸液置于反應(yīng)器中,控制一定放電電壓,在氬氣氛圍下進(jìn)行處理(氬氣流速為0.5 L/min)到特定時(shí)間后收集樣品進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定。
1.3 分析方法
1.3.1 滅活率的檢測(cè)
流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)藻細(xì)胞滅活率的方法采用兩種熒光染料SYBR green I和PI對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,以區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞[5]。SYBR green I(1∶10 000)可以透過(guò)活細(xì)胞的細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與DNA小溝結(jié)合發(fā)出綠色熒光,最大發(fā)射波長(zhǎng)520 nm,F(xiàn)L1通道檢測(cè)。PI只能透過(guò)死細(xì)胞的細(xì)胞膜,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色發(fā)出紅色熒光,最大發(fā)射波長(zhǎng)617 nm,F(xiàn)L3通道檢測(cè)。SYBR green I工作液的稀釋比例為1∶10 000(V∶V),實(shí)驗(yàn)時(shí)先用超純水將其稀釋成1∶100(V∶V)的儲(chǔ)備液,于-20℃保存。將PI配制成2 mg/mL的儲(chǔ)備液,于4 ℃保存。染色時(shí),向1 mL藻液中加入10 μL 染料SYBR green I和3 μL染料PI儲(chǔ)備液,黑暗條件下室溫孵育15 min,流式細(xì)胞儀(BD FACS,USA)檢測(cè),每次檢測(cè)收集20 000個(gè)藻細(xì)胞。銅綠微囊藻滅活率的計(jì)算公式為:
滅活率(%)=FL3通道細(xì)胞數(shù)/(FL3通道細(xì)胞數(shù)+FL1通道細(xì)胞數(shù))×100%
1.3.2 三維熒光光譜(EEM) 測(cè)定
EEM測(cè)定使用瓦里安熒光分光光度計(jì)(Varian Cary Eclipse, USA),石英熒光比色皿的光徑為1 cm,PMT的電壓設(shè)置在700 V,激發(fā)光和發(fā)射光的狹縫寬度都是10 nm,掃描光譜時(shí)進(jìn)行儀器自動(dòng)校正,掃描速度9600 nm/min,波長(zhǎng)的掃描范圍為激發(fā)波長(zhǎng):200~710 nm,發(fā)射波長(zhǎng):210~800 nm。將一定量DBD處理前后的銅綠微囊藻懸液加入到石英比色皿中進(jìn)行EEM測(cè)定,導(dǎo)出數(shù)據(jù)對(duì)其進(jìn)行分析處理。
1.3.3 微囊藻毒素MC-LR含量測(cè)定
DBD處理前后微囊藻細(xì)胞懸液中微囊藻毒素MC-LR含量測(cè)定使用高效液相色譜法。將DBD處理前后的藻細(xì)胞離心取上清液,過(guò)0.45 μm的微孔濾,用高壓液相色譜儀(HPLC,Thermo-Finnegan,USA)進(jìn)行微囊藻毒素MC-LR含量的測(cè)定。色譜法條件如下:色譜柱為反相C18柱; 流動(dòng)相為28%乙腈,72% 磷酸鹽緩沖液; 流量:1 mL/min;柱溫:37℃;檢測(cè)波長(zhǎng):238 nm。以不同濃度微囊藻毒素MC-LR標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中MC-LR含量。
2.1 DBD對(duì)銅綠微囊藻的滅活效應(yīng)
DBD對(duì)銅綠微囊藻細(xì)胞的滅活率隨放電時(shí)間的變化如圖2所示,隨著放電時(shí)間的延長(zhǎng),藻細(xì)胞的滅活率逐漸增加。氬氣條件下,放電電壓為16 kV時(shí),放電處理8 min時(shí),藻細(xì)胞的滅活率超過(guò)80%(圖2-a)??刂品烹姇r(shí)間2 min不變,改變放電電壓的大小,藻細(xì)胞滅活率隨放電電壓的增加持續(xù)增加。當(dāng)放電電壓為20 kV時(shí),藻細(xì)胞在2 min內(nèi)幾乎全部被殺滅(圖2-b)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示可以通過(guò)改變放電電壓和時(shí)間,優(yōu)化DBD對(duì)銅綠微囊藻細(xì)胞的滅活效應(yīng)。
圖 2 放電等離子體對(duì)銅綠微囊藻的滅活效應(yīng)
a:放電時(shí)間,電壓為16 kV;b:放電電壓,放電時(shí)間為2 min。均為氬氣氛圍
2.2 EEM 檢測(cè)分析DBD處理藻細(xì)胞過(guò)程中內(nèi)含物釋放及降解規(guī)律
銅綠微囊藻細(xì)胞內(nèi)的一些蛋白質(zhì)、色素分子和代謝產(chǎn)物具有熒光特性,EEM具有同時(shí)檢測(cè)多種成分的優(yōu)點(diǎn),可以用來(lái)深入研究DBD處理前后藻細(xì)胞內(nèi)含物的變化規(guī)律。正常銅綠微囊藻(未處理的對(duì)照組)的EEM圖譜如圖3所示,為便于分析統(tǒng)計(jì),將EEM圖譜分成A~G 7個(gè)區(qū)域,常見(jiàn)的分區(qū)方法和典型代表物質(zhì)見(jiàn)表1[4]。A區(qū)域(λex/λem=230/330 nm)為類蛋白峰,如芳香族氨基酸、類酪氨酸、類色氨酸、多肽等類物質(zhì);B區(qū)域(λex/λem=280/330 nm)覆蓋的范圍包括可溶性微生物代謝產(chǎn)物、酚類物質(zhì)、類芳香族蛋白等[11];D區(qū)域(λex/λem=630/660 nm)包括藻藍(lán)蛋白(λex/λem=615/650 nm)和葉綠素類物質(zhì)(λex/λem=680/685 nm)[12];C區(qū)域(λex/λem=350/450 nm)為類腐殖酸類物質(zhì)的熒光峰;E區(qū)域 (λex/λem=360/660 nm)的熒光峰包含藻藍(lán)蛋白及其它光合色素的降解產(chǎn)物[4]。DBD處理銅綠微囊藻細(xì)胞不同時(shí)間后檢測(cè)得到的三維熒光光譜(EEM)如圖4所示,隨著DBD處理藻細(xì)胞時(shí)間的延長(zhǎng),D區(qū)域的熒光強(qiáng)度逐漸增加,到處理4 min時(shí)增加到最大值,說(shuō)明DBD的氧化作用破壞藻細(xì)胞膜,使藻細(xì)胞內(nèi)藻藍(lán)蛋白和葉綠素等物質(zhì)釋放到細(xì)胞外,并且當(dāng)處理時(shí)間達(dá)到4 min時(shí),釋放量達(dá)到最大值,在隨后的處理時(shí)間內(nèi)(20 min),這些物質(zhì)逐漸被氧化降解去除。C、E區(qū)域的熒光強(qiáng)度隨著處理時(shí)間延長(zhǎng)先逐漸增強(qiáng)后減弱直至消失,說(shuō)明DBD作用致使釋放出的藻藍(lán)蛋白或葉綠素類物質(zhì)逐漸降解,并生成降解產(chǎn)物以及類腐殖酸類物質(zhì),隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng),釋放的內(nèi)含物、降解產(chǎn)物及釋放其他可溶性有機(jī)物均被逐漸完全氧化降解。
為定量分析各個(gè)區(qū)域所代表的物質(zhì)在不同處理時(shí)間點(diǎn)的變化,采用區(qū)域熒光體積積分法(FRI)對(duì)各個(gè)區(qū)域進(jìn)行積分統(tǒng)計(jì)。FRI的計(jì)算公式為:
式中?i為EEM原始體積積分值,Δλex為激發(fā)波長(zhǎng)間隔(取10 nm);Δλem為發(fā)射波長(zhǎng)間隔(取10 nm);I(λex,λem)為每個(gè)點(diǎn)的熒光強(qiáng)度。圖5顯示DBD處理銅綠微囊藻細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)各個(gè)區(qū)域熒光體積積分?jǐn)?shù)值變化情況。從圖中可以看出,處理1、2和4 min后,各組分熒光體積積分總和顯著高于對(duì)照組,說(shuō)明DBD作用破壞藻細(xì)胞膜,使細(xì)胞內(nèi)各類色素類熒光物質(zhì)釋放到細(xì)胞外,增加熒光強(qiáng)度。具體到各個(gè)組分,以D區(qū)域代表的葉綠素a及光合色素類化合物和E區(qū)域代表的光合色素降解產(chǎn)物等物質(zhì)的FRI值增加的最為顯著。隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng),各個(gè)區(qū)域的FRI值逐漸減小直至由瑞利散射峰引起本底FRI值,說(shuō)明釋放到細(xì)胞外的內(nèi)含物被進(jìn)一步氧化降解失去熒光。FRI數(shù)值的變化過(guò)程反應(yīng)DBD作用于銅綠微囊藻細(xì)胞,藻細(xì)胞先發(fā)生細(xì)胞膜受損,細(xì)胞內(nèi)含物釋放到細(xì)胞外,釋放的內(nèi)含物被DBD進(jìn)一步氧化降解的動(dòng)態(tài)過(guò)程。
圖 3 銅綠微囊藻的三維熒光光譜分區(qū)
激發(fā)波長(zhǎng)為200~710 nm,發(fā)射波長(zhǎng)為210~800 nm;狹縫為10 nm;分區(qū)中大寫字母代表的物質(zhì)種類見(jiàn)表1
圖 4 不同放電時(shí)間處理后銅綠微囊藻液三維熒光光譜的變化
Fig 4 EEM fluorescence spectra ofM.aeruginosasuspension treated by DBD for different treatment time
2.3 HPLC分析微囊藻毒素MC-LR含量變化
銅綠微囊藻細(xì)胞中含有微囊藻毒素,當(dāng)細(xì)胞損傷或破裂時(shí),微囊藻毒素會(huì)釋放到水體中,MC-LR是微囊藻毒素多個(gè)異構(gòu)體中毒性最強(qiáng)的一種[13]。DBD處理會(huì)導(dǎo)致銅綠微囊藻細(xì)胞細(xì)胞膜受損,使微囊藻毒素MC-LR釋放到細(xì)胞外,水中MC-LR含量隨處理時(shí)間的變化情況如圖6所示。DBD處理4 min后,MC-LR的含量高達(dá)580 μg/L,達(dá)到最大值,之后隨著放電時(shí)間的延長(zhǎng),MC-LR被持續(xù)氧化降解,到處理20 min時(shí),幾乎檢測(cè)不出微囊藻毒素MC-LR。培養(yǎng)過(guò)程中銅綠微囊藻也會(huì)向胞外釋放微囊藻毒素,培養(yǎng)30 d后的銅綠微囊藻的培養(yǎng)液中MC-LR含量為250 μg/L,而飲用水標(biāo)準(zhǔn)中MC-LR的最高含量為1 μg /L,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)飲用水標(biāo)準(zhǔn)。因此,DBD技術(shù)作為高級(jí)氧化技術(shù)的一種,不僅可以有效殺滅藍(lán)藻細(xì)胞,還可以降解水體中的藍(lán)藻毒素,包括DBD殺滅藍(lán)藻細(xì)胞過(guò)程中向胞外釋放的藍(lán)藻毒素,從而保證水體不受該技術(shù)處理過(guò)程的二次污染,表明該技術(shù)具有環(huán)境兼容性高的優(yōu)點(diǎn)。
表1 FRI分區(qū)方法及各個(gè)區(qū)域代表的典型物質(zhì)
低溫等離子體能高效殺滅銅綠微囊藻并降解藻毒素。本研究我們采用DBD處理方式,研究了放電時(shí)間和放電電壓對(duì)滅活效率的影響。實(shí)驗(yàn)表明,在氬氣氛條件下,當(dāng)放電電壓為16 kV,處理8 min后,藻細(xì)胞的滅活率可高達(dá)80%以上。放電過(guò)程中伴隨藻細(xì)胞膜受損,向水中釋放細(xì)胞內(nèi)含物包括微囊藻毒素MC-LR。通過(guò)EEM光譜及分析,證明了在DBD處理過(guò)程中,藻細(xì)胞先向水體釋放藻藍(lán)蛋白、葉綠素及光合色素類化合物、類腐殖酸類物質(zhì)等可溶性有機(jī)物,隨著放電時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞熒光類內(nèi)含物全部釋放,并且釋放的內(nèi)含物逐漸被氧化降解,由此揭示了DBD處理銅綠微囊藻過(guò)程中內(nèi)含物釋放和降解規(guī)律。總之,這項(xiàng)研究顯示了放電等離子體技術(shù)作為一種高效的殺滅有害藍(lán)藻的高級(jí)氧化技術(shù),在殺滅藻細(xì)胞的同時(shí)還能降解去除釋放到水體中的藍(lán)藻毒素,具有很好的環(huán)境兼容性,這為等離子體滅藻技術(shù)的應(yīng)用開(kāi)發(fā)和安全評(píng)價(jià)奠定了基礎(chǔ)。
圖5 熒光體積積分法(FRI)統(tǒng)計(jì)DBD處理前后藻細(xì)胞懸液各區(qū)域熒光強(qiáng)度變化(字母A~G代表的物質(zhì)種類見(jiàn)表1)
圖6 介質(zhì)阻擋放電處理藻液不同時(shí)間后藻毒素含量的變化
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EEM fluorescence study of the degradation of Microcystis aeruginosa contents caused by dielectric barrier discharge plasma treatment
LI La-mei1, ZHANG Hong1, HUANG Qing1,2
(1. Institute of Technical Biology and Agriculture Engineering, Hefei Institutes of Physical Science, Chinese Academy of Sciences, Hefei 230031; 2. University of Science and Technology of China, Hefei 230026, China)
Harmful cyanobacterial blooms are now considered to be a common global environmental problem, and the frequency and intensity of cyanobacterial harmful algal blooms are so increasing that they have posed an imminent threat to drinking water sources. In this work, we reported our recent progress in dealing with the toxic and harmfulMicrocysticaeruginosausing dielectric barrier discharge (DBD) non-thermal plasma. We investigated the processes of both algal cellular damage and microcystin-LR (MC-LR) degradation caused by DBD treatment. The excitation-emission matrix (EEM) fluorescence spectroscopy combined with fluorescence regional integration technique (FRI) was employed to monitor the dynamic changes of algal cell inclusion substances including phycocyanin, chlorophyll and metabolites during the treatment, which provided the quantitative evaluation as also checked and confirmed by high performance liquid chromatography (HPLC). The results showed that algal cellular inclusions were first released into the extracellular environment, and then degraded gradually during the DBD treatment; in particular, the cyanobacterial toxin MC-LR released from algae cells during DBD treatment could eventually be completely degraded and removed. This work therefore not only demonstrates that nonthermal DBD plasma can effectively inactivate algae cells with simultaneous removal of microcystins, but also suggests that EEMs as a rapid real-time analysis method can be very useful for revealing the plasma-induced processes of algae cell damage and microcystin degradation as well as their underlying mechanisms.
dielectric barrier discharge (DBD); nonthermal plasma; excitation-emission matrix fluorescence spectroscopy;microcysticaeruginosa; microcystin; oxidation and degradation
2016-10-07;
2017-02-09
國(guó)家自然科學(xué)基金(No.11635013,No.11475217,No.21207137)
李臘梅,碩士,研究方向?yàn)樯镂锢?/p>
黃 青,博士,教授,研究方向?yàn)樯镂锢?,E-mail: huangq@ipp.ac.cn
Q942
A
2095-1736(2017)02-0021-05
doi∶10.3969/j.issn.2095-1736.2017.02.021