豬偽狂犬病的防控

張穎 王金穎/天津市動物疫病預防控制中心

豬偽狂犬病的防控

張穎 王金穎/天津市動物疫病預防控制中心

豬偽狂犬病（Pseudorabies，PR）又稱Aujeszky氏病，是由豬偽狂犬病毒引起的豬、牛、羊等多種家畜和野生動物以發(fā)熱、奇癢（除豬以外）及腦脊髓炎為主要癥狀的一種急性傳染病，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經濟損失。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。

在我國，1947年劉永純首次報道偽狂犬病例以來，目前已擴大到全國20多個省市，并呈暴發(fā)流行，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經濟損失。據報道，2006年我國豬“無名高熱”（高致病性藍耳?。┮才c偽狂犬病緊密相關。

一、病原學

由于PRV蛋白序列與牛皰疹病毒、馬皰疹病毒、水痘病毒同源性很高，因而歸屬于皰疹病毒科甲皰疹病毒亞科。

PRV具有皰疹病毒的典型結構，呈球形或橢球形，直徑介于150～180 nm之間，有囊膜，囊膜表面由長約8～10 nm呈放射狀的纖突。

PRV只有一種血清型，但不同毒株在毒力和生物學特性等方面存在差異。PRV基因組為線狀雙鏈DNA，由長獨特區(qū)（Unique long region，UL）、短獨特區(qū)（Unique short region，US）以及位于US兩側的末端重復序列（Terminal repeat，TR）與內部重復序列（Internal repeat，IR）組成。對PRV基因組序列測定發(fā)現由72個閱讀框組成，可編碼70種蛋白，目前已發(fā)現和命名的有gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM、gN 11種糖蛋白。編碼gC、gE、gG、gI、gM、和gN的基因為病毒復制非必需的，gB、gC、gD、gE和gI與病毒的毒力有關。此外，胸苷激酶（Thymidine kinase，TK）、核苷酸還原酶（Ribonucleotide reductase，RR）、蛋白激酶（Protein kinase，PK）、堿性核酸外切酶（Alkaline exonuclease，AN）和脫氧尿苷三磷酸激酶（Deoxyuridine triphosphokinase，dUTPase）等幾種酶也與病毒的毒力密切相關，其中TK是PRV最主要的毒力基因，其作用是可催化脫氧胸腺嘧啶核苷磷酸化成dIMP，并進一步磷酸化為dTTP，成為DNA分子的基本成分。糖蛋白gB、gC、gD在免疫方面最為重要。PR尚沒有特效的治療方法，疫苗接種則是防制乃至根除該病的主要手段之一。

二、流行病學

PRV可引起豬、牛、羊、犬、貓、兔、鼠等多種動物發(fā)病，其中豬和鼠類是自然界中病毒的主要貯存宿主。該病毒可通過空氣傳播，健康豬與病豬、帶毒豬直接接觸可感染本?。晃廴镜娘暳?、飲水、乳汁、帶毒的鼠等通過消化道可傳播本病；通過配種接觸污染的陰道粘膜和精液進行傳播；感染PR的母豬通過胎盤垂直傳播給胎兒，由于母豬免疫球蛋白不能通過胎盤屏障，所以PRV對胎兒的感染性是致命的。

當前臨床上多見豬偽狂犬病與圓環(huán)病毒、藍耳病病毒、豬瘟病毒、流感病毒及流行性腹瀉病毒等混合感染，使病情更加復雜，增大了發(fā)病率和死亡率，且多發(fā)生于免疫過PR疫苗的豬群，據陳煥春院士分析，這是由于PRV的抗原性發(fā)生重大變異且沒有出現毒力增強，現用的疫苗免疫不能產生足夠交叉保護，使得免疫的豬群中出現流產、弱仔或產下仔豬出現神經癥狀后死亡等癥狀。

三、臨床癥狀

PR的臨診表現主要取決于感染病毒的毒力、感染量、感染途徑、豬只的年齡及動物的免疫情況，以幼齡豬的病情最嚴重。

新生仔豬感染PRV后，通常表現出口吐白沫、角弓反張等不同的神經癥狀，嗜睡、鳴叫、嘔吐、拉稀，1～2 d內死亡，發(fā)病率和死亡率可達到100%。

斷奶仔豬臨床癥狀與新生仔豬相似，發(fā)熱（41℃～42℃），精神倦怠，厭食，一般都會出現呼吸道癥狀，易并發(fā)細菌感染，當出現中樞神經癥狀時，易發(fā)生死亡，死亡率可達50%。

生長豬、育肥豬、成年母豬、公豬PR最常見為呼吸道癥狀。懷孕的母豬無論是頭胎還是經產都發(fā)病，并通過胎盤屏障感染胎兒，發(fā)生流產、產木乃伊胎兒或死胎。另外，PR會引起種豬不育癥，母豬配不上種，返情率高，公豬睪丸腫脹、萎縮，喪失種用能力。據近年來的報道，以往在豬罕見的奇癢癥狀，目前常可看到。

四、病理變化

PRV感染一般無特征性病變，可見上呼吸道黏膜、扁桃體出血、水腫，肺水腫并有散在性小葉性壞死、出血，肺炎等。肝、脾等實質臟器?？梢娀野咨珘乃啦≡睿改c粘膜呈卡他性或出血性炎癥，中樞神經系統癥狀明顯時，可見腦膜明顯充血，腦脊髓液增多。

五、診斷

PR僅根據臨床癥狀及流行病學特點很難做出診斷，確診需借助實驗室診斷技術。目前，常用的方法有病毒分離、免疫熒光抗體試驗、血清中和試驗、酶聯免疫吸附試驗、核酸探針技術、聚合酶鏈式反應技術等。

（一）病毒分離鑒定

病毒的分離是診斷PR的“黃金標準”，以腦組織、扁桃體含毒量最高，將分離到的病毒用標準陽性血清做中和試驗以確診本病。

（二）血清學試驗

應用最廣泛的有中和試驗、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、乳膠凝集試驗(LAT)、間接免疫熒光技術等。其中，中和試驗作為病毒檢測的經典方法，特異性、敏感性最好，是世界上多數國家檢測PR的法定方法之一，并被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為法定的診斷方法，但由于技術條件高、時間長，難以在臨床應用，而ELISA不但具有中和試驗的優(yōu)點外，3～4 h可出試驗結果，敏感度高于中和試驗，豬偽狂犬gE抗體ELISA試劑盒為PR的根除創(chuàng)造了條件，豬群血清gE抗體的監(jiān)測成為免疫-根除計劃有效的手段，另外該抗體的檢測可用于評價豬群中PR野毒感染程度，從而有利于對該病的防控。乳膠凝集試驗簡單快速、敏感性高、特異性強，適合于基層現場檢測和大面積普查，其檢測結果與中和試驗無顯著差異。美國已經有商品化的LAT試劑盒供臨床使用，我國華中農大也于國內率先研制成功LAT試劑盒。

（三）分子生物學診斷

1.聚合酶鏈式反應（PCR）。PCR在病毒診斷中的優(yōu)勢在于其速度快，1d內完成初步診斷，但因為PCR的特異性，很多環(huán)節(jié)需要謹慎操作，以免樣品污染了外源DNA。

2.核酸探針技術。DNA探針特異性強、敏感性高，廣泛用于PR的診斷。該技術即可檢測血清學陽性的病料，也可檢測呈潛伏感染狀態(tài)的病毒DNA。

六、防控

（一）疫苗預防

目前，國內已研制成功豬偽狂犬病的常規(guī)弱毒疫苗、滅活疫苗、基因缺失弱毒疫苗等。其中基因缺失疫苗已在生產中發(fā)揮重要作用，注射基因缺失疫苗后，動物不產生針對缺失蛋白的抗體，因而可應用相應缺失蛋白建立的血清學方法將野毒感染與基因缺失疫苗免疫后豬群產生的抗體區(qū)分開來，這也是實施偽狂犬病根除計劃的重要措施之一。在美國和歐洲一些發(fā)達國家的PR根除計劃中，此類疫苗功不可沒。

1.滅活疫苗。安全性高，無散毒及潛伏感染危險，但滅活疫苗不能將內源性蛋白抗原提呈給免疫系統，因而不能誘導細胞毒T細胞反應，且免疫劑量大，偶爾出現過敏反應，故在當前防治中起輔助性預防作用。

2.自然基因缺失弱毒疫苗。目前使用較多的是Bartha、Buk毒株。Bartha株是1961年匈牙利學者Bartha分離，通過雞胚細胞傳代使強毒株丟失很多基因片段而致弱，但由于毒力基因TK沒有缺失，存在毒力返強的危險，另外，該毒株自牛分離而來，對豬的免疫原性差。BUK株是將Bucharest株通過雞胚成纖維細胞繼代培養(yǎng)800代以上獲得，經分析，該毒株在US區(qū)的gE基因缺失。由于弱毒疫苗存在毒力返強的危險，會導致疾病的流行，且沒有充分致弱或過度致弱的疫苗株不僅不能誘導足夠的免疫保護反應，反而可能引起疾病或免疫抑制。因此，使用受限。

3.基因工程疫苗。利用基因工程方法缺失PRV的主要毒力基因——胸苷激酶（TK）和與病毒增殖無關的糖蛋白基因gE或gG而得，缺失TK使得本病的毒力、潛伏感染的能力和返強的可能性大大降低，較為安全，但TK基因屬于酶蛋白基因，不能產生相應的抗體，因此不能利用血清學將疫苗毒和感染野毒區(qū)分開來，鑒于此，在缺失TK基因的基礎上又缺失了相應的糖蛋白或插入一個報告基因，使所得到的突變株不能產生被缺失的糖蛋白，免疫動物就不能產生相應的抗體，并可利用血清學將疫苗毒和感染野毒區(qū)分開來，從而建立健康豬群，為以后根除和消滅本病打好基礎。華中農大研制的豬偽狂犬病毒鄂A株TK-/gE-和TK-/gG-兩種雙基因缺失疫苗和相應的鑒別診斷試劑，已廣泛用于生產，該疫苗是國內最早應用的PR基因缺失疫苗，可誘導全面的體液和細胞免疫反應，安全性好，保護率高。

4.亞單位疫苗。在已發(fā)現的11種糖蛋白中，gB、gC、gD均能誘導機體產生中和抗體，因此該三種糖蛋白是研制PRV亞單位疫苗的首選蛋白。該疫苗安全性高，不含任何病原微生物，接種后不會發(fā)生急性、持續(xù)或潛伏感染，并可將產生的免疫應答與野毒感染所產生的應答區(qū)分。但由于產品開發(fā)費用高，免疫原性差，難以推廣。

5.核酸疫苗。核酸疫苗既能誘導體液免疫，又可產生細胞免疫，并能有效誘導專一性T殺傷細胞的能力且沒有副作用，具有較大的開發(fā)潛力。

6.載體重組疫苗。由于PRV基因組較大，可供外源基因插入或替代的非必需基因較多，因此，可制備成多價活疫苗，大大減少了疫苗注射對豬只的刺激。

在我國，陳煥春等曾提出我國的偽狂犬病根除計劃，根據國情，種豬建議使用gE基因缺失滅活疫苗，育肥用的仔豬和架子豬可以使用雙基因缺失的弱毒疫苗，具有明顯的預防效果。

（二）加強飼養(yǎng)管理

提高飼養(yǎng)管理水平，搞好環(huán)境衛(wèi)生，實施全進全出，并積極開展防鼠滅鼠工作。

（三）加強檢驗檢疫

PR在我國之所以廣泛流行，危害巨大，與種豬頻繁交換有直接關系，必須嚴把豬場引種關，嚴禁從疫區(qū)引種，提倡自繁自養(yǎng)。

（略）