白花檵木組織培養(yǎng)技術(shù)研究

萬濤

[摘 要] 白花檵木的作用較多，在其培養(yǎng)中，組織培養(yǎng)技術(shù)是重要的培養(yǎng)手段，本文主要探究白花檵木組織培養(yǎng)技術(shù)，將植物的莖尖、腋芽置于培養(yǎng)基中，探究組織培養(yǎng)技術(shù)的成活率，通過分析，可以為白花檵木的組織培養(yǎng)提供一定的借鑒。

[關(guān)鍵詞] 白花檵木 組織培養(yǎng)技術(shù)

[中圖分類號] S792.99 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650（2017）02-0178-01

在對白花檵木的培養(yǎng)中，扦插、嫁接以及壓條等技術(shù)雖然可以培養(yǎng)白花檵木，但是繁殖率較低，因而探究組織培養(yǎng)技術(shù)具有重要的意義。

1 實驗方案培養(yǎng)基

1.1 最優(yōu)啟動培養(yǎng)基設(shè)計

在本次實驗中，探究最優(yōu)的啟動培養(yǎng)基設(shè)計方案，采用改良MS、WPM，生長素采用BA0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L，細胞分裂素采用IBA0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L。附加30g/L蔗糖和0.07%瓊脂，Ph5.6～5.8。在實驗的理念中，選擇4因素3水平正交試驗，L9（34），共9個處理，在每個試管中，均接種一個外植體，每次處理28管，重復3次。

1.2 繼代培養(yǎng)基設(shè)計

在初代培養(yǎng)基設(shè)計完成后，需要設(shè)計繼代培養(yǎng)基，其是植物組織培養(yǎng)的重要階段，關(guān)系著植物的繁殖和生長，在繼代培養(yǎng)過程中，選擇的材料為初代培養(yǎng)的苗，通過調(diào)整激素的含量，來提升芽苗的數(shù)量與質(zhì)量。在實驗中，依然采用L9（34），共9個處理，在每個試管中，均接種一個外植體，但是在處理中，每次僅僅處理10瓶，重復3次。

1.3 生根培養(yǎng)基設(shè)計方案

在經(jīng)過繼代培養(yǎng)之后，需要對外植體的生根培養(yǎng)方案進行設(shè)計，在選擇芽苗的過程中，需要選擇粗壯的芽苗，將基本培養(yǎng)基設(shè)計為1/2改良MS，選擇IBA以及蔗糖的最佳配比，在實驗過程中，同樣采用4因素3水平正交實驗設(shè)計，在每個試管中，均接種一個外植體，但是在處理中，每次僅僅處理15瓶，在40d后觀察小苗的生根情況。

1.4 移栽方案設(shè)計

外植體生根后，經(jīng)過一定條件的馴化，植物可以適應(yīng)自然環(huán)境的發(fā)展，可以提升移栽的成果率。在實驗過程中，當外植體成長到5cm左右，需要將無菌膜打開，逐步降低植物的環(huán)境溫度，并且增強光照，在3d后，吸凈并且移栽到土壤中，經(jīng)過噴霧的保濕處理，在30d后計算其移栽的成活率。

2 實驗材料與方法

2.1 實驗材料

從成熟的白花檵木母株上提取莖尖、腋芽以及成熟葉片作為研究的外植體。

2.2 實驗方法

2.2.1 初代培養(yǎng)

將采集的枝條經(jīng)過水流的沖洗，去除表面的污染物，切取植物的莖尖、腋芽以及成熟葉片，運用洗潔精浸泡5min，之后采用清水沖洗1h，采用無菌濾紙吸凈水分，用70%酒精在無菌室內(nèi)浸泡5s，沖洗干凈后，再用0.1%汞溶液浸泡5min，用無菌水沖洗5次，吸凈水分，在工作臺去掉包片，切成6*6mm的樣本，置于培養(yǎng)基中，葉片分為正面和反面放置。

2.2.2 樣本誘導與分化

在植物的誘導中，觀察植物的污染率、枯死率以及存活率，在誘導40d后，可以直接誘導莖尖以及腋芽的一部分，部分樣本底部切口向外膨脹，長出愈傷組織，上部生長成為芽，葉片正面放置的植物均枯死，未誘導出叢生芽，而葉片反面放置的植物中，1個生長出叢生芽，其余植物均枯死。

2.2.3 繼代培養(yǎng)

在外植體的培養(yǎng)中，在培養(yǎng)基培養(yǎng)40d后，叢生芽生長到2cm，切割后置于增殖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)20d，獲取大量的叢生芽。

2.2.4 生根培養(yǎng)

切取叢生芽，選擇高度為3-4cm的苗，置入生根培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

2.2.5 培養(yǎng)條件

采用MS基本培養(yǎng)基，附加植物生長調(diào)節(jié)劑。采用改良MS、WPM，生長素采用BA0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L，細胞分裂素采用IBA0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L。培養(yǎng)的PH值為5.8，蔗糖濃度為3%，瓊脂的濃度為0.6%，培養(yǎng)的溫度為25℃，光照時間為12h，光照度保證在2000lx。

3 實驗結(jié)果與分析

3.1 滅菌時間的影響

在白花檵木的培養(yǎng)中，不同的滅菌時間對白花檵木的誘導具有較大的影響，根據(jù)實驗結(jié)果顯示，在誘導的過程中，隨著霉菌時間的不斷延長，植物的污染數(shù)量會呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢，在9min以后，會趨于0；在枯死數(shù)量方面，隨著滅菌時間的不斷延長，枯死數(shù)量會呈現(xiàn)不斷增加的趨勢，并且在6min左右為最佳。在誘導率方面，隨著時間的延長，誘導率呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢，并且在6min達到最佳的誘導率?？傊?，由實驗可以看出，在白花檵木的培養(yǎng)中，滅菌時間設(shè)置在6min最為合理。

3.2 接種方式對分化的影響

在外植體的培養(yǎng)過程中，葉片的接種方式對誘導具有較大的影響，根據(jù)本次的實驗分析發(fā)現(xiàn)，在葉片正面放置時，接種的存活率為0，而反面放置時，接種的存活率為6.7%。可見，在植物的培養(yǎng)中，外植體的選擇應(yīng)該盡量選擇莖尖以及腋芽，在必須選擇葉片的情況下，應(yīng)該盡量選擇反面放置，這樣可以提升植物的誘導分化率。

3.3 叢生芽的分化與激素濃度關(guān)系

在本次實驗中，將叢生芽置于不同濃度的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)如果激素的濃度較低，則會限制叢生芽的繁殖速度，如果激素的濃度過高，則會導致叢生芽底部產(chǎn)生愈傷組織，影響上部的生長。

3.4 生根移植

在植物的培養(yǎng)中，切取3-4cm的苗進行生根移植，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，65%的小苗可以生長出較為完整的植株，經(jīng)過30d的培育后，可以將生根苗進行繼續(xù)移植。

本文主要探究白花檵木的組織培養(yǎng)技術(shù)，將植物的莖尖以及腋芽置于激素不同的MS中，發(fā)現(xiàn)在最佳培養(yǎng)基下，其誘導率可以達到66.7%，并且其滅活時間應(yīng)該設(shè)置在6min左右。總之，只有采用科學的組織培養(yǎng)技術(shù)，才可以提升白花檵木的成活率。

參考文獻

[1]張亮亮，柳新紅，林新春，等.白花樹組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J].浙江林業(yè)科技，2013，（03）：16-19.