乙型肝炎病毒攜帶者血清MIF的表達與肝組織病理狀態(tài)相關(guān)性研究

付 軍，唐慶新，熊曉晴，曾衛(wèi)新，熊國榮，李 勇，徐 龍

(南昌市第九醫(yī)院肝病科,南昌 330002)

乙型肝炎病毒攜帶者血清MIF的表達與肝組織病理狀態(tài)相關(guān)性研究

付 軍，唐慶新，熊曉晴，曾衛(wèi)新，熊國榮，李 勇，徐 龍

(南昌市第九醫(yī)院肝病科,南昌 330002)

目的 探討乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者血清中巨噬細胞移動抑制因子(MIF)的表達與肝組織病理狀態(tài)相關(guān)性及其臨床意義。方法 選取住院并完成肝臟穿刺的HBV攜帶者65例，進行肝組織病理病變程度診斷、慢性肝炎的炎癥分級(GO—G4)和纖維化分期(S0—S4)；同時用ELISA法、基因擴增法分別檢測血清乙肝病毒標志物、HBV-DNA。用ELISA法測定血清MIF水平。結(jié)果 65例HBV攜帶者血清MIF水平為(19.352±23.710)ng·mL-1;肝臟病理炎癥分級G值為1.34±0.567；肝臟病理纖維化分級S值為1.51±0.868。直線相關(guān)分析結(jié)果顯示：HBV攜帶者血清MIF與肝臟病理炎癥分級G和纖維化分級S呈正相關(guān)(r分別為0.379、0.637，P分別為0.02、<0.01)。結(jié)論 MIF的高水平表達可能與HBV攜帶者炎癥慢性化和纖維化加重的發(fā)生相關(guān)，檢測其血清水平可作為評估HBV攜帶者肝臟病理病情嚴重程度的重要指標。

乙型肝炎病毒攜帶者；巨噬細胞移動抑制因子；肝組織病理；炎癥；纖維化

乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者可分為慢性HBV攜帶者和非活動性HBsAg攜帶者，兩者的血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)在1年內(nèi)連續(xù)隨訪3次以上均在正常范圍。90%HBV攜帶的患者會出現(xiàn)不同程度的炎性反應(yīng)和(或)纖維性病變。一般認為，HBV導致肝炎的發(fā)病機制與患者機體免疫狀態(tài)(特別是細胞免疫狀態(tài))有關(guān)，眾多細胞因子，如腫瘤壞死因子、IL-1、IL-6、巨噬細胞移動抑制因子(MIF)等均參與其中，導致肝細胞壞死，并發(fā)生不同程度的炎癥和纖維化改變。而MIF參與了多種炎癥性疾病的病理、生理過程，是許多炎性疾病發(fā)病機制中重要的介質(zhì)，涉及炎癥和自身免疫性疾病的發(fā)病機制，且MIF的高水平表達和疾病的嚴重性程度有相關(guān)性[1]。目前，MIF在HBV攜帶者病程中的研究尚不多見，本研究對HBV攜帶者血清中的MIF水平與肝組織病理狀態(tài)的關(guān)系進行探討，將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選擇2014年6月至2016年8月在南昌市第九醫(yī)院傳染科住院并完成肝臟穿刺的HBV攜帶者，共65例。其中男55例，女10例，年齡18～45(25.1±2.3)歲。納入標準：1)發(fā)現(xiàn)HBsAg陽性時間≥6個月；2)無慢性肝炎癥狀和體征，既往肝功能正常；3)肝臟穿刺病理檢查且血清HBsAg陽性；4)B超檢查示肝脾無明顯異常；5)患者對本研究知情同意，并簽訂“手術(shù)同意書”。剔除標準：1)有肝炎病史，或使用過核苷類藥物和干擾素抗病毒治療；2)有其他嗜肝病毒感染；3)有自身免疫性疾病；4)合并心、腦、腎等其他臟器疾?。?)吸毒、酗酒者；6)曾服用肝細胞損害藥物。

1.2 標本采集與檢測

常規(guī)檢測血小板，出、凝血時間和凝血酶原時間。在超聲定位下，應(yīng)用1 s穿刺針進行快速肝穿刺。標本長1.5～2.0 cm，包括至少3個匯管區(qū)，獲取的肝組織均用10%甲醛固定送檢。送病理室檢查，進行蘇木精-伊紅染色、網(wǎng)狀纖維染色、Masson染色、免疫組織化學和肝細胞HBV-DNA原位雜交，石蠟包埋切片。由高年資病理科醫(yī)師盲法閱片。病理診斷按2000年中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》的診斷標準，并進行慢性肝炎的炎癥分級(GO—G4)和纖維化分期(S0—S4)。

以非抗凝干燥無菌真空采血管取患者清晨空腹全血5 mL，置于4 ℃冰箱放置2～4 h，然后以1300×g離心5 min，取上清液2 mL分裝于EP管內(nèi)，標記后凍存于-20 ℃冰箱內(nèi)備用。用ELISA法、基因擴增法分別檢測血清乙肝病毒標志物、HBV-DNA。用ELISA法測定血清MIF水平，試劑盒是由美國Raybio公司生產(chǎn)，按說明書進行操作。

1.3 統(tǒng)計學方法

應(yīng)用SPSS19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，用Pearson做相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

65例HBV攜帶者血清MIF水平為(19.352±23.710)ng·mL-1;肝臟病理炎癥分級G值為1.34±0.567；肝臟病理纖維化分級S值為1.51±0.868。直線相關(guān)分析結(jié)果顯示：HBV攜帶者血清MIF與肝臟病理炎癥分級G和纖維化分級S呈正相關(guān)性(r分別為0.379、0.637，P分別為0.02、<0.01)。

3 討論

我國1～59歲一般人群中HBsAg攜帶率為7.18%，絕大部分是在嬰幼兒時期感染，其中80%會發(fā)展成為慢性HBV攜帶者[2]。慢性HBV感染的自然史演變復雜，HBV攜帶者屬于觀察對象，處于相對穩(wěn)定階段。經(jīng)肝臟病理檢查發(fā)現(xiàn)，HBV攜帶者并不是既往認為的“乙肝病毒健康攜帶”，有一部分HBV攜帶者的肝臟發(fā)生了不同程度的炎癥和纖維化改變[3-5]，甚至還可以進展到慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌[6-7]。HBV感染所引起的機體免疫病理反應(yīng)與眾多細胞因子有關(guān)，當機體免疫細胞被暴露于病原體及其產(chǎn)物或特異性抗原下，免疫細胞被激活并釋放炎癥前細胞因子[8]。MIF是由活化的免疫細胞(主要是T細胞和巨噬細胞)分泌的一種炎癥前細胞因子，是分子量為12 500的蛋白質(zhì)。在肝血竇內(nèi)，MIF可能抑制巨噬細胞游走和促使巨噬細胞聚集，并趨化和刺激T單核細胞、細胞、NK細胞、嗜酸性粒細胞等免疫細胞，促進某些細胞因子的表達，如腫瘤壞死因子、IL-1、IL-6等，對炎性反應(yīng)起到調(diào)控和擴大作用[9-10]。在HBV感染所致的肝臟病理改變的發(fā)病機制研究中，張卡等[11]發(fā)現(xiàn)MIF的早期生成可能與病毒復制有關(guān)，與肝功能無關(guān)。在肝纖維化的過程中，MIF可以誘導巨噬細胞分泌IL-8，IL-8可通過趨化炎癥細胞，刺激釋放大量的肌酸激酶而間接激活肝星狀細胞，影響肝纖維化的病理過程[12-14]。如果在非活動性HBsAg攜帶狀態(tài)，肝硬化已經(jīng)存在，盡管發(fā)展緩慢，但仍在繼續(xù)[15]，而MIF中和性抗體則對過度炎癥反應(yīng)具有顯著的保護作用[16]。

本研究分析HBV攜帶者外周血MIF與肝臟炎癥和纖維化程度的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)MIF水平與肝臟的G、S分級呈正相關(guān)(r分別為0.379、0.637)，提示HBV攜帶者MIF水平的變化與肝臟組織損害程度相關(guān)，亦與肝病的嚴重程度有關(guān)。由于肝活檢具有創(chuàng)傷性、標本誤差以及判讀誤差，患者也不愿意接受一次或多次的肝臟穿刺檢查，從而很難及時發(fā)現(xiàn)肝臟病理改變[17]。相較與肝組織活檢，血清MIF作為更簡便、更客觀、更有價值且非創(chuàng)傷性的血清學監(jiān)測指標，可提高對HBV攜帶者的早期診斷、早期干預能力，更準確地判斷病情，以期有效改善預后。

綜上所述，MIF可能在肝臟炎癥和纖維化發(fā)病過程中起重要作用，檢測血清MIF水平可作為HBV攜帶者肝臟組織出現(xiàn)病理改變早期診斷的重要指標。對MIF在HBV攜帶者肝臟病理改變過程中參與機制的深入研究，有利于探求治療慢性乙型肝炎和降低慢性乙肝發(fā)病率的新途徑。

[1] 施文娟,成軍.乙型肝炎相關(guān)性肝功能衰竭患者外周血中巨噬細胞移動抑制因子的表達及意義[J/OL].中華實驗和臨床感染病雜志:電子版,2014,8(6):777-780[2016-10-16].http://kns.cnki.net/kns/ViewPage/viewsave.aspx.

[2] 中華醫(yī)學會肝病學分會,中華醫(yī)學會感染病分會.慢性乙型肝炎防治指南：2010年版[J].臨床肝膽病雜志,2011,27(1):Ⅰ-Ⅻ.

[3] Kumar M,Sarin S K,Hissar S,et al.Virologic and histologic features of chronic hepatitis B virus-infected asymptomatic patients with persistently normal ALT[J].Gastroenterology，2008，134(5):1376-1384.

[4] 高杲,李丹,江紅,等.慢性乙型肝炎病毒攜帶者73例肝組織病理結(jié)果分析[J/OL].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版,2013,7(18):8475-8476[2016-09-29].http://kns.cnki.net/kns/ViewPage/viewsave.aspx.

[5] 李彩東,楊勇衛(wèi),李惠軍,等.慢性HBV攜帶者外周血巨噬細胞移動抑制因子、白細胞介素10和17水平的變化及其與臨床指標的相關(guān)性[J].臨床肝膽病雜志,2015,31(5):702-705.

[6] Fujiwara K,Yokosuka O,Ehata T,et al.The two diffefnt states of hepatitis virus DNA in asymptomatic carriers:Hbe-antigen-positive versus anti-HBe-positive asymptomatic carriers[J].Dig Dis Sci,1998,43(2):368-376.

[7] 任婷婷,徐光華,李春霞.非活動性HBsAg攜帶狀態(tài)的自然轉(zhuǎn)歸[J].肝臟,2014,19(1):71-73.

[8] 黃珊,何清,唐奇遠,等.91例非活動性HBsAg攜帶者肝組織病理特點的研究[J].中國病毒病雜志,2012,2(1):58-61.

[9] 劉馳華.慢性乙型重型肝炎患者血清MIF水平的檢測及臨床意義[J].中國實用醫(yī)藥,2012,7(28):66-67.

[10] 周紅燕,汪錚,陳錦,等.慢性乙型肝炎患者血清TNF-α及白細胞介素水平的變化研究[J].中國醫(yī)師進修雜志,2008,31(2c):48-49.

[11] 張卡,杜耀民,徐啟桓,等.巨噬細胞移動抑制因子與慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化的關(guān)系[J].中華傳染病雜志,2009,27(9):531-534.

[12] Sad L M,Younis S G,Nagi H M.Significance of macrophage migration inhibitory factor (MIF) and anti P53 antibodies in prognosis of hepatocellular carcinoma[J].J Mol Biomark Diagn,2014,5(5):1-6.

[13] Heinrichs D,Knauel M,Offermanns C,et al.Macrophagemigration inhibitory factor(MIF) exerts antifibrotic effects in experimental liver fibrosis via CD74[J].Proc Natl Acad Sci USA,2011,108(42):17444-17449.

[14] You J,Zhuang L,Chen H Y,et al.Increased serum levels of MIF,TGF-β and IL-17 correlate with severity of liver disease and viral replication in chronic HBV infection[J].Int J Infect Dis,2014,21(s 1):319-320.

[15] 蘇秋東,畢勝利.慢性乙型肝炎感染自然史[J].中華實驗和臨床病毒學雜志,2012,26(6):494-496.

[16] Lue H Q, Kleemann R,Calandra T，et al.Macrophage migration inhibitory factou(MIF):mechanisms of action and role in disense[J].Microbes Infection,2002,4(4):449-460.

[17] 劉瓊.血清膽堿酯酶、血小板、肝纖維化指標在HBV感染各階段的臨床意義[D].大連：大連醫(yī)科大學,2011.

(責任編輯：羅芳)

2016-11-09

南昌市科技支撐計劃項目-社會發(fā)展領(lǐng)域(洪科發(fā)計字[2013]203號13)

R512.62

A

1009-8194(2017)03-0011-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.03.004