犬晶狀體超聲乳化術(shù)對術(shù)眼及其角膜內(nèi)皮組織學(xué)的影響

廖天利，張葉楓

（1.重慶市黔江區(qū)畜牧獸醫(yī)局，重慶 黔江 409000；2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌 402460）

犬晶狀體超聲乳化術(shù)對術(shù)眼及其角膜內(nèi)皮組織學(xué)的影響

廖天利1，張葉楓2

（1.重慶市黔江區(qū)畜牧獸醫(yī)局，重慶 黔江 409000；2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌 402460）

本試驗通過對健康的試驗犬實施晶狀體超聲乳化術(shù)，然后制作術(shù)眼角膜切片，觀察該手術(shù)對犬眼角膜內(nèi)皮組織學(xué)的影響。結(jié)果表明，超聲乳化術(shù)后犬只恢復(fù)情況良好，術(shù)眼在一周內(nèi)痊愈；術(shù)后7d角膜內(nèi)皮層變形，呈波浪狀，有些出現(xiàn)斷裂、脫落，內(nèi)皮細胞空泡化；術(shù)后14d角膜內(nèi)皮細胞空泡化更明顯，甚至角膜內(nèi)皮層連同后彈力層一同丟失，基質(zhì)層變形、脫出。

犬；超聲乳化術(shù)；角膜內(nèi)皮；病理切片

有研究表明[1]，犬發(fā)生白內(nèi)障的幾率大于人，對于犬白內(nèi)障治療的研究大體分為藥物治療和手術(shù)治療。超聲乳化術(shù)是目前最先進的手術(shù)治療方式，但手術(shù)過程中對角膜內(nèi)皮造成損傷是該手術(shù)最大的缺點。本試驗通過實驗造模，了解超聲乳化術(shù)后術(shù)眼的恢復(fù)情況及角膜內(nèi)皮的組織學(xué)變化，評估該手術(shù)對角膜內(nèi)皮的影響。

1 材料與方法

1.1 藥品與儀器

1.1.1 手術(shù)用 5%托吡卡胺滴眼液（美多麗）、速眠新（846合劑）、鹽酸奧布卡因滴眼液、利多卡因、卡米可因、慶大霉素等。

1.1.2 染色用 10%中性福爾馬林、二甲苯、1%蘇木素、0.5%伊紅、酒精、1%氨水、中性樹膠。

1.1.3 主要儀器 雙目手術(shù)顯微鏡、裂隙燈、尼龍5-0和10-0眼科無損傷縫線、眼科顯微手術(shù)器械一套、低溫切片機、光學(xué)顯微鏡、高溫高壓滅菌鍋、冰箱。

1.2 試驗方法

1.2.1 動物選擇與分組 選擇體重相當（4～5kg）、體質(zhì)健康均勻、4～5月齡、眼無任何疾病史的本地犬24只，雌雄不限。在相同飼養(yǎng)條件下隔離喂養(yǎng)一周后，未發(fā)現(xiàn)問題的隨機分為兩組：第一組為試驗組（12只犬），均對其左眼進行超聲乳化術(shù)；第二組（12只犬）為空白對照組，不進行超聲乳化術(shù)。

1.2.2 手術(shù)參數(shù)設(shè)定 根據(jù)目前手術(shù)儀器的條件，參照臨床上犬超聲乳化手術(shù)常用的參數(shù)設(shè)定，同時考慮到手術(shù)眼為健康眼，本試驗采用冷超聲乳化技術(shù)，設(shè)超乳能量為40%，乳化抽吸負壓為170mmHg，抽吸速率為27cc/min，每次乳化時間在42.0～78.0s之間，平均時間為54.4s。

1.2.3 超聲乳化術(shù)實施 手術(shù)當日禁食12h，手術(shù)前1h對犬的手術(shù)眼用5%托吡卡胺散瞳，術(shù)前30min用硫酸阿托品0.04mg/kg皮下注射，丙泊酚0.6mL/kg靜脈注射誘導(dǎo)麻醉，然后氣管插管，全程采用吸入麻醉。手術(shù)過程如下：

（1）顯露術(shù)野：開瞼器充分開瞼。（2）角鞏膜緣切口：在眼球12點方向，距角鞏膜緣后方0.5～1.0mm處，用穿刺刀進入前房，寬度為3.0～3.2mm。（3）連續(xù)環(huán)形撕囊術(shù)：向前房內(nèi)注入粘彈劑后，用撕囊鑷形成一個翹起的囊瓣，以其游離部的頂端為著力點，沿時鐘軌跡做逆時針牽引，依次撕開前囊膜。（4）晶狀體的水分離：在撕囊邊緣的前囊下，注入灌注液，使晶狀體與周圍皮質(zhì)完全分離。（5）側(cè)切口：沿虹膜平行方向，用直頭穿刺刀做前房穿刺。（6）囊袋內(nèi)雙手超聲乳化術(shù)：采用冷超乳技術(shù)，先將踏板踩至1檔（灌注），當針頭接觸到晶狀體核時，逐漸將踏板踩至2檔（抽吸）和3檔（乳化）進行超聲乳化。（7）抽吸皮質(zhì)：進入灌注/抽吸模式，將I/A針頭移向囊袋中央牽引皮質(zhì)，使其附著在后囊上的部位脫離赤道部。重復(fù)以上操作直至皮質(zhì)完全清除。（8）徹底抽吸出囊袋和前房內(nèi)的粘彈劑。（9）縫合切口，沖洗術(shù)眼，涂上紅霉素眼膏。

1.2.4 術(shù)后護理 術(shù)后將犬只單獨飼養(yǎng)于犬籠中，為防止它舔舐、抓咬術(shù)眼，要佩戴伊麗莎白圈。術(shù)后一周內(nèi)每天涂紅霉素眼膏，并自術(shù)后1～7d，每日進行裂隙燈檢查，觀察角膜水腫情況、瞳孔形狀、前房深度、前房炎癥情況、囊膜有無撕裂、后囊膜有無破裂等。每日多次檢查術(shù)眼情況，及時清理眼分泌物。

對手術(shù)失敗的試驗犬予以淘汰，并及時進行補充試驗。日糧中盡量避免添加刺激性較大的原材料，飼養(yǎng)房間禁止非試驗人員進入，防止刺激導(dǎo)致試驗犬過度吠叫引起眼壓升高，縫線崩斷。

1.2.5 病理切片制作

1.2.5.1 制片 （1）取材：分別于術(shù)后第 7、14 d（每個時間點2只犬），取犬術(shù)眼；對照組2只犬分別取左眼。（2）固定：10%福爾馬林溶液浸泡24h，剪下完整角膜，切成寬度為1～2mm的小段。（3）沖洗：用蒸餾水徹底沖洗干凈。（4）脫水：分別在50%、70%、80%、90%、95%的乙醇溶液中進行梯度脫水，每個濃度梯度的脫水時間為1h，然后在無水乙醇中脫水兩次，每次0.5h。（5）透明與透蠟：先用二甲苯和酒精（1∶1）的混合液在室溫下處理0.5h，再用二甲苯浸透3次，每次為5min；然后在62～65℃恒溫箱中透蠟，先是用甲苯和蠟（1∶1）的混合液處理0.5h，再以純蠟處理3次，每次0.5h。（6）包埋：將包埋組織塊置入熔化的蠟液中，待包埋組織的蠟?zāi)Y(jié)成塊后將蠟塊修成梯形，再將其固著于木質(zhì)蠟頭上。（7）切片：用4%的蛋白甘油溶液浸潤載玻片，再將載玻片在干燥箱中烘干備用；蠟塊切片厚度為8～10μm，將蠟帶放在預(yù)先處理的載玻片上，再將其平放入65℃烘箱中熔化、展片，10min后組織就能自然展開并貼在載玻片上。（8）粘片：被片上涂一層粘貼劑，加一滴水，切取蠟帶，燙手后烘干。

1.2.5.2 染色 （1）脫蠟：將切片以20°傾斜放入染缸中脫蠟，程序為二甲苯I 5 min、二甲苯II 5 min，無水乙醇2 min、95%乙醇 1 min、90%乙醇 1 min、80%乙醇1min、75%乙醇 1min，蒸餾水沖洗 1min。（2）染色與脫水：蘇木素染色5～10min后用蒸餾水沖洗2次，每次0.5min；染色后脫水：70%乙醇2min、80%乙醇2 min、90%乙醇2min，脫水后再用伊紅染色2min，之后繼續(xù)脫水：95%乙醇2min、無水乙醇2min，二甲苯I 2min、二甲苯II 2min，最后用中性樹脂封閉。

2 試驗結(jié)果

2.1 超聲乳化術(shù)后術(shù)眼恢復(fù)情況 術(shù)后1～7d，每天用裂隙燈檢測術(shù)眼的恢復(fù)情況。正常犬的眼角膜透明純凈，眼底清澈，無混濁現(xiàn)象。術(shù)后第1～2d，幾乎所有術(shù)眼的角膜均陸續(xù)出現(xiàn)灰色或灰白色的混濁和水腫，表面有血管生長，切口處輕微睫狀充血；術(shù)后第3d，角膜水腫逐漸消退，隨著傷口愈合，血管痕跡淡化，睫狀充血減輕，混濁狀況有所改善；術(shù)后第5d，角膜混濁消退，切口愈合良好，血管痕跡殘留，充血減輕；術(shù)后第7d，術(shù)眼愈后良好，已無明顯手術(shù)反應(yīng)。

2.2 犬角膜內(nèi)皮的組織學(xué)觀察 正常情況下犬眼角膜內(nèi)皮層平滑完整，細胞排列整齊緊密。術(shù)后7d，觀察到角膜內(nèi)皮層變形，呈波浪狀，表面變得粗糙不平，內(nèi)皮細胞空泡化，有些角膜內(nèi)皮層與后彈力層出現(xiàn)斷裂，角膜內(nèi)皮層脫落。術(shù)后14d，角膜內(nèi)皮細胞空泡化更加明顯，甚至角膜內(nèi)皮層丟失，或角膜內(nèi)皮層連同后彈力層一同丟失，基質(zhì)層變形、脫出。

3 分析與討論

3.1 術(shù)眼超聲乳化術(shù)模型的建立及術(shù)眼的恢復(fù)情況 超聲乳化術(shù)是近年來治療白內(nèi)障的有效手術(shù)方法之一，應(yīng)用超聲波將晶狀體核粉碎，使其呈乳糜狀，然后連同皮質(zhì)一起吸出，同時也可植入人工晶狀體[1-2]。自1967年由Kelman等發(fā)明以來，該手術(shù)以組織損傷小、切口愈合快、術(shù)后散光小及視力恢復(fù)快等優(yōu)點成為當前白內(nèi)障手術(shù)的主流方式[3]。

有研究認為，超聲乳化術(shù)中使用的能量大小、超乳時間的長短直接影響術(shù)后角膜內(nèi)皮細胞的恢復(fù)情況，能量越高、時間越長，對角膜內(nèi)皮的影響就越嚴重。近年來“冷超聲乳化”技術(shù)的問世，大大降低了術(shù)中超聲能量及浪涌現(xiàn)象，從而減輕對角膜內(nèi)皮細胞的損傷[4]。低能量脈沖式超聲乳化降低了超聲乳化針頭產(chǎn)生的熱量，術(shù)中超聲乳化針頭產(chǎn)生的溫度僅在20～34℃之間，在機體正常溫度（37℃）以下，所以不會對切口及角膜組織產(chǎn)生灼傷熱量，相對于普通超聲乳化儀更安全。有研究表明，3.5mm角鞏膜緣切口對角膜內(nèi)皮的損傷要小于5mm切口。本次手術(shù)采用角鞏膜緣切口，切口寬度為3.0～3.2mm，如果切口過小，則超聲乳化針頭無法進入前房，或灌注液不能順利流出而導(dǎo)致角膜灼傷。

3.2 犬角膜內(nèi)皮的組織學(xué)變化 角膜內(nèi)皮層是角膜與前房水相接觸的分界線，鏡下呈直線形，由單層扁平的六邊形細胞構(gòu)成，大小均等、緊密鑲嵌、排列整齊[5-6]。術(shù)后暫時的角膜水腫，表明角膜內(nèi)皮細胞泵功能受損，是超聲或機械損傷的結(jié)果。內(nèi)皮細胞遭到破壞后，傷口緣的后彈力層收縮并向基質(zhì)層卷曲，在數(shù)小時內(nèi)，傷口周圍的內(nèi)皮細胞向傷口區(qū)遷移，通過細胞面積增大和重組，重建完整的內(nèi)皮單層結(jié)構(gòu)[7]。

超聲乳化術(shù)的切口、灌注液的沖刷、超聲能量的釋放、劈核的方式、機械因素（如超聲乳化術(shù)中乳化針頭和器械不斷進出前房）以及手術(shù)過程中產(chǎn)生的核碎屑和氣泡等，不可避免地會對角膜內(nèi)皮產(chǎn)生損傷。但是角膜內(nèi)皮層的變化并不是均一的，損傷程度也并不相同，如硬核會造成超聲乳化能量較高，乳化時間長，角膜內(nèi)皮質(zhì)、細胞間容易存在空泡，角膜內(nèi)皮細胞容易發(fā)生水腫[8-9]。

本試驗觀察到術(shù)后7d角膜內(nèi)皮層變形，呈波浪狀，表面變得粗糙，內(nèi)皮細胞空泡化，有些出現(xiàn)斷裂、脫落，這是角膜內(nèi)皮受到損傷、功能失調(diào)所致；術(shù)后14d時，角膜內(nèi)皮的損傷加重，角膜內(nèi)皮丟失，基質(zhì)層甚至變形、脫落，可能是因為角膜內(nèi)皮受損失代償造成的。

4 結(jié)論

本試驗采用角鞏膜緣切口，切口寬度為3.0～3.2mm，設(shè)置超乳能量為40%，乳化抽吸負壓為170mmHg，抽吸速率為27cc/min，每次乳化時間在42.0～78.0s之間，平均時間為54.4s。在此參數(shù)條件下對健康試驗犬施行冷超乳技術(shù)，在囊袋內(nèi)進行超聲乳化。術(shù)后犬只精神和飲食狀況與術(shù)前無明顯差異，術(shù)眼在一周內(nèi)痊愈，恢復(fù)情況良好。超聲乳化術(shù)使角膜內(nèi)皮結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可能與角膜內(nèi)皮失代償發(fā)生有關(guān)。

（致謝：本文在西南大學(xué)鄭小波副教授悉心指導(dǎo)下完成，在此致以衷心的感謝?。?/p>

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Effect of Phacoemulsification on Dog's Eyes and Corneal Endothelium

Liao Tianli1，Zhang Yefeng2
（1.Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Qianjiang District，Chongqing Qianjiang 409000；2.Department of Veterinary Medicine，Rongchang Campus of Southwest University，Chongqing Rongchang 402460，China）

In order to evaluate the effect of phacoemulsification on dog′s corneal endothelium，this experiment operated phacoemulsification on healthy dogs，as well as made pathological sections of canine corneals.The results showed that dogs recovered well after phacoemulsification and the eyes also healed in one week，after 7 days，some corneal endotheliums became wavy shape，breakage or detached，and some corneal endothelial cells became vacuolization，post-operation 14 days，the vacuolization of corneal endothelial cells became more serious，even corneal endothelium with elastic layer lost together，and the stromal layer was out of shape and prolapsed.

Dog；Phacoemulsification；Corneal endothelium；Pathological section

S858.292.12

B

1001-8964（2017）10-0024-03

2017-06-20

廖天利（1975-），男，重慶榮昌人，碩士研究生，獸醫(yī)師，現(xiàn)從事動物疫病臨床與預(yù)防控制工作。