杜仲根化學(xué)成分研究

季馨懌，王秋花，吳靜

（1.江西機(jī)電職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江西南昌330013；2.江西省科學(xué)院應(yīng)用化學(xué)研究所，江西南昌330029；3.濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東濟(jì)寧272111）

杜仲根化學(xué)成分研究

季馨懌1，王秋花3，吳靜2*

（1.江西機(jī)電職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江西南昌330013；2.江西省科學(xué)院應(yīng)用化學(xué)研究所，江西南昌330029；3.濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東濟(jì)寧272111）

為研究杜仲根的化學(xué)成分，采用硅膠柱、半制備柱、凝膠色譜及重結(jié)晶等方法，從杜仲根的乙酸乙酯層中分離得到5個(gè)化合物。通過理化性質(zhì)和波譜學(xué)分析，鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明，分離得到了5個(gè)化合物，分別鑒定為槲皮素3-O-槐糖苷（1）、4-甲基-7-羥基香豆素（2）、原花青素B2（3）、7，4'-二羥基二氫黃酮（4）和表沒食子兒茶素（5）。這說明系統(tǒng)分離并鑒定了杜仲根的乙酸乙酯層化學(xué)成分，化合物2和3首次從該植物中分離得到。

杜仲根；化學(xué)成分；柱色譜

杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.），又稱木棉、思仙、思仲、思錦樹，其為杜仲科杜仲屬植物，單科單種，為我國(guó)所特有，分布于河南、陜西、甘肅、四川、云南、貴州、湖南和安徽等省區(qū)[1]。整棵樹均有利用價(jià)值，其葉，莖，樹皮及花作為藥材入藥，是名副其實(shí)的“植物黃金”。在中國(guó)傳統(tǒng)藥方中，其可以單獨(dú)使用或與其他化合物混合在中藥方劑中，用于治療陽痿、遺精、早泄、健忘、骨質(zhì)疏松、更年期綜合癥、高血壓、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腰痛、坐骨神經(jīng)痛、筋骨酸軟、腎虛痛，弱骨骼，骨折和關(guān)節(jié)疾病以及下背部疼痛等疾病[2]。

之前對(duì)杜仲化學(xué)成分的研究主要集中在其樹皮和樹葉，主要包括木脂素類、環(huán)烯醚萜類、酚類、甾體、萜類和黃酮類等化合物[3-5]。然而，對(duì)其根部成分的研究只有零星報(bào)道。本研究以杜仲根為研究對(duì)象，采用各種柱色譜技術(shù)，分離得到了5個(gè)化合物，分別鑒定為槲皮素3-O-槐糖苷（1）、4-甲基-7-羥基香豆素（2）、原花青素B2（3）、7，4'-二羥基二氫黃酮（4）和表沒食子兒茶素（5），其中化合物2和3為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

BS224 S電子分析天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；KQ-500B超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；Vacucella 22L真空干燥箱，德國(guó)MMM公司；Direct-Q3CHAO超純是系統(tǒng)，美國(guó)密理博公司；ALPHA 1-2LDPLUS冷凍干燥機(jī)，德國(guó)ALPHA公司；Thermo LCQ Advanctage液相色譜儀-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國(guó)Thermo Electron公司；Bruker Avance 400 NMR核磁共振儀，美國(guó)布魯克（Bruker）公司；CBⅠO21多功能暗箱式紫外分析儀，北京賽百奧科技有限公司；Agilent 1260高效液相色譜儀，美國(guó)安捷倫公司（四元泵，柱溫箱，UV 檢測(cè)器)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

硅膠（100～200目、200～300目），均為青島海洋化工廠生產(chǎn)；反相柱色譜硅膠RP-18（50m），日本YMC公司生產(chǎn)；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20，GE Pharmacia公司生產(chǎn)；大孔樹脂D-101，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；硅膠板，青島海洋生化工廠分廠（50mm×100mm，厚0.2～0.25mm）；反相分析色譜柱：ZORBAX ODS（5m，150mm×4.6mm）安捷倫，美國(guó)；反相半制備色譜柱：ZORBAX ODS C18，（5m，250mm×9.4mm）安捷倫，美國(guó)；色譜溶劑系統(tǒng)：CHCl2/MeOH，PE/EtOAc（不同比例）；MeOH/H2O（不同比例）；TLC顯色劑：紫外燈254，365nm；碘蒸氣；5% FeCl3乙醇溶液；10% H2SO4乙醇溶液；所有化學(xué)試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)材料于2014年10月購(gòu)于江西省萍鄉(xiāng)市。

2 提取與分離

杜仲根干燥樣品7 620.08g經(jīng)粉碎后，采用70%甲醇為溶劑，室溫浸泡提取3次，每次3d。提取液合并、過濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和冷凍干燥得杜仲根粗提物436.43g，粗提物用適量的水超聲輔助打散，分別用正己烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取。經(jīng)冷凍干燥分別得正己烷部分56.35g、乙酸乙酯部分142.13g和正丁醇部分98.74g。乙酸乙酯部分（EUBE，120g）硅膠柱色譜粗分，正己烷-乙酸乙酯（50∶1→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1→1∶2，v/v)→三氯甲烷-甲醇（10∶1→8∶1→6∶1，v/v）→三氯甲烷-甲醇-水（6∶4∶1，v/v/v）→甲醇梯度洗脫，薄層色譜跟蹤，合并相同部分，得到12部分（EUBE-1 to EUBE-20），其中EUBE-10部分經(jīng)過D101大孔樹脂粗分，分別用水和30%、50%乙醇梯度洗脫，得到3部分B1～B3，其中B2部分再經(jīng)ODS柱色譜分離，70%甲醇洗脫，得到8部分B2-1～B2-8，B2-3經(jīng)過Sephadex LH-20柱色譜，用甲醇-水（4∶1→1∶1，v/v)梯度洗脫）得到化合物1（26.0mg），B2-5經(jīng)過半制備液相色譜分離，得到到化合物2（28.0mg）、3（32.0mg）和化合物4（35.0mg）。B2-7經(jīng)Sephadex LH-20和半制備液相色譜分離得到化合物5（18.0mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

黃色粉末。ESⅠ-MS m/z: 649[M+Na]+,1H-NMR(400MHz，DMSO-d6,δ): 12.67 (1H,s,5-OH),10.8 (1H,s,7-OH),9.74 (1H,s,3′-OH),9.23 (1H,s,4′-OH),7.60 (1H,dd,J=8.4 Hz,H-6′),7.53 (1H,d,H-2′),6.85 (1H,d,J=8.4Hz,H-5′),6.37 (1H,d,H-8),6.18 (1H,d,H-6),5.69 (1H，d,J= 7.5Hz,H-1′′),4.59(1H,d,J=7.5Hz，H-1′′′)； 13C-NMR(75MHz，DMSO-d6，δ): 156.69(C-2),133.46(C-3),177.91(C-4),161.73(C-5),98.46(C-6),164.46(C-7),93.89(C-8),155.99(C-9),104.66(C-10),121.59(C-1′),115.85(C-2′),145.28(C-3′),148.96(C-4′),116.53(C-5′),122.31(C-6′),99.07(C-1′′),83.21(C-2′′),77.01(C-3′′),70.03(C-4′′),77.22(C-5′′),61.14(C-6′′),104.40(C-1′′′),74.86(C-2′′′),77.01(C-3′′′),70.03(C-4′′′),77.98(C-5′′′),61.14(C-6′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為槲皮素3-O-槐糖苷。

3.2 化合物2

白色粉末。ESⅠ-MS: m/z 177 [M+H]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6,δ): 10.38 (1H,brs,OH),7.54( 1H,d,J=8.6 Hz,H-5),6.76 (1H,dd,J=8.6,2.6 Hz,H-6),6.65(1H,d,J=2.6 Hz,H-8),6.13 (1H,s,H-3),2.40 (3H,s,4-CH3);13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6,δ): 161.04(C-2),160.13 (C-7),154.82(C-10),153.33 (C-4),126.47 (C-5),112.72 (C-6),111.91 (C-3),110.10 (C-9),102.09 (C-8),17.43 (4-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的4-甲基-7-羥基香豆素?cái)?shù)據(jù)相一致 ,故鑒定化合物2為4-甲基-7-羥基香豆素。

3.3 化合物3

白色粉末。ESⅠ-MS: m/z 578 [M]+;1H-NMR (400 MHz,DMSO- d6,δ) 上單元: 3.61 (1H,H-3),4.32 (1H,OH-3),4.44 (1H,H-4),4.94 (1H,H-2),5.71 (1H,H-8),5.81 (1H,H-6),6.51 (1H,H-6′),6.61 (1H,H-5′),6.79 (1H,H-2′),8.65 (1H,OH-5),8.74 (1H,OH-7),下單元: 2.36 (1H,H-4α),2.71 (1H,H-4β),4.17 (1H,H-3),4.77 (1H,OH-3),4.90 (1H,H-2),5.78 (1H,H-6),6.51 (1H,H-6′),6.63 (1H,H-5′),6.99 (1H,H-2′),8.02 (1H,OH-7),8.93 (1H,OH-5).13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6,δ): 上單元: 75.70 (C-2),71.44 (C-3),35.56(C-4),156.00 (C-5),95.93 (C-6),156.84 (C-7),93.96(C-8),156.84 (C-9),102.42 (C-10),131.62 (C-1′),115.04 (C-2′),144.84 (C-3′),144.44 (C-4′),115.10 (C-5′),118.00 (C-6′);下單元: 78.88 (C-2),66.30 (C-3),27.36 (C-4),154.71 (C-5),94.77 (C-6),154.71 (C-7),107.40 (C-8),153.92 (C-9),99.19 (C-10),131.62 (C-1′),115.10 (C-2′),144.62 (C-3′),144.44 (C-4′),113.93 (C-5′),118.00 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的原花青素B2數(shù)據(jù)相一致，故鑒定化合物3為原花青素B2。

3.4 化合物4

黃色粉末。ESⅠ-MS m/z: 257 [M+H]+,1H-NMR(DMSO-d6,400 MHz,δ): 10.58 (1H,brs,7-OH) ,9.58 (1H,brs,4'-OH),7.64 (1H,d,J=8.5 Hz,H-5),7.32 (2H,d,J=8.5 Hz,H-3',5').6.79 (2H,d,J=8.5 Hz,H-2',6'),6.50 (1H,dd,J=8.5,2.0Hz,H-6),6.33 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8).5.44(1H,dd,J=13.0,2.5 Hz,H-2),3.12 (1H,dd,J=17.0,13.0 Hz,H-3).2.62 (1H,dd,J=17.0,2.5 Hz,H-3);13C-NMR(DMSO-d6,100 MHz): 190.1(C-4),164.6(C-7).163.1(C-9),157.6 (C-4').129.3 (C-1').128.4 (C-5).128.2 (C-2',6').115.1 (C-3',5').113.5 (C-10).110.5 (C-6).102.5 (C-8).78.9 (C-2),43.1 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為7，4'-二羥基二氫黃酮。

3.5 化合物5

淺黃色固體。ESⅠ-MS m/z: 305 [M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6,400 MHz,δ):6.12 (1H,s,H-6 ),6.04 (1H,s,H-8),6.21(2H,s,H-2',6'),4.88 (1H,brs,H-2),4.86(1H,brs,H-3),2.81 (1H,dd,J = 16.0,4.0Hz,H-4a) ,2.56(1H,dd,J = 16.0,2.0 Hz,H-4b)。13C-NMR (DMSO-d6,100 MHz): 86.0(C-2),67.7(C-3),28.1 (C-4),157.1 (C-5),95.7 (C-6),157.8 (C-7),94.8 (C-8),157.3 (C-9),99.3(C-10),130.9 (C- 1'),107.8 (C-2',6'),146.3 (C-3',5'),133.0 (C-4')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故鑒定化合物5為表沒食子兒茶素。

4 結(jié)論

本研究分離并鑒定了杜仲根的乙酸乙酯層化學(xué)成分，其中化合物2和3為首次從該植物中分離得到。

[1]馮晗,周宏灝,歐陽冬生.杜仲的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2015,20(6):713-720.

[2]He X,Wang J,Li M,et al.Eucommia ulmoidesOliv.: ethnopharmacology,phytochemistry and pharmacology of an important traditional Chinese medicine[J].Journal of ethnopharmacology,2014,151(1):78-92.

[3]李欣,劉嚴(yán),朱文學(xué),等.杜仲的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技,2012,33(10):153-159.

[4]Dai X,Huang Q,Zhou B,et al.Preparative isolation and purification of seven main antioxidants fromEucommia ulmoidesOliv.(Du-zhong)leaves using HSCCC guided by DPPH-HPLC experiment[J].Food chemistry,2013,139(1):563-570.

[5]馬博,張媛,張達(dá)義,等.杜仲的化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].西部中醫(yī)藥,2013,20(12):153-159.

[6]郭娟麗,張培成,張智武.油菜花粉的化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中藥雜志,2009,34(10):1235-1237.

[7]李平,王立波.祖師麻化學(xué)成分研究[J].中國(guó)藥物化學(xué)雜志,2010,20(1):50-52.

[8]王芳,張瑜,趙余慶.昆明山海棠化學(xué)成分的研究[J].中草藥,2011,42(1):46-49.

[9]楊帆,徐康平,李福雙,等.薄葉卷柏化學(xué)成分研究[J].中南藥學(xué),2010,8(7):496-499.

[10]玉華,王青虎,韓晶晶,等.玉簪花化學(xué)成分的研究[J].中成藥,2017,40(1):107-111.

Chemical Constituents from Roots of Eucommia ulmoides Oliv.

Ji Xin-yi1，Wang Qiu-hua3，Wu Jing2*
(1.Jiangxi Vocational College of Mechanical &Electrical Technology,Jiangxi Nanchang 330013;2.Institute of Applied Chemistry,Jiangxi Academy of Sciences,Jiangxi Nanchang 330029;3.Jining NO.1 People's Hospital,Shandong Jining 272111)

To study the chemical constituents of Eucommia ulmoides Oliv roots,the compounds were isolated and purified from E.ulmoides roots by various column chromatographic techniques.Their chemical structures were elucidated on the basis of spectroscopic data analysis and physicochemical properties.The results showed that five compounds were isolated and identified as quercetin 3-O-sophoroside (1),4-methylumbelliferone (2),procyanidin B2(3),7,4'-dihydroxyflavone (4),and (-)-epigallocatechin (5).Conclusion: Compounds 2 and 3 were isolated for the first time from E.ulmoides.This shows that the chemical constituents of ethyl acetate layer of E.ulmoides roots were isolated and identified,compounds 2 and 3 were isolated from this plant for the first time.

Roots of Eucommia ulmoides Oliv.;Chemical constituents;Column chromatographic

O629

A

2096-0387（2017）03-0040-03

季馨懌（1989-），女，碩士，助教，研究方向：系統(tǒng)工程。