進(jìn)展期胃癌中神經(jīng)旁浸潤與HER-2表達(dá)及其相關(guān)性分析

李 暉，姬榮偉

進(jìn)展期胃癌中神經(jīng)旁浸潤與HER-2表達(dá)及其相關(guān)性分析

李 暉1，姬榮偉2

目的 檢測進(jìn)展期胃癌中神經(jīng)旁浸潤(perineural invasion, PNI)的發(fā)生及人表皮生長因子受體2(human epidermalgrowth factor receptor-2, HER-2)的表達(dá)，分析兩者對進(jìn)展期胃癌預(yù)后的影響以及兩者之間的相關(guān)性。方法 采用HE染色對100例進(jìn)展期胃癌組織進(jìn)行PNI陽性篩選并運(yùn)用免疫組化法檢測HER-2的表達(dá)，分析PNI與HER-2表達(dá)和進(jìn)展期胃癌臨床病理特征的關(guān)系及兩者之間的相關(guān)性。結(jié)果 PNI陽性者共42例，陽性率為42%，PNI的發(fā)生與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、癌栓、TNM分期及HER-2表達(dá)等因素具有一定的相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。單因素生存分析顯示，進(jìn)展期胃癌的總生存率與T分期、癌栓、N分期、TNM分期、PNI和HER-2有關(guān)(P均<0.05)；PNI陽性患者生存期與PNI陰性患者相比明顯降低，PNI陰性患者為45.3個月，PNI陽性患者為15.4個月(P<0.05)。HER-2陽性患者平均生存期(22.7個月)與HER-2陰性患者(43.2個月)相比亦明顯降低(P<0.05)。多因素生存分析顯示PNI和HER-2表達(dá)均對患者總生存率具有影響，是影響預(yù)后的獨(dú)立危險因素(P均<0.05)。結(jié)論 進(jìn)展期胃癌術(shù)后檢測PNI和HER-2對患者預(yù)后具有一定的提示作用，HER-2原癌基因蛋白可能與PNI的發(fā)生具有一定關(guān)聯(lián)性或發(fā)揮一定的協(xié)同作用。

胃腫瘤；進(jìn)展期胃癌；神經(jīng)旁浸潤；HER-2；相關(guān)性；預(yù)后

胃癌在我國各種惡性腫瘤排行中趨于首位。惡性腫瘤分為不同的類型，按其病情發(fā)展的程度可分為早期胃癌和進(jìn)展期胃癌[1]。由于胃癌早期癥狀不明顯，多數(shù)患者就診時已發(fā)展到中晚期，即進(jìn)展期。進(jìn)展期胃癌是指癌組織浸潤已超過黏膜下層而達(dá)到胃壁肌層、漿膜層以及漿膜外，此時病灶直徑多>2 cm，臨床預(yù)后效果較差，總體5年生存率≤20%，因此探索新的病理學(xué)指標(biāo)對進(jìn)展期胃癌預(yù)后進(jìn)行判斷具有十分重要的意義。近年來的研究表明，人表皮生長因子受體2(HER-2)作為表皮生長因子受體家族中的一員，在許多實(shí)體腫瘤中存在高表達(dá)或異常表達(dá)，例如腎癌、乳腺癌、肺癌、膠質(zhì)細(xì)胞等，這些異常表達(dá)往往影響著惡性腫瘤的演進(jìn)過程[2]。有關(guān)研究人員指出對胃癌HER-2狀態(tài)進(jìn)行病理學(xué)診斷，有助于判斷胃癌患者是否需要抗HER-2治療，對腫瘤預(yù)后具有提示作用，可提高HER-2陽性胃癌患者的生存率。另一方面，神經(jīng)旁浸潤(perineuralinvasion, PNI)已被證實(shí)對某些癌癥的預(yù)后有重要影響，如PNI可促進(jìn)膽道癌和胰腺癌的局部擴(kuò)散。近幾年研究學(xué)者[3]逐漸開始關(guān)注PNI對于胃癌預(yù)后的影響，并得出了一些初步結(jié)論，而關(guān)于進(jìn)展期胃癌PNI與HER-2表達(dá)對于預(yù)后的影響及兩者相關(guān)性的研究還相對較少。本文采用免疫組化法檢測HER-2在伴有PNI的胃癌組織中的表達(dá)，探討PNI與HER-2之間是否存在相關(guān)性，為進(jìn)行期胃癌的診斷、治療和預(yù)后提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集鄭州市三甲醫(yī)院100例胃癌樣本，每例樣本均有完整隨訪資料，且所有病例均為進(jìn)展期胃癌。其中男性56例，女性44例，年齡39～76歲，平均年齡54歲。樣本包括胃體癌49例，賁門胃底癌21例，胃底癌30例。依據(jù)1998年《惡性腫瘤TNM分類法》對100例進(jìn)展期胃癌樣本進(jìn)行TNM分期：I期11例，Ⅱ期29例，Ⅲ期55例，Ⅳ期5例。按腫瘤分化程度進(jìn)行分類：高分化21例，中分化47例，低分化32例。

1.2 PNI篩選方法 用10%中性福爾馬林固定100例樣本的病理組織24～48 h，進(jìn)行石蠟包埋，連續(xù)4 μm厚切片，隨后進(jìn)行HE染色。PNI呈陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)為在光鏡下檢查發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞侵入腫瘤組織內(nèi)神經(jīng)束膜或神經(jīng)束。

1.3 免疫組化及HER-2判讀標(biāo)準(zhǔn) 運(yùn)用免疫組化法檢測胃癌組織中HER-2表達(dá)，將組織進(jìn)行常規(guī)脫蠟、水洗后高溫高壓修復(fù)，采用MaxVision兩步法染色，滴加新鮮配置的DAB溶液顯色1～2 min，蘇木精襯染、脫水、透明、中性樹膠封固。PBS代替一抗作為陰性對照。

進(jìn)行期胃癌組織中HER-2蛋白的表達(dá)依據(jù)文獻(xiàn)進(jìn)行如下計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)判定。腫瘤細(xì)胞中無反應(yīng)或者細(xì)胞膜陽性細(xì)胞比例<10%記為0；部分細(xì)胞膜陽性細(xì)胞比例≥10%且反應(yīng)強(qiáng)度為弱反應(yīng)記為1+；腫瘤細(xì)胞中完全或者部分細(xì)胞膜陽性細(xì)胞比例≥10%且反應(yīng)強(qiáng)度為弱至中等反應(yīng)記為2+；腫瘤細(xì)胞中完全或者部分細(xì)胞膜陽性細(xì)胞比例≥10%且反應(yīng)強(qiáng)度為強(qiáng)反應(yīng)記為3+。本組實(shí)驗(yàn)將0或1+定義為HER-2陰性，3+或2+定義為HER-2陽性。

1.4 隨訪 采用電話詢問方式進(jìn)行隨訪，隨訪時間總長為60個月，最短為3個月?；颊哳A(yù)后評價指標(biāo)為總生存率，其定義是確診為進(jìn)行期胃癌至最后一次隨訪時間或由腫瘤原因引起死亡時間的患者數(shù)占總患者數(shù)的百分比。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件和Matlab軟件作為所得數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析手段。將性別、年齡、分化程度、浸潤深度、癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及HER-2表達(dá)信息納入統(tǒng)計(jì)模型。選擇χ2檢驗(yàn)對分類數(shù)據(jù)進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用Kaplan-Meier法分析生存率并繪制生存曲線，并用Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存曲線比較。最后采用Cox比例風(fēng)險回歸模型分析進(jìn)展期胃癌預(yù)后的獨(dú)立危險因素。

2 結(jié)果

2.1 PNI與進(jìn)展期胃癌臨床病理特征的關(guān)系 本組100例進(jìn)展期胃癌患者中PNI陽性者共42例，占總患者人數(shù)的42%(圖1)。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)患者性別、年齡以及分化程度與進(jìn)展期胃癌中PNI的發(fā)生無明顯相關(guān)性；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、癌栓、TNM分期及HER-2表達(dá)與PNI的發(fā)生具有明顯相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表1)。

2.2 PNI與HER-2表達(dá)的相關(guān)性 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PNI陽性者中HER-2表達(dá)高于PNI陰性者(圖2)；經(jīng)Matlab軟件中的ANN神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型相關(guān)性檢驗(yàn)顯示，PNI和HER-2的表達(dá)呈正相關(guān)(圖3)。

圖1 A.進(jìn)展期胃癌中PNI呈陽性，腫瘤細(xì)胞侵及神經(jīng)束；B.進(jìn)展期胃癌中PNI呈陽性，腫瘤細(xì)胞侵及神經(jīng)束膜

表1 PNI與進(jìn)展期胃癌臨床病例指標(biāo)的關(guān)系

2.3 PNI、HER-2與進(jìn)展期胃癌患者的預(yù)后分析 對100例進(jìn)展期胃癌患者數(shù)據(jù)進(jìn)行生存分析，分別以PNI和HER-2表達(dá)繪制生存曲線(圖4、5)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：PNI陰性者平均生存期為45.3個月，PNI陽性者為15.4個月(χ2=18.645，P<0.01)，平均生存期明顯低于PNI陰性患者；HER-2陰性者的平均生存期為43.2個月，HER-2陽性者為22.7個月(χ2=14.193，P<0.01)，平均生存期明顯低于HER-2陰性患者。單因素生存分析顯示PNI和HER-2表達(dá)陽性患者平均生存率均明顯低于陰性患者。將PNI和HER-2表達(dá)納入多因素Cox回歸分析模型，分析結(jié)果顯示PNI和HER-2表達(dá)與其它因素(TNM分期、癌栓等)同樣可作為獨(dú)立危險因素對患者總生存率造成重要影響(表2)。

圖2 A.進(jìn)展期胃癌中HER-2呈陽性；B.進(jìn)展期胃癌中HER-2呈陰性，MaxVision兩步法

圖3 進(jìn)展期胃癌PNI與HER-2表達(dá)擬合曲線

圖4 PNI陽性與PNI陰性進(jìn)展期胃癌患者生存曲線的比較

圖5 HER-2陽性與HER-2陰性進(jìn)展期胃癌患者生存曲線的比較

表2 進(jìn)展期胃癌患者總生存率預(yù)后影響因素分析

HR：hazard ratio(風(fēng)險比)

3 討論

隨著周圍神經(jīng)浸潤的研究不斷深入，人們對于PNI已有一定的了解，普遍認(rèn)同胃癌中PNI陽性率隨腫瘤的進(jìn)展而增加，但對PNI的陽性率存在一定的差異，這可能與不同研究對于PNI的定義不同有關(guān)。目前關(guān)于PNI的定義有兩種表述，一種表述認(rèn)為腫瘤細(xì)胞侵入神經(jīng)束膜或神經(jīng)束即可視為腫瘤PNI；另一種表述認(rèn)為腫瘤細(xì)胞侵入神經(jīng)鞘或位于神經(jīng)周圍且使33%以上的神經(jīng)周徑受累方可認(rèn)定為PNI[4]。本組實(shí)驗(yàn)采用PNI的廣泛定義得出PNI陽性率為42%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出結(jié)論顯示PNI與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、癌栓、TNM分期及HER-2表達(dá)有顯著相關(guān)性，而與患者性別、年齡以及分化程度無明顯相關(guān)性。PNI指標(biāo)在提示癌癥預(yù)后信息問題上尚未得到統(tǒng)一認(rèn)識，一些研究認(rèn)為[5]，雖然胃癌患者手術(shù)后存活狀態(tài)與PNI有一定關(guān)系，但PNI是胃癌獨(dú)立預(yù)后因素這一結(jié)論不能由此推出。而越來越多的研究傾向于進(jìn)展期胃癌的預(yù)后判斷標(biāo)準(zhǔn)之一即為胃癌患者PNI是否呈陽性[6-9]。本研究為PNI可作為進(jìn)展期胃癌患者獨(dú)立預(yù)后因素進(jìn)一步提供了依據(jù)。

HER-2基因擴(kuò)增的產(chǎn)物可影響腫瘤細(xì)胞的生物活性，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、黏附、分化以及浸潤等，為腫瘤重要的生物標(biāo)志物之一。在不同的研究報道[10-12]中進(jìn)展期胃癌HER-2表達(dá)的陽性率不盡相同，主要原因可能是與胃癌腫瘤異質(zhì)性較高以及不同研究的患者種族差異、樣本量差異、檢測方法差異和評分標(biāo)準(zhǔn)差異相關(guān)。HER-2促進(jìn)腫瘤細(xì)胞不斷分裂增殖的原因是HER-2本身的酪氨酸激酶活性結(jié)合表皮生長因子(EGF)后啟動了其基因擴(kuò)增程序。相關(guān)研究表明:胃癌、乳腺癌、膀胱癌和頭頸部鱗癌的HER-2表達(dá)均有所增高。HER-2陽性胃癌患者癌細(xì)胞增長較快，侵襲性很強(qiáng)，這類患者病情也相對更容易惡化[13]。我國對HER-2檢測的認(rèn)知度普遍較低，HER-2檢測率尚不足20%，導(dǎo)致不少HER-2陽性胃癌患者錯失治療良機(jī)。近年來相關(guān)研究顯示，HER-2表達(dá)可能與胃癌的一些重要臨床病理特征有關(guān)。Kim等[14]的研究表明有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度高者HER-2陽性率高，該研究通過對1 414例胃癌組織中HER-2表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)HER-2陽性胃癌患者的預(yù)后較陰性者的預(yù)后差(P=0.014)，得出了HER-2與胃癌預(yù)后可能相關(guān)的結(jié)論。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣顯示，HER-2陽性患者預(yù)后較HER-2陰性患者預(yù)后差(χ2=14.193，P<0.01)。本組實(shí)驗(yàn)通過將PNI和HER-2納入多因素生存分析模型進(jìn)行Cox回歸分析，結(jié)果顯示，PNI和HER-2表達(dá)同癌栓和TNM分期等因素一樣，也是影響患者總生存率的獨(dú)立危險因素，且PNI與HER-2的表達(dá)呈正相關(guān)，由此可以推測HER-2原癌基因蛋白可能通過某種方式協(xié)同促進(jìn)腫瘤PNI的發(fā)生，后續(xù)可從分子水平上證實(shí)該推論并對其發(fā)生機(jī)制進(jìn)行更加深入的研究。

綜上所述，在多種因素共同作用下，腫瘤PNI的陽性率隨著進(jìn)展期胃癌病情的發(fā)展而升高。統(tǒng)計(jì)分析表明PNI陽性率和HER-2蛋白的表達(dá)可作為影響進(jìn)展期胃癌患者生存率的獨(dú)立危險因素，且兩者表達(dá)呈正相關(guān)。因此，PNI可作為判斷進(jìn)展期胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)之一，HER-2蛋白的表達(dá)則可能是其作用機(jī)制的一部分。早期檢測HER-2蛋白表達(dá)并在必要時進(jìn)行重復(fù)活檢有可能對即將發(fā)生的PNI起一定的預(yù)判作用，盡早發(fā)現(xiàn)、選擇最正確、合適的治療方案可能延長病患的生存時間，提高進(jìn)展期胃癌患者的生存率。該推測需要進(jìn)一步分析證實(shí)，為以后更加深入的研究提供理論依據(jù)。

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Analysis of perineural invasion with HER-2 expression and its correlation in patients with advanced gastric cancer

LI Hui1, JI Rong-wei2

(1DepartmentofBasicMedicine,SiasInternationalUniversity,ZhengzhouUniversity,Xinzheng451150,China;2DepartmentofPathology,Xi’anXDGroupHospital,Xi’an710077,China)

Purpose To investigate the presence of perineural invasion(PNI) and the expression of human epidermal growth factor receptor 2 (HER-2) in patients with advanced gastric cancer.To discuss the correlation between PNI and the expression of HER-2 and their prognostic significance. Methods Paraffin sections of surgical specimens from 100 patients who underwent gastric resection were selected，and then PNI were detected by HE staining and the expression of HER-2 were detected by immunohistochemical (IHC). The correlation of perineural invasion with the clinicopathological features and HER-2 expression were performed. Results PNI was positive in 42 cases of 100 patients (PNI positive rate was 42%), the occurrence of PNI has significantly related with lymph node metastases, infiltrating depth,tumor emboli, TNM stage and expression of HER-2. The difference was statistically significant (P<0.05). Univariate analysis showed that total survival rate of advanced gastric cancer was associated with T stage, tumor emboli, N stage, TNM stage, PNI and HER-2 expression (P<0.05). The overall survival of the PNI-negative patients was 45.3 months on average,much better than the PNI positive patients who was 15.4 months in average (P<0.05). The overall survival of the HER-2-negative patients was 43.2 months on average,much better than the HER-2-positive patients who was 22.7 months in average (P<0.05). By muhivariable Cox proportional hazards model of overall survival, the positivity of PNI and HER-2 appeared to be new independent prognostic factors(P<0.05). Conclusion The detection of PNI and HER-2 expression maybe helpful for the prognosis of patients with advanced gastric cancer. In addition, HER-2 may be responsible for the presence of perineural invasion.

gastric neoplasms; advanced gastric cancer; perineural invasion; HER-2; correlation; prognosis

時間：2017-2-27 10:14

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170227.1014.032.html

1鄭州大學(xué)西亞斯國際學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教研室，新鄭 4511502西電集團(tuán)醫(yī)院病理科，西安 710077

李 暉，女，碩士，講師。E-mail: liabcd1234567@163.com

R 735.2

A

1001-7399(2017)02-0178-05

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.02.014

接受日期：2016-12-05