存活素在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤中表達(dá)及臨床意義

梁錦輝 李莉 羅海林 黃河浪 黃梅 張翔 高山 毛謂東

存活素在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤中表達(dá)及臨床意義

梁錦輝1李莉1羅海林1黃河浪1黃梅1張翔1高山2毛謂東3

目的 探討細(xì)胞凋亡抑制蛋白-存活素(Survivin)在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤的表達(dá)及臨床意義。方法采用免疫組化Envision二步法檢測30例鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤，10例鼻腔鱗癌及10例正常下鼻甲黏膜標(biāo)本中Survivin的表達(dá)。結(jié)果鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤和鼻腔鱗癌組織中survivin的表達(dá)分別為73.33%、80.00%，均顯著高于正常下鼻甲黏膜組織的表達(dá)0%（P＜0.01）。結(jié)論Survivin在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤和鼻腔鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，可能成為鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤和鼻腔鱗癌基因治療的靶點(diǎn)。Survivin的高表達(dá)，預(yù)示SNIP的復(fù)發(fā)。

內(nèi)翻性乳頭狀瘤；存活素；鼻腔；鼻竇；鱗狀細(xì)胞癌

鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤（sinonasal inverted papilloma,SNIP）是常見的鼻腔鼻竇良性腫瘤，發(fā)病率約占鼻腔鼻竇腫瘤的0.5%～7%[1]，其病因及發(fā)病機(jī)制至今不明，容易復(fù)發(fā)，惡變是SNIP的突出特點(diǎn)。近年來，隨著鼻內(nèi)鏡手術(shù)技術(shù)的提高，使得SNIP的治愈率得到了很大的提高，但其復(fù)發(fā)及惡變的原因仍未闡明。其惡變的發(fā)生率從5%～32%不等，一般認(rèn)為6%～13%[2]，且多惡變?yōu)轺[狀細(xì)胞癌。

存活素（survivin）是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族的一員。Survivin在腫瘤組織中廣泛表達(dá),在許多胚胎組織細(xì)胞亦有表達(dá),然而在正常的人體組織中不表達(dá)或低表達(dá)[3]。近年來Survivin越來越受到人們的重視,許多研究表明Survivin是IAP家族中抗凋亡能力最強(qiáng)的蛋白質(zhì),與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后相關(guān)，被認(rèn)為是一些腫瘤的預(yù)后因素，并且能夠作為癌癥治療的一個(gè)靶點(diǎn)[4]。但其與SNIP相關(guān)性的研究鮮見報(bào)道。本研究將探討Survivin在SNIP、鼻腔鱗癌和下鼻甲黏膜組織中的表達(dá)，探討其在SINP發(fā)生和發(fā)展中的作用，希望為SNIP預(yù)后及靶向治療提供參數(shù)。

資料與方法

1 一般資料

選取漢中市中心醫(yī)院2009～2014年有完整臨床病理資料,病理檢查證實(shí)為SNIP的標(biāo)本30例，鼻腔鱗癌10例和正常下鼻甲黏膜組織10例作為對照。SNIP標(biāo)本中男24例，女6例，年齡29～71歲,平均55.8歲。鼻腔鱗癌標(biāo)本中男7例，女3例，年齡43～76歲,平均58.6歲。SNIP組又按是否復(fù)發(fā)分為初發(fā)組15例，復(fù)發(fā)組15例。

2 主要試劑及來源

兔抗人Survivin多克隆抗體從北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司購買。ChemMateTM Envision試劑盒購自基因有限公司（上海）。

3 方法

標(biāo)本經(jīng)常規(guī)甲醛固定,石蠟包埋,常規(guī)切片,厚度約4μm。采用免疫組織化學(xué)Envision二步法,切片常規(guī)脫蠟后置蒸餾水玻璃缸，枸櫞酸溶液中熱修復(fù)抗原，經(jīng)內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑孵育10min。實(shí)驗(yàn)組依次加入一抗（多抗survivin）孵育30min，一抗工作濃度為1∶100。磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。滴加Envision TM孵育30min，DAB顯色后，復(fù)染、脫水、透明和封片，顯微鏡下觀察結(jié)果。

4 結(jié)果判定

光鏡下觀察，Survivin在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核著色，呈棕黃色。結(jié)果判定參照IRS(immunoractive score)半定量法。①染色強(qiáng)度記分:無著色記0分,淡黃色記1分,棕黃色記2分,棕褐色記3分；②陽性范圍記分:在400倍視野下,每例隨機(jī)選不重復(fù)5個(gè)視野,各計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算出陽性細(xì)胞百分率，陽性細(xì)胞率＜5%記0分，5%～25%記1分，26%～50%記2分,51%～75%記3分,75%以上記4分。上述兩項(xiàng)結(jié)果相乘:0分為陰性（-），1～2分為弱陽性（＋），3～6分為中等陽性（＋＋），＞6分為強(qiáng)陽性（＋＋＋）。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0軟件完成,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。不滿足χ2檢驗(yàn)條件的用Fisher確切概率法。以P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

Survivin蛋白主要在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中著色（圖1，2，3）,但也有部分細(xì)胞在細(xì)胞核內(nèi)著色。顏色從淺黃色到深棕色,PBS緩沖液代替一抗的陰性對照不著色。SNIP組表達(dá)率73.33%(22/30)，鼻腔鱗癌組表達(dá)率80.00%（8/10),正常下鼻甲黏膜組織組未見表達(dá)（圖4）。SNIP與正常下鼻甲黏膜中的表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），SNIP與鼻腔鱗癌中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），鼻腔鱗癌與正常下鼻甲黏膜中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝10.208, P＜0.01）（見表1）。Survivin蛋白的表達(dá)在SNIP復(fù)發(fā)組和初發(fā)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

圖1 Survivin表達(dá)于初發(fā)組SNIP的胞漿呈弱陽性。（Envision×400）

圖2 Survivin表達(dá)于復(fù)發(fā)組SNIP的胞漿呈中度陽性。（Envision×400）

圖3 Survivin表達(dá)于鱗癌組的胞漿呈強(qiáng)陽性。（Envision×400）

圖4 Survivin在正常下鼻甲黏膜組織中無表達(dá)。（Envision×100）

表1 Survivin蛋白的表達(dá)情況

表2 Survivin蛋白鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤中的表達(dá)

討論

Survivin是1997年Ambrosini等利用效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體-1的cDNA在人類基因組文庫中篩選分離出,定位于17q25，是IAP家族成員中分子質(zhì)量最小的一個(gè),具有抗凋亡和調(diào)節(jié)有絲分裂的雙重功能[5]。細(xì)胞凋亡又稱之為細(xì)胞程序性死亡,細(xì)胞凋亡與細(xì)胞增殖之間的動(dòng)態(tài)平衡在維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)中起著非常重要的作用,二者失衡可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤生成。Survivin的抗凋亡和促進(jìn)細(xì)胞增殖功能，打破了細(xì)胞增殖與死亡的動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致腫瘤形成和疾病發(fā)生。許多研究表明Survivin是IAP家族中抗凋亡能力最強(qiáng)的蛋白質(zhì)[6]。

Survivin是在細(xì)胞循環(huán)G2/M期表達(dá)的一種分子量為16.5kDa的蛋白質(zhì)，是IAPs成員之一。IAPs首次于桿狀病毒中發(fā)現(xiàn)，它們可以抑制病毒感染所造成的宿主細(xì)胞死亡。Survivin具有桿狀病毒IAP重復(fù)區(qū)序列（Baculoviral IAP repeat，BIR）,是一個(gè)鋅結(jié)合的折疊區(qū)域，由四個(gè)小α環(huán)環(huán)繞著三股反向平行的β層形成[7]。這個(gè)特征性的結(jié)構(gòu)是其抗凋亡作用中非常關(guān)鍵的結(jié)構(gòu)。Survivin蛋白有助于有絲分裂及細(xì)胞分化的順利完成。Survivin在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，而在肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、胰腺癌、晚期淋巴瘤、成神經(jīng)纖維瘤和胃癌等腫瘤組織中廣泛表達(dá)[8]。這一分布現(xiàn)象表明Survivin在正常的人體組織中的表達(dá)可能是靜止的,在腫瘤組織中可能處于失控的表達(dá)狀態(tài)[9]。當(dāng)前Survivin抗凋亡的確切機(jī)制還不清楚。有些學(xué)者提出Survivin主要通過直接作用于細(xì)胞凋亡途徑中的終末效應(yīng)酶Caspase-3和Caspase-7而對細(xì)胞凋亡起調(diào)節(jié)作用,并且參與細(xì)胞周期調(diào)控以及腫瘤血管的生成[10]。深入研究Survivin這種特異性的凋亡抑制因子有助于我們了解腫瘤的發(fā)生與發(fā)展,而且可能為腫瘤的特異性診斷與靶向性治療提供新的線索。

本研究通過免疫組織化學(xué)方法檢測Survivin在30例SNIP，10例鼻腔鱗癌中的表達(dá),其陽性表達(dá)率達(dá)到73.33%和80.00%，正常下鼻甲黏膜均未見表達(dá)，證實(shí)了Survivin在腫瘤組織中表達(dá)具有特異性?？梢酝茰ySurvivin參與SNIP及鼻腔鱗癌的發(fā)生,且促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。有實(shí)驗(yàn)表明通過轉(zhuǎn)染Survivin的反義核酸,可以導(dǎo)致內(nèi)源性Survivin水平的下降,而且可以抑制細(xì)胞的生長和增加細(xì)胞的凋亡,再加上Survivin在腫瘤中的表達(dá)具有特異性,使其在靶向治療中具有良好的應(yīng)用前景[11]。Survivin在SNIP的復(fù)發(fā)組表達(dá)高于初發(fā)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，復(fù)發(fā)組染色的強(qiáng)度高于初發(fā)組，提示Survivin在SNIP的侵襲性及破壞性生長中起重要作用，Survivin的表達(dá)和染色強(qiáng)度高，預(yù)示SNIP的復(fù)發(fā)，Survivin的表達(dá)可作為該腫瘤的預(yù)后的重要生物學(xué)指標(biāo)。Survivin在鼻腔鱗癌組織中的表達(dá)率高于SNIP,但差異無顯著性，這可能與本研究鼻腔鱗癌組織樣本數(shù)較少有關(guān)。因此檢測Survivin對于判斷SNIP惡性變的意義，需進(jìn)一步探討。

綜上所述，Survivin在SNIP及鼻腔鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。Survivin在SNIP及鼻腔鱗癌組織中表達(dá)具有特異性。Survivin的表達(dá)和染色強(qiáng)度高，預(yù)示SNIP的復(fù)發(fā)。Survivin有望成為SNIP及鼻腔鱗癌基因治療過程中的靶點(diǎn)，為將來臨床基因治療提供理論依據(jù)，從而降低SNIP的復(fù)發(fā)率及惡變率。

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（收稿：2015-10-16 修回：2016-04-25）

Expression and significance of Survivin in sinonasal inverted papilloma

LIANG Jinhui,LI Li,LUO Hailin,HUANG Helang,HUANG Mei,ZHANG Xiang,GAO Shan,MAO Weidong
Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery,Hanzhong Central Hospital,Hanzhong,723000,China

ObjectiveTo assess the protein expression of a new inhibitor of apoptosis,survivin,and it's clinical significance in sinonasal inverted papilloma(SNIP).MethodsImmunohistochemicalmethod was used to determine the expression of survivin in 30 cases of SNIP,10 cases of sinonasal squamous cell carcinoma(SCC)and 10 cases of normal inferior concha tissues.ResultsSurvivin was expressed in 22 of 30(73.33%)cases of SNIP,8 of 10(80.00%)cases of SCC and not expressed in 10(0%)cases of normal inferior concha tissues.Expression of survivin was significantly higher in SNIP and SCC than in normal tissues.ConclusionsSurvivin may play an important role in the pathway of progression of SNIP and SCC.Itmay be identified as a new therapeutic target.The high expression of Survivin indicates a recurrence of SNIP.

Inverted papilloma;Survivin;Nasal Cavity;Paranasal Sinuses;Squamous cell carcinoma

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2016.03.004

1 陜西省漢中市中心醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科（723000）

2 陜西省漢中市中心醫(yī)院腫瘤科

3 陜西省漢中市中心醫(yī)院病理科

梁錦輝,主治醫(yī)師.Email:6895210@qq.com