上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻譯區(qū)rs16917496位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性觀察

李騰華，史淑紅，梁文娟，李艷芳

(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，石家莊050000)

上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻譯區(qū)rs16917496位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性觀察

李騰華，史淑紅，梁文娟，李艷芳

(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，石家莊050000)

目的觀察上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻譯區(qū)rs16917496位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性變化，并探討其與患者預(yù)后的關(guān)系。方法選取100例上皮性卵巢癌患者為病例組，100例健康體檢者為對(duì)照組，檢測(cè)并比較兩組受檢者SET8基因3′非翻譯區(qū)rs16917496位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性。將病例組患者按基因型分組，對(duì)各亞組進(jìn)行生存分析，比較各組3年生存率。結(jié)果病例組基因型CC型5例、CT型52例、TT型43例，等位基因C頻率31%、T頻率69%。對(duì)照組基因型CC型13例、CT型38例、TT型49例，等位基因C頻率32%、T頻率68%。兩組CC、CT基因型構(gòu)成比相比，P均<0.05；TT基因型構(gòu)成比相比，P>0.05；兩組中 T、C等位基因頻率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.046,P=0.830)。病例組SET8基因3′非翻譯區(qū)rs16917496位點(diǎn)基因型為CC、CT、TT患者3年生存率分別為 80%(4/5)、74.1%(40/54)、58.5% (24/41)，三種基因型患者3年生存率相比，P>0.05。結(jié)論上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻譯區(qū)rs16917496位點(diǎn)基因型CC構(gòu)成比低于正常女性。SET8基因3′非翻譯區(qū)rs16917496位點(diǎn)基因型為CC、CT、TT的上皮性卵巢癌患者3年生存率相近。

SET8基因;單核苷酸多態(tài)性；卵巢腫瘤；上皮性卵巢癌

SET8基因又稱為SETD8、PR-SET7或KMT5a，編碼組蛋白 H4賴氨酸 20 單甲基轉(zhuǎn)移酶，這種酶通過甲基化組蛋白進(jìn)而調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞的生長(zhǎng)周期及腫瘤的發(fā)生發(fā)展[1,2]。SET8 基因3′非翻譯區(qū)(3′UTR)的 miR-502 結(jié)合區(qū)域內(nèi)存在rs16917496 位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性(SNP)，以往研究發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與肺癌[3]、白血病[4,5]、肝癌[6]、乳腺癌[7]等多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，但是其與上皮性卵巢癌發(fā)生及預(yù)后的關(guān)系尚不明確。本研究觀察了上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻譯區(qū)rs16917496位點(diǎn)SNP，并探討其與預(yù)后的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2008年1月～2012年12月收治的100例上皮性卵巢癌患者為病例組，患者年齡12～76歲。均經(jīng)術(shù)后病理檢查證實(shí)為上皮性卵巢癌，臨床分期Ⅰ期18例、Ⅱ期24例、Ⅲ期50例、Ⅳ期8例?；颊咝g(shù)前均未接受任何治療。另選同期體檢且年齡匹配的健康女性100例為對(duì)照組。本研究已獲我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均已簽署知情同意書。

1.2 SET8 基因3′UTR rs16917496位點(diǎn)SNP觀察 病例組患者術(shù)前、對(duì)照組患者體檢時(shí)抽取外周血3 mL，按照DNA提取試劑盒說明書操作提取基因組DNA，用分光光度計(jì)測(cè)算DNA的濃度及純度，取A260 nm/A280 nm為1.8～2.0的樣品用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。登陸NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/)查找SET8 基因 3′UTR rs16917496 位點(diǎn)的核苷酸序列，設(shè)計(jì) PCR 擴(kuò)增引物。上 游 引 物 為 ：5′-CCTGGTCAGTGGTCAGCAAAT-3′，下 游 引 物 為 ： 5′-CTGGGAAACACGCTCAAAATC-3′。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定PCR最佳反應(yīng)條件及反應(yīng)體系，反應(yīng)體系：Dream Taq Green Master Mix 12.5 μL，上游引物( 10 μmol/L) 1 μL, 下游引物( 10 μmol/L) 1 μL, DNA模板 2 μL, 無核酸水8.5 μL。反應(yīng)條件: 94 ℃、3 min, 94 ℃、30 s , 60 ℃、30 s , 72 ℃、40 s， 72 ℃、3 min。共38個(gè)循環(huán)。取5 μL PCR 產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，觀察有無清晰條帶，如有清晰條帶則可說明樣品成功擴(kuò)增，若無清晰條帶則更改PCR條件重新擴(kuò)增。將擴(kuò)增成功的 PCR 產(chǎn)物及上下游引物一起送往上海生工生物工程技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序，得到每例受檢者的基因型。

1.3 隨訪方法 病例組患者術(shù)后均采用電話隨訪3年，無失訪者。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件。病例組和對(duì)照組基因型和等位基因頻率比較采用χ2檢驗(yàn)和 Fisher 確切概率法。將病例組患者按基因型分為CC、CT、TT組，采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，并計(jì)算SET8基因3′非翻譯區(qū)rs16917496位點(diǎn)不同基因型患者3年生存率。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

病例組基因型CC型5例、CT型52例、TT型43例，等位基因C頻率31%、T頻率69%。對(duì)照組基因型CC型13例、CT型38例、TT型49例，等位基因C頻率32%、T頻率68%。兩組CC、CT基因型構(gòu)成比相比，P均<0.05；TT基因型構(gòu)成比相比，P>0.05；兩組 T、C等位基因頻率相比，P>0.05。

隨訪3年，病例組32例患者死亡。病例組CC、CT、TT基因型患者3年生存率分別為80%(4/5)、74.1%(40/54)、58.5%(24/41)，各基因型的患者3年生存率相比，P>0.05。

3 討論

卵巢癌是惡性程度最高的女性生殖系統(tǒng)腫瘤，根據(jù)2016年美國(guó)癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告，卵巢癌仍位居?jì)D科腫瘤死因首位[8]，由于早期診斷困難、高復(fù)發(fā)率以及復(fù)發(fā)性卵巢癌難以治療等原因，卵巢癌患者的預(yù)后很差，70%的晚期卵巢癌患者5年生存率不足30%[9]。而上皮性卵巢癌占卵巢癌的80%以上。目前，對(duì)于復(fù)發(fā)性卵巢癌患者仍缺乏有效的治療手段，治療目的主要在于盡量延長(zhǎng)無進(jìn)展生存期(PFS)，主要的治療方法仍是腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和化療。隨著腫瘤發(fā)病機(jī)制研究的逐步深入，分子靶向治療也不斷取得新的進(jìn)展。

miRNA是一類高度保守的小分子非編碼RNA，可作為癌基因或抑癌基因調(diào)節(jié)多種基因的表達(dá)[10]。最近的研究表明，SNP或突變的miRNA結(jié)合位點(diǎn)可能通過改變miRNAs的表達(dá)而影響腫瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)和結(jié)局[11]。Yu等[12]通過病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)了12個(gè)在人類多種腫瘤中等位基因頻率異常的miRNA 結(jié)合位點(diǎn)SNP，SET8基因 miR-502 結(jié)合位點(diǎn)就是其中之一。Yang等[13]通過研究發(fā)現(xiàn)，SET8基因3′UTR多態(tài)性位點(diǎn)rs16917496 T/T基因型提高了中國(guó)人群非小細(xì)胞性肺癌的發(fā)病率。Ding等[14]研究表明rs16917496多態(tài)性與小細(xì)胞型肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無相關(guān)性，但是，C/C+C/T基因型是小細(xì)胞型肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Song等[15 ]發(fā)現(xiàn)，SET8 C/C基因型能夠降低絕經(jīng)前婦女患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)，而C/C基因型和T/T基因型與絕經(jīng)后婦女患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)無明顯關(guān)聯(lián)，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，該多態(tài)位點(diǎn)通過調(diào)節(jié)SET8基因的表達(dá)從而導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)病。

本研究結(jié)果顯示兩組CC、CT基因型構(gòu)成比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明rs16917496位點(diǎn)基因型與上皮性卵巢癌患者的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。影響卵巢癌患者預(yù)后的因素非常復(fù)雜，臨床分期、組織學(xué)分級(jí)等均有可能影響患者的預(yù)后情況。本研究并未證實(shí)SET8基因3′端rs16917496位點(diǎn)SNP與卵巢癌患者的預(yù)后有關(guān)，可能的原因包括：①由于不同原因引起的癌癥和腫瘤發(fā)展過程的多樣性導(dǎo)致該SNP可能對(duì)不同類型的腫瘤具有不同的影響；②我們的研究也有一定的局限性，比如相對(duì)較小的樣本量和部分病例缺乏完整的家族史。要想更充分地評(píng)估基因變異與腫瘤預(yù)后之間的關(guān)系，需要更大規(guī)模和更深入的研究，以獲得更確鑿的數(shù)據(jù)。

雖然我們的研究尚不能證明SET8基因3 ′非翻譯區(qū)rs16917496位點(diǎn)SNP可作為卵巢癌預(yù)后的參考指標(biāo)，但是研究表明SNP與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有一定關(guān)聯(lián)，如果我們能夠更深入的研究以明確其發(fā)病機(jī)制，將會(huì)對(duì)高危人群的早期篩查及制定治療方案起著十分重要的作用。

[1] Xu J, Yin Z, Gao W, et al. A polymorphism at the miR-502 binding site in the 3′ untranslated region of the SET8 gene is associated with the outcome of small-cell lung cancer[J]. PLoS One, 2013, 8(10):77024.

[2] Mohammad H, Maryam SN, Majid N, et al. Association of functional polymorphism at the miR-502-binding site in the 3′untranslated region of the SETD8 gene with risk of childhood acute lymphoblastic leukemia, a preliminary report[J]. Tumor Biol, 2014, 35(10):10375-10379.

[3] Yang SD,Guo HY,Wei BJ, et al. Association of miR-502-binding site single nucleotide polymorphism in the 3′-untranslated region of SET8 and TP53 codon 72 polymorphism with non-small cell lung cancer in Chinese population[J]. Acta Biochim Biophys Sin,2014, 46(2): 149-154.

[4] Diao L,Su H,Wei G,et al. Prognostic value of microRNA 502 binding site SNP in the 3′-untranslated region of the SET8 gene in patients with non-Hodgkin′s lymphoma[J]. Tumori, 2014,100(5):553-558.

[5] Hashemi M, Sheybani-Nasab M, Naderi M, et al. Association of functional polymorphism at the miR-502-binding site in the 3′ untranslated region of the SETD8 gene with risk of childhood acute lymphoblastic leukemia, a preliminary report[J]. Tumour Biol,2014,35(10):10375-10379.

[6] Guo Z, Wu C, Wang X, et al. A polymorphism at the miR-502 binding site in the 3′-untranslated region of the histone methyltransferase SET8 is associated with hepatocellular carcinoma outcome[J]. Int J Cancer, 2012, 131(6):1318-1322.

[7] Song F, Zheng H, Liu B, et al. An miR-502 Binding Site Single-Nucleotide Polymorphism in the 3′-Untranslated Region of the SET8 Gene is Associated with Early Age of Breast Cancer Onset[J]. Clin Cancer Res, 2009, 15(19):6292-6300.

[8] Siegel RL，Miller KD，Jemal A. Cancer statistics, 2016 [J]. CA Cancer J Clin， 2016，66(1)：7-30.

[9] Liliac L,Amalinei C,Balan R, et al. Ovarian cancer: insights into genetics and pathogeny[J]. Histol Histopathol, 2012,27(6): 707-719.

[10] Ohyashiki JH, Umezu T, Kobayashi C, et al. Impact on cell to plasma ratio of miR-92a in patients with acute leukemia: in vivo assessment of cell to plasma ratio of miR-92a[J]. BMC Res Notes, 2010,3:347.

[11] Xu J, Yin Z, Gao W, et al. Genetic variation in a microRNA-502 minding site in SET8 gene confers clinical outcome of non-small cell lung cancer in a Chinese population[J]. PLoS One,2013,8(10):77024.

[12]Yu Z, Li Z, Jolicoeur N, et al. Aberrant allele frequencies of the SNPs located in microRNA target sites are potentially associated with human cancers[J]. Nucleic Acids Res, 2007,35(13):4535-4541.

[13] Yang S, Guo H, Wei B, et al. Association of miR-502-binding site single nucleotide polymorphism in the 3′-untranslated region of SET8 and TP53 codon 72 polymorphism with non-small cell lung cancer in Chinese population[J]. Acta Biochim Biophys Sin, 2014,46(2):149-154.

[14] Ding C, Li R, Peng J, et al. A polymorphism at the miR-502-binding site in the 3′untranslated region of the SET8 gene is associated with the outcome of small-cell lung cancer[J]. Exp Ther Med, 2012,24(3):689-692.

[15] Song F, Zheng H, Liu B, et al. An mir-502-binding site single-nucleotide polymorphism in the 3′-untranslated region of the SET8 gene is associated with early age of breast cancer onset[J]. Clin Cancer Res, 2009,15(19):6292-6300.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.39.015

R711.75

B

1002-266X(2017)39-0051-03

河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院科學(xué)研究基金(2h2201616)。

史淑紅(E-mail：sshh3095@162.com)

2017-04-20)