血過氧化物酶體增殖因子活化受體γ、胱抑素C與老年動脈粥樣硬化的相關(guān)性

楊海燕 王 惠 李 曼 潘豐慧

(南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院干部保健病房，江蘇 南京 210008)

血過氧化物酶體增殖因子活化受體γ、胱抑素C與老年動脈粥樣硬化的相關(guān)性

楊海燕 王 惠 李 曼 潘豐慧

(南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院干部保健病房，江蘇 南京 210008)

目的 測定健康成年人及老年動脈粥樣硬化(AS)患者的血過氧化物酶體增殖因子活化受體(PPAR)γ基因表達及胱抑素C含量，探討該兩項指標(biāo)與AS程度的相關(guān)性。方法 選取健康體檢成年人40例為健康對照組。選取老年2型糖尿病患者共80例，彩超檢查均提示有頸動脈內(nèi)膜增厚伴斑塊形成。測定肱-踝動脈脈搏波速度(baPWV)及踝肱指數(shù)(ABI)，左右兩側(cè)均滿足1 200 cm/s0.05)；PPARγ基因灰度與AS嚴重度呈明顯正相關(guān)(r=0.61，P<0.01)。 結(jié)論 PPARγ與AS有密切關(guān)系，其血漿水平可能是反映AS嚴重程度的指標(biāo)。

過氧化物酶體增殖因子活化受體γ；胱抑素C；動脈粥樣硬化

動脈粥樣硬化(AS)斑塊病變的形成包括單核/巨噬細胞、T細胞的聚集、泡沫細胞的形成、平滑肌細胞的遷移和增殖以及細胞碎片堆積、纖維帽的形成等。在糖尿病患者，高血糖通過誘導(dǎo)各種炎性介質(zhì)和化學(xué)因子對胰島細胞造成損害〔1〕。最近研究發(fā)現(xiàn)過氧化物酶體增殖因子活化受體(PPAR)γ在AS損傷處和泡沫細胞中都有較高的表達，并與肥胖相關(guān)的代謝性疾病，如高脂血癥、胰島素抵抗和冠心病等發(fā)病有關(guān)〔2〕。本研究測定老年AS患者血漿PPARγ基因表達、血清胱抑素C含量，分析其與AS嚴重程度的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 見表1。選取2013年1～12月在我院健康體檢成年人40例，男26例，女14例，年齡24～65歲，均排除2糖尿病、心腦血管病等器質(zhì)性疾病史，彩超檢查均提示頸動脈無異常，肱-踝動脈脈搏波速度(baPWV)及踝肱指數(shù)(ABI)檢查均在正常范圍。選取2012年1月至2014年1月在我院干部病房住院老年2型糖尿病患者80例，均符合以下條件：年齡≥75歲，2型糖尿病診斷符合1999年WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)，彩超檢查提示有頸動脈內(nèi)膜增厚伴斑塊形成。根據(jù)AS程度分為重度組及輕度組，每組各40例。所有病例均排除以下情況：①既往有明確冠心病、癥狀性腦卒中疾病史；②近3個月內(nèi)有外科手術(shù)、創(chuàng)傷、急性感染等病史；③有慢性消耗性疾病和惡性腫瘤病史。三組患者在BMI、血常規(guī)、Cr、TC、TG、LVEF、WBC、Hb、PLT方面無明顯差異(P>0.05)。重度AS組與輕度AS組患者年齡、性別、LDL-C、HDL-C無明顯差異(P>0.05)；③重度AS組患者晨尿白蛋白、HbA1c、IMT、24 h平均收縮壓、baPWV明顯高于輕度AS組，ABI明顯低于輕度AS組(P<0.05)。

組別健康對照組輕度AS組重度AS組P值男/女(n)26/1432/829/110.4311)年齡(歲)45.08±15.2383.08±4.5383.63±4.320.5801)體重指數(shù)(BMI)(kg/m2)23.49±3.1124.70±1.1424.41±1.620.3612)白細胞計數(shù)(WBC)(×109/L)6.71±0.795.87±1.336.07±0.940.4462)血紅蛋白(Hb)(g/L)135.61±13.52130.25±11.19129.93±14.870.9122)血小板計數(shù)(PLT)(×109/L)213.45±62.47199.50±73.89198.93±47.580.9672)肌酐(Cr)(μmol/L)69.51±7.9975.45±7.6175.68±24.340.9622)總膽固醇(TC)(mmol/L)4.18±0.823.63±0.513.81±0.790.2212)低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)(mmol/L)2.57±1.281.90±0.441.87±0.690.8591)高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)(mmol/L)1.42±0.421.16±0.180.99±0.280.1201)甘油三酯(TG)(mmol/L)1.55±0.761.27±0.251.74±1.270.1282)晨尿白蛋白(mg/L)9.52±13.7411.70±9.6819.61±11.650.0011)糖化血紅蛋白(HbA1c)(%)5.56±0.326.10±0.587.63±1.090.0011)24h平均收縮壓(mmHg)129.41±14.49129.85±10.25140.45±16.910.0011)24h平均舒張壓(mmHg)71.50±9.8967.45±8.6570.88±10.540.1162)頸動脈內(nèi)膜中層厚度(IMT)(mm)0.09±0.010.10±0.010.11±0.010.0011)左室射血分數(shù)(LVEF)(%)62.51±3.7659.18±2.2857.60±5.540.1022)baPWV(m/s) 左/右1020.50±123.58/1009.44±113.231818.30±128.91/1821.40±136.602540.68±613.40/2479.35±374.730.0012)ABI 左/右1.11±0.03/1.09±0.030.89±0.06/0.89±0.050.68±0.10/0.70±0.090.0012)

1)輕度AS組與重度AS組比較；2)三組間比較

1.2 研究方法

1.2.1 AS程度判斷標(biāo)準(zhǔn) 左右兩側(cè)均符合1 200 cm/s

1.2.2 baPWV及ABI測定 采用日本OMRON/Colin公司生產(chǎn)的全自動動脈硬化測定儀VP-1000 (BP-203RPEⅡ)測量。測前受檢者休息5 min，取仰臥位，將電極夾在病人的兩只手腕上，袖帶縛于左右兩側(cè)上臂及下肢踝部，上臂袖帶氣囊標(biāo)志處對準(zhǔn)肱動脈，袖帶下緣距肘窩橫紋2～3 cm，下肢袖帶氣囊標(biāo)志處位于下肢內(nèi)側(cè)，袖帶下緣距內(nèi)踝1～2 cm，心電感應(yīng)器放置于左側(cè)第二肋間。輸入年齡、性別、身高、體重。儀器自動顯示左右兩側(cè)baPWV及ABI數(shù)據(jù)。

1.2.3 PPARγ測定 以RT-PCR方法檢測受試樣品PPARγ基因的表達。引物設(shè)計軟件：Primer5，引物合成由南京金斯瑞科技有限公司提供，引物純化方式：PAGE。引物灰度分析軟件：BandScan4.3。取2 ml EDTA抗凝人血離心分離血漿，取300 μl血漿加入1 ml冰冷TRIzol試劑，勻漿后轉(zhuǎn)移至1.5 ml 的離心管中，室溫下放置5 min，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離；向裂解液中加入氯仿0.2 ml，上下振蕩15 s，室溫靜置3 min；12 000 r/min，4℃離心15 min；取出離心管，吸取無色上清水相移至另一離心管，加入等體積的異丙醇，室溫靜置10 min；12 000 r/min，4℃離心10 min；去除上清，加入1 ml 75%的乙醇混勻。12 000 r/min，4℃離心10 min；吸盡上清；室溫干燥沉淀2～5 min，加入35～45 μl無RNase水溶解RNA沉淀，待完全溶解后于-70℃保存。采用TRIzol一步法試劑盒提取細胞總RNA，檢測PPARγ mRNA含量。 PCR 產(chǎn)物經(jīng)1.5 %瓊脂糖凝膠電泳后，與DNA標(biāo)準(zhǔn)分子量進行比較，用Biometra 凝膠成像系統(tǒng)進行成像和圖像分析，PPARγ mRNA表達水平用目的基因條帶與β-actin 條帶吸光度值之比表示(灰度分析)。

1.2.4 血液檢查 血常規(guī)、生化全套、血清胱抑素C、HbA1c等檢查均在本院檢驗科常規(guī)檢測；血管彩超、動態(tài)血壓檢查在本院干部病房功能室進行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗，變量相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 各組血漿PPARγ、血清胱抑素C含量比較 三組血漿PPARγ水平差異顯著(P<0.01)；血清胱抑素C含量無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。見表2。

2.2 AS與血清胱抑素C、血漿PPARγ水平的Logistic回歸分析 血漿PPARγ水平與AS程度呈正相關(guān)(r=0.61，P<0.01)。胱抑素C與AS程度無相關(guān)性(r=0.11,P=0.31)。

組別胱抑素C(mg/L)PPARγ(灰度)GAPDH(灰度)PPARγ/GAPDH健康對照組0.83±0.1537361.11±12742.51151891.45±19587.820.22±0.14輕度AS組0.88±0.2650619.15±17782.411)173881.35±27677.910.30±0.121)重度AS組0.94±0.3380349.33±21003.191)166811.65±29153.540.48±0.091)2)

與健康對照組比較：1)P<0.01;與輕度AS組比較：2)P<0.01

3 討 論

糖尿病是發(fā)生心腦血管疾病的獨立危險因素，雖然糖尿病促發(fā)AS的機制仍未完全闡明，但目前認為氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)在該過程起重要作用。AS主要病理生理特點是血管壁慢性炎癥的纖維增生，多種炎性因子損傷內(nèi)皮功能。目前臨床上主要應(yīng)用baPWV及ABI作為檢測AS的指標(biāo)，但是動脈內(nèi)皮功能的改變早于結(jié)構(gòu)改變，當(dāng)baPWV及ABI異常時，患者常常已經(jīng)在血管結(jié)構(gòu)上發(fā)生了明顯的AS。如果有血清標(biāo)志物指標(biāo)能反映早期動脈彈性變化，將有助于臨床發(fā)現(xiàn)早期動脈血管病變患者，對于減少病人心腦血管事件的發(fā)生有重要意義。

PPARγ是核轉(zhuǎn)錄因子中的超家族成員，它調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄，參與體內(nèi)許多病理生理過程。PPARγ在脂肪細胞中有高表達，可促進糖和脂質(zhì)攝取、改善胰島素抵抗〔3〕。PPARγ具有較強的抗炎作用，可以抑制血管平滑肌細胞增殖、遷移，可以抑制內(nèi)皮細胞血管細胞黏附分子(VCAM)-1和細胞間黏附分子(ICAM)-1的表達，進而影響單核細胞聚集到早期的AS斑塊處。PPARγ還具有調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能的作用，通過影響內(nèi)皮衍生的血管活性物質(zhì)的產(chǎn)生而影響血管張力，進而改善AS〔4～6〕。研究發(fā)現(xiàn)，人體AS斑塊處有PPARγ高表達，而正常動脈的PPARγ表達量極少〔7〕。這提示PPARγ在AS的過程中扮演著重要角色。既往研究主要檢測AS斑塊中單核細胞、巨噬細胞等細胞中的PPARγ含量，而本文將患者血漿PPARγ作為檢測指標(biāo)，結(jié)果提示在AS發(fā)生發(fā)展過程中，機體可能以PPARγ合成增加來對抗AS進程。

胱抑素C是組織蛋白酶家族中的半胱氨酸蛋白酶的主要抑制劑，反映了腎小球濾過率。國內(nèi)有臨床研究發(fā)現(xiàn)，在2型糖尿病患者，胱抑素C水平與頸動脈AS嚴重度呈正相關(guān)〔8〕。在平均2.5年的隨訪期間，Hoke等〔9〕對509 例糖尿病病人進行了2 次冠脈鈣化評分，采用Logistic回歸模型中的逐步方式進行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)胱抑素C能夠預(yù)測亞臨床冠脈AS。但亦有不同的報道，新近一項前瞻性縱向隊列研究對初始ABI正常的人群進行9.8年隨訪后發(fā)現(xiàn)，胱抑素C水平升高與ABI下降相關(guān)，但不是獨立危險因素〔10〕。Doganer等〔11〕研究發(fā)現(xiàn)，慢性穩(wěn)定性冠心病患者胱抑素C水平明顯低于健康對照組，提示胱抑素C可能需聯(lián)合其他指標(biāo)才有助于判斷AS程度。而一項針對中年高血壓患者的研究提示血清胱抑素C水平與AS無相關(guān)性〔12〕。本研究提示胱抑素C可能參與AS的發(fā)生發(fā)展，但難以反映AS的嚴重程度。

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〔2015-12-23修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

南京市醫(yī)學(xué)科技發(fā)展項目基金資助項目(No.YKK 11102)

楊海燕(1972-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事老年心血管病學(xué)研究。

R541.4

A

1005-9202(2017)06-1363-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.06.025