滌痰湯在穩(wěn)定兔動脈粥樣硬化模型中的作用機制

郭遂懷 張 鵬

(武漢市武昌醫(yī)院重癥科，湖北 武漢 430063)

滌痰湯在穩(wěn)定兔動脈粥樣硬化模型中的作用機制

郭遂懷 張 鵬1

(武漢市武昌醫(yī)院重癥科，湖北 武漢 430063)

目的 探討滌痰湯在穩(wěn)定兔動脈粥樣硬化(AS)中的作用機制。方法 40只健康雄性新西蘭白兔隨機分為空白對照組、AS模型組、阿托伐他汀鈣組、滌痰湯組和阿托伐他汀鈣+滌痰湯組，每組8只?？瞻讓φ战M飼以普通飼料，其余各組給高脂飼料以建立AS模型。建模成功后，按組別給予不同藥物干預4 w。取頸總動脈血測定血清中血脂〔甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)〕、抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)、炎性因子腫瘤壞死因子(TNF)-α和白細胞介素(IL)-6的含量；取主動脈弓組織作蘇木素-伊紅(HE)染色比較不同分組實驗動物主動脈組織形態(tài)學改變。結(jié)果 與AS模型組比較，阿托伐他汀鈣組、滌痰湯組和阿托伐他汀鈣+滌痰湯組TG、TC、LDL-C、TNF-α和IL-6水平顯著降低，HDL-C、SOD和MDA水平顯著升高(P<0.05)；與阿托伐他汀鈣組和滌痰湯組比較，阿托伐他汀鈣+滌痰湯組TG、TC、LDL-C、TNF-α和IL-6水平下降更顯著，HDL-C、SOD和MDA水平升高更顯著(P<0.05)。形態(tài)學觀察顯示阿托伐他汀鈣組、滌痰湯組和阿托伐他汀鈣+滌痰湯組的血管內(nèi)膜層泡沫狀細胞均有減少，脂質(zhì)沉積均有減輕，阿托伐他汀鈣+滌痰湯組的減輕程度更顯著。結(jié)論 滌痰湯穩(wěn)定AS的作用機制可能是通過改善機體血脂異常，增強抗氧化應激能力和減輕炎性反應等途徑實現(xiàn)的。滌痰湯與阿托伐他汀鈣聯(lián)合應用有協(xié)同作用，具有臨床推廣應用價值。

滌痰湯；動脈粥樣硬化；血脂；炎性因子

動脈粥樣硬化(AS)的發(fā)病機制復雜，與多種因素密切相關，其中脂質(zhì)代謝異常、氧化應激損傷和炎性浸潤被認為是AS發(fā)病的幾種主要病變基礎〔1〕。阿托伐他汀鈣在臨床上對高脂血癥具有較好的療效，有助于改善AS患者的血脂異常，但臨床效果仍不理想〔2〕。中醫(yī)學認為AS與痰濁密切相關，由于體質(zhì)虛弱，中氣不足，脾虛不運，可以使水濕停留，凝聚為痰，其治療上講究辨證論治，對于AS主要從活血化瘀、祛痰降脂、扶正補虛法(健脾益氣、補益肝腎)等治法入手。有研究發(fā)現(xiàn)，滌痰湯具有調(diào)節(jié)血脂水平和降低致AS炎性因子的作用〔3〕，本研究旨在進一步探討滌痰方在穩(wěn)定AS中的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康雄性新西蘭白兔40只〔由湖北省疾病預防控制中心提供，動物合格證號：SCXK(鄂)2008-0005〕，體質(zhì)量1.4～1.6 kg，平均(1.5±0.18)kg。

1.2 藥物與主要試劑 滌痰湯(由湖北中醫(yī)藥大學專家門診部中藥房提供，其配方包括：半夏7.5 g，茯苓6 g，膽南星7.5 g，橘紅4.5 g，枳實6 g，竹茹2 g，人參3 g，石菖蒲3 g，甘草1.5 g，生姜5片)，原方水煎2次，煎液過濾，混合后加熱濃縮至生藥量0.738 g/ml，4℃保存?zhèn)溆?。阿托伐他汀鈣為美國輝瑞制藥有限公司，批號:H20051409，超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒購自南京建成生物工程研究所;腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-6試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司)。

1.3 實驗分組與給藥方法 按隨機數(shù)字表法分為5組，空白對照組(n=8)：普通飼養(yǎng)12 w，后4 w增加生理鹽水10 ml/kg灌胃，1次/d；AS模型組(n=8)：高脂飼料(配方為83%普通飼料、5%豬油、10%蛋黃、2%膽固醇)飼養(yǎng)，8 w后隨機選取2只，麻醉后取頸總動脈血，查血脂，提示血脂明顯增高；主動脈分離后制備蘇木素-伊紅(HE)切片，血管壁內(nèi)均可見明顯的粥樣斑塊，提示AS造模成功。剩余6只繼續(xù)喂予高脂飼料并以生理鹽水 10 ml/kg灌胃，1次/d，共4 w；阿托伐他汀鈣組(n=8)：高脂飼料飼養(yǎng)12 w，前8 w為建立AS模型，后4 w增加阿托伐他汀鈣3 mg·kg-1·d-1，按10 ml/kg灌胃，1次/d；滌痰湯組(n=8)：高脂飼料飼養(yǎng)12 w，前8 w為建立AS模型，后4 w增加滌痰湯10 ml/kg灌胃，1次/d；阿托伐他汀鈣+滌痰湯組(n=8)：高脂飼料飼養(yǎng)12 w，前8 w為建立AS模型，后4 w增加阿托伐他汀鈣3 mg·kg-1·d-1溶于滌痰湯中，按10 ml/kg灌胃，1次/d。

1.4 標本采集與觀察指標 末次給藥后禁食(不禁水)12 h，取頸總動脈血4 ml，室溫靜置30 min，3 500 r/min離心15 min，分離血清，應用全自動生化分析儀測定血清中血脂水平〔甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)〕和抗氧化因子(SOD和MDA)的含量，應用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定血清中炎性因子(TNF-α和IL-6)的含量；于主動脈弓處取直徑3 mm的組織作HE染色比較不同分組實驗動物主動脈組織形態(tài)學改變。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0軟件進行方差分析、t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 各組血脂水平比較 AS模型組兔血清TC、TG、LDL-C水平均顯著高于空白對照組，HDL-C水平顯著低于空白對照組(P<0.05)。與AS模型組相比，阿托伐他汀鈣組、滌痰湯組、阿托伐他汀鈣+滌痰湯組TC、TG、LDL-C水平均顯著降低，HDL-C水平顯著升高(P<0.05)；分別與阿托伐他汀鈣組和滌痰湯組比較，阿托伐他汀鈣+滌痰湯組的TC、TG、LDL-C水平均顯著下降，HDL-C水平均顯著升高(P<0.05)。見表1。

組別nTCTGHDL-CLDL-C空白對照組82.02±0.290.93±0.090.74±0.070.47±0.17AS模型組621.27±1.541)1.32±0.181)0.59±0.041)6.41±0.371)阿托伐他汀鈣組84.25±0.712)3)0.97±0.182)3)1.44±0.182)3)1.43±0.212)3)滌痰湯組84.31±0.342)3)0.91±0.022)3)1.32±0.262)3)1.36±0.122)3)阿托伐他汀鈣+滌痰湯組83.14±0.252)0.88±0.032)1.72±0.342)0.84±0.192)

與空白對照組比較:1)P<0.05；與AS模型組比較:2)P<0.05；與阿托伐他汀鈣組+滌痰湯組比較:3)P<0.05；下表同

2.2 各組抗氧化因子水平比較 AS模型組兔血清SOD和MDA水平均顯著低于空白對照組(P<0.05)。與AS模型組相比，阿托伐他汀鈣組、滌痰湯組、阿托伐他汀鈣+滌痰湯組SOD和MDA水平顯著升高(P<0.05)；分別與阿托伐他汀鈣組和滌痰湯組比較，阿托伐他汀鈣+滌痰湯組SOD和MDA水平均顯著升高(P<0.05)。見表2。

組別nSOD(U/ml)MDA(nmol/ml)空白對照組8299.49±15.874.42±0.40AS模型組6154.66±9.581)11.55±1.111)阿托伐他汀鈣組8242.38±11.082)3)6.14±0.382)3)滌痰湯組8263.03±8.762)3)5.30±0.722)3)阿托伐他汀鈣+滌痰湯組8284.27±9.162)4.71±0.362)

2.3 各組炎性因子水平比較 AS模型組兔血清TNF-α和IL-6水平均顯著高于空白對照組(P<0.05)。與AS模型組相比，阿托伐他汀鈣組、滌痰湯組、阿托伐他汀鈣+滌痰湯組TNF-α和IL-6水平顯著降低(P<0.05)；分別與阿托伐他汀鈣組和滌痰湯組比較，阿托伐他汀鈣+滌痰湯組TNF-α和IL-6水平均顯著下降(P<0.05)。見表3。

組別nTNF-α(ng/ml)IL-6(pg/ml)空白對照組80.52±0.01133.69±3.35AS模型組61.36±0.021)181.06±4.911)阿托伐他汀鈣組80.80±0.012)3)148.53±1.032)3)滌痰湯組80.69±0.012)3)141.95±0.952)3)阿托伐他汀鈣+滌痰湯組80.60±0.022)134.74±0.762)

2.4 各組主動脈組織形態(tài)學改變情況 空白對照組可見主動脈壁厚薄均勻，內(nèi)膜光滑完整，無AS斑塊形成；AS模型組血管內(nèi)膜層呈扁平或出現(xiàn)隆起，內(nèi)膜下出現(xiàn)大量泡沫狀細胞，細胞外有明顯脂質(zhì)沉積現(xiàn)象。阿托伐他汀鈣組和滌痰湯組的內(nèi)膜下泡沫狀細胞數(shù)量和脂質(zhì)沉積現(xiàn)象程度均明顯輕于AS模型組，但兩組間無明顯差異。阿托伐他汀鈣+滌痰湯組的內(nèi)膜下泡沫狀細胞數(shù)量顯著減少，脂質(zhì)沉積現(xiàn)象明顯改善，改善程度顯著優(yōu)于阿托伐他汀鈣組和滌痰湯組。見圖1。

圖1 各組主動脈組織病理學形態(tài)(HE，×200)

3 討 論

AS是多因素共同作用引起的，發(fā)病機制復雜，目前尚未完全闡明，其中脂質(zhì)代謝障礙已被證實為AS的病變基礎，因此改善患者的血脂水平是臨床治療AS的重要策略〔4〕。阿托伐他汀鈣是HMG-CoA還原酶的選擇性、競爭性抑制劑，可有效抑制肝臟內(nèi)HMG-CoA還原酶的活性和膽固醇的合成，從而降低血漿中膽固醇和脂蛋白水平，同時可增加細胞表面LDL受體，從而增強細胞攝取和代謝LDL的能力〔2,5〕，在臨床治療中應用較為廣泛照藥。他汀類藥物長期服用可引發(fā)患者出現(xiàn)胃腸道不適癥狀，也可導致肝腎功能下降。在臨床療效方面，阿托伐他汀鈣對AS長期治療的總有效率仍不十分理想。我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥在慢性疾病的臨床治療中具有很多優(yōu)勢，有研究顯示滌痰湯對AS具有較好的療效〔3〕。

中醫(yī)學認為AS與痰關系密切，中醫(yī)學認為體質(zhì)虛弱，中氣不足，脾虛不運可以使水濕停留，凝聚為痰，痰為一種危害甚廣的致病因素〔6〕。同時，久病傷氣，氣虛不能推動血行，血脈瘀滯更甚，從而加劇心腦血管事件的風險；痰瘀互阻，久病蘊熱，灼傷真陰或久病耗傷氣血，累及真陰，皆可導致陰虛，而陰虛生內(nèi)熱，煎灼津液，煉液為痰。滌痰湯出自南宋嚴用和的《濟生方》，具有益氣化痰、化濁開竅的作用。研究報道，滌痰湯對AS具有一定的療效，可防止血栓的形成，延緩AS病情的進展,但其作用機制尚未闡述清楚〔7〕。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，滌痰方有助于調(diào)節(jié)AS兔的血脂水平，可提高機體的抗氧化應激能力〔3〕。

動脈內(nèi)膜脂質(zhì)異常沉聚是AS的主要病理變化之一，膽固醇酯及膽固醇是粥樣斑塊的主要成分。氧化應激在AS的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的促進作用，SOD是機體內(nèi)主要的抗氧化酶和超氧自由基清除劑，其活性水平的高低代表了組織清除自由基的能力，是MDA細胞膜脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，其表達水平高低是機體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化程度的重要標志和AS的病變指標。炎癥反應也是AS發(fā)生發(fā)展的重要促進因素，TNF-α和IL-6是兩種重要的炎癥因子，其中TNF-α可誘發(fā)動脈粥樣斑塊的形成、擴大，增加內(nèi)皮細胞產(chǎn)生血小板因子的活性，促使血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生直接細胞毒作用；IL-6對細胞外基質(zhì)具有較強調(diào)節(jié)作用，可刺激血管平滑肌細胞增生與基質(zhì)降解酶的合成，侵蝕AS斑塊內(nèi)基質(zhì)致使粥樣硬化斑塊破裂，加劇AS斑塊的不穩(wěn)定性。本組研究結(jié)果說明滌痰湯與阿托伐他汀鈣具有很好的協(xié)同作用，可顯著糾正AS的血脂異常，增強機體的抗氧化應激能力，減輕炎性反應，究其原因，可能與滌痰湯的主要成分密切相關。滌痰方主要由半夏、茯苓、膽南星、橘紅、枳實、竹茹、人參、石菖蒲、甘草、生姜等藥物組成，研究顯示，半夏能夠降低全血黏度、抑制紅細胞的聚集和提高紅細胞的變形能力〔8〕，同時對高脂血癥具有一定的治療作用〔9〕。茯苓具有抗感染和免疫調(diào)節(jié)等功效，可降低血清TC、TG和LDL-C水平,升高HDL-C和SOD水平〔10〕。膽南星、橘紅、枳實等具有抗感染作用，還可增強抗氧化酶活性,抑制脂質(zhì)過氧化，抗氧化防御功能也十分顯著〔11,12〕。竹茹、人參、石菖蒲等的降脂作用也已得到諸多研究報道證實〔13〕。甘草和生姜則主治清熱解毒、祛痰止咳，具有清除氧自由基，起到抗AS和抗血栓形成作用〔14,15〕。滌痰方對AS的療效，其作用機制可能是通過改善機體血脂異常，增強抗氧化應激能力和減輕炎性反應等途徑實現(xiàn)的。滌痰方與阿托伐他汀鈣聯(lián)合應用有協(xié)同作用，具有臨床推廣應用價值。

1 吳 或,孫 琳,黃彥生,等.氧化應激與炎癥在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用及相關治療藥物研究〔J〕.中國實用神經(jīng)疾病雜志,2014;17(21):127-9.

2 劉 星,馬東明,諸 波,等.一氧化氮在阿托伐他汀鈣抗動脈粥樣硬化中的作用〔J〕.重慶醫(yī)科大學學報,2015;40(9):1232-5.

3 郭遂懷,張麗君.滌痰湯對動脈粥樣硬化兔血脂、氧化應激以及炎性因子的影響〔J〕.湖北中醫(yī)藥大學學報,2016;18(1):8-11.

4 Considine MJ,Sandalio LM,Foyer CH.Unravelling how plants benefit from ROS and NO reactions,while resisting oxidative stress〔J〕.Ann Bot,2015;116(4):469-73.

5 武曉玲,于紅霞,王淑珍,等.阿托伐他汀聯(lián)合普羅布考對動脈硬化家兔血流及斑塊影響〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學進展,2015;15(23):4424-6,4430.

6 朱 磊,劉 君,昌艷艷.動脈粥樣硬化與炎性因子的相關性研究〔J〕.中國實用醫(yī)藥,2014;9(7):250-1.

7 Sheng CX,Li HH.Oxidative stress and risk factors for cerebrovascular diseases〔J〕.Chin J Contemp Neurol Neurosurg,2014;14(10):910-4.

8 楊 廣,江 巍,張敏州,等.化痰中藥半夏及山慈菇抗動脈粥樣硬化的作用機制研究〔J〕.中藥新藥與臨床藥理,2013;24(3):230-3.

9 陳基敏,陳咸川.益氣活血化痰方治療老年頸動脈硬化〔J〕.中國實驗方劑學雜志,2013;19(10):322-5.

10 周 軍.丹參滌痰湯治療痰瘀互阻型高脂血癥的臨床觀察〔D〕.長沙：湖南中醫(yī)藥大學,2009.

11 Kim JA,Park HS,Park KI,etal.Proteome analysis of the anti-inflammatory response of flavonoids isolated from Korean citrus aurantiuml in lipopolysaccharide-induced L6 rat skeletal muscle cells〔J〕.Am J Chin Med,2013;41(4):901-12.

12 梁海云.活血滌痰湯治療血脂異常臨床觀察〔J〕.山西醫(yī)藥雜志(下半月刊),2013;42(3):332-3.

13 苗 華,張 旭.茯苓結(jié)合有氧運動對大鼠基于代謝組學表征的血脂紊亂相關指標的影響〔J〕.中國運動醫(yī)學雜志,2013;32(11):1013-7.

14 肖鳳霞,林 勵,馬艷艷,等.毛橘紅總黃酮對酒精性肝損傷大鼠炎性細胞因子的影響〔J〕.廣州中醫(yī)藥大學學報,2011;28(4):396-8.

15 張明發(fā),沈雅琴.甘草抗動脈粥樣硬化和抗血栓形成作用〔J〕.西北藥學雜志,2011;26(3):222-6.

〔2016-06-16修回〕

(編輯 滕欣航)

2015年度武漢市臨床醫(yī)學科研項目(No.WZ15C14)

張 鵬(1975-)，女，碩士，副主任護師，主要從事科研管理和護理管理研究。

郭遂懷(1977-)，女，博士，副主任醫(yī)師，主要從事中醫(yī)藥防治腦血管疾病研究。

R28

A

1005-9202(2017)06-1336-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.06.014

1 武漢市武昌醫(yī)院科教科