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    乙型肝炎病毒攜帶者血清MIF的表達(dá)與肝組織病理狀態(tài)相關(guān)性研究

    2017-04-04 13:59:30唐慶新熊曉晴曾衛(wèi)新熊國(guó)榮
    實(shí)用臨床醫(yī)學(xué) 2017年3期
    關(guān)鍵詞:血清

    付 軍,唐慶新,熊曉晴,曾衛(wèi)新,熊國(guó)榮,李 勇,徐 龍

    (南昌市第九醫(yī)院肝病科,南昌 330002)

    乙型肝炎病毒攜帶者血清MIF的表達(dá)與肝組織病理狀態(tài)相關(guān)性研究

    付 軍,唐慶新,熊曉晴,曾衛(wèi)新,熊國(guó)榮,李 勇,徐 龍

    (南昌市第九醫(yī)院肝病科,南昌 330002)

    目的 探討乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者血清中巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)的表達(dá)與肝組織病理狀態(tài)相關(guān)性及其臨床意義。方法 選取住院并完成肝臟穿刺的HBV攜帶者65例,進(jìn)行肝組織病理病變程度診斷、慢性肝炎的炎癥分級(jí)(GO—G4)和纖維化分期(S0—S4);同時(shí)用ELISA法、基因擴(kuò)增法分別檢測(cè)血清乙肝病毒標(biāo)志物、HBV-DNA。用ELISA法測(cè)定血清MIF水平。結(jié)果 65例HBV攜帶者血清MIF水平為(19.352±23.710)ng·mL-1;肝臟病理炎癥分級(jí)G值為1.34±0.567;肝臟病理纖維化分級(jí)S值為1.51±0.868。直線相關(guān)分析結(jié)果顯示:HBV攜帶者血清MIF與肝臟病理炎癥分級(jí)G和纖維化分級(jí)S呈正相關(guān)(r分別為0.379、0.637,P分別為0.02、<0.01)。結(jié)論 MIF的高水平表達(dá)可能與HBV攜帶者炎癥慢性化和纖維化加重的發(fā)生相關(guān),檢測(cè)其血清水平可作為評(píng)估HBV攜帶者肝臟病理病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。

    乙型肝炎病毒攜帶者;巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子;肝組織病理;炎癥;纖維化

    乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者可分為慢性HBV攜帶者和非活動(dòng)性HBsAg攜帶者,兩者的血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)在1年內(nèi)連續(xù)隨訪3次以上均在正常范圍。90%HBV攜帶的患者會(huì)出現(xiàn)不同程度的炎性反應(yīng)和(或)纖維性病變。一般認(rèn)為,HBV導(dǎo)致肝炎的發(fā)病機(jī)制與患者機(jī)體免疫狀態(tài)(特別是細(xì)胞免疫狀態(tài))有關(guān),眾多細(xì)胞因子,如腫瘤壞死因子、IL-1、IL-6、巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)等均參與其中,導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死,并發(fā)生不同程度的炎癥和纖維化改變。而MIF參與了多種炎癥性疾病的病理、生理過(guò)程,是許多炎性疾病發(fā)病機(jī)制中重要的介質(zhì),涉及炎癥和自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制,且MIF的高水平表達(dá)和疾病的嚴(yán)重性程度有相關(guān)性[1]。目前,MIF在HBV攜帶者病程中的研究尚不多見,本研究對(duì)HBV攜帶者血清中的MIF水平與肝組織病理狀態(tài)的關(guān)系進(jìn)行探討,將結(jié)果報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1.1 研究對(duì)象

    選擇2014年6月至2016年8月在南昌市第九醫(yī)院傳染科住院并完成肝臟穿刺的HBV攜帶者,共65例。其中男55例,女10例,年齡18~45(25.1±2.3)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):1)發(fā)現(xiàn)HBsAg陽(yáng)性時(shí)間≥6個(gè)月;2)無(wú)慢性肝炎癥狀和體征,既往肝功能正常;3)肝臟穿刺病理檢查且血清HBsAg陽(yáng)性;4)B超檢查示肝脾無(wú)明顯異常;5)患者對(duì)本研究知情同意,并簽訂“手術(shù)同意書”。剔除標(biāo)準(zhǔn):1)有肝炎病史,或使用過(guò)核苷類藥物和干擾素抗病毒治療;2)有其他嗜肝病毒感染;3)有自身免疫性疾病;4)合并心、腦、腎等其他臟器疾病;5)吸毒、酗酒者;6)曾服用肝細(xì)胞損害藥物。

    1.2 標(biāo)本采集與檢測(cè)

    常規(guī)檢測(cè)血小板,出、凝血時(shí)間和凝血酶原時(shí)間。在超聲定位下,應(yīng)用1 s穿刺針進(jìn)行快速肝穿刺。標(biāo)本長(zhǎng)1.5~2.0 cm,包括至少3個(gè)匯管區(qū),獲取的肝組織均用10%甲醛固定送檢。送病理室檢查,進(jìn)行蘇木精-伊紅染色、網(wǎng)狀纖維染色、Masson染色、免疫組織化學(xué)和肝細(xì)胞HBV-DNA原位雜交,石蠟包埋切片。由高年資病理科醫(yī)師盲法閱片。病理診斷按2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》的診斷標(biāo)準(zhǔn),并進(jìn)行慢性肝炎的炎癥分級(jí)(GO—G4)和纖維化分期(S0—S4)。

    以非抗凝干燥無(wú)菌真空采血管取患者清晨空腹全血5 mL,置于4 ℃冰箱放置2~4 h,然后以1300×g離心5 min,取上清液2 mL分裝于EP管內(nèi),標(biāo)記后凍存于-20 ℃冰箱內(nèi)備用。用ELISA法、基因擴(kuò)增法分別檢測(cè)血清乙肝病毒標(biāo)志物、HBV-DNA。用ELISA法測(cè)定血清MIF水平,試劑盒是由美國(guó)Raybio公司生產(chǎn),按說(shuō)明書進(jìn)行操作。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,用Pearson做相關(guān)性分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    65例HBV攜帶者血清MIF水平為(19.352±23.710)ng·mL-1;肝臟病理炎癥分級(jí)G值為1.34±0.567;肝臟病理纖維化分級(jí)S值為1.51±0.868。直線相關(guān)分析結(jié)果顯示:HBV攜帶者血清MIF與肝臟病理炎癥分級(jí)G和纖維化分級(jí)S呈正相關(guān)性(r分別為0.379、0.637,P分別為0.02、<0.01)。

    3 討論

    我國(guó)1~59歲一般人群中HBsAg攜帶率為7.18%,絕大部分是在嬰幼兒時(shí)期感染,其中80%會(huì)發(fā)展成為慢性HBV攜帶者[2]。慢性HBV感染的自然史演變復(fù)雜,HBV攜帶者屬于觀察對(duì)象,處于相對(duì)穩(wěn)定階段。經(jīng)肝臟病理檢查發(fā)現(xiàn),HBV攜帶者并不是既往認(rèn)為的“乙肝病毒健康攜帶”,有一部分HBV攜帶者的肝臟發(fā)生了不同程度的炎癥和纖維化改變[3-5],甚至還可以進(jìn)展到慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌[6-7]。HBV感染所引起的機(jī)體免疫病理反應(yīng)與眾多細(xì)胞因子有關(guān),當(dāng)機(jī)體免疫細(xì)胞被暴露于病原體及其產(chǎn)物或特異性抗原下,免疫細(xì)胞被激活并釋放炎癥前細(xì)胞因子[8]。MIF是由活化的免疫細(xì)胞(主要是T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)分泌的一種炎癥前細(xì)胞因子,是分子量為12 500的蛋白質(zhì)。在肝血竇內(nèi),MIF可能抑制巨噬細(xì)胞游走和促使巨噬細(xì)胞聚集,并趨化和刺激T單核細(xì)胞、細(xì)胞、NK細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞,促進(jìn)某些細(xì)胞因子的表達(dá),如腫瘤壞死因子、IL-1、IL-6等,對(duì)炎性反應(yīng)起到調(diào)控和擴(kuò)大作用[9-10]。在HBV感染所致的肝臟病理改變的發(fā)病機(jī)制研究中,張卡等[11]發(fā)現(xiàn)MIF的早期生成可能與病毒復(fù)制有關(guān),與肝功能無(wú)關(guān)。在肝纖維化的過(guò)程中,MIF可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌IL-8,IL-8可通過(guò)趨化炎癥細(xì)胞,刺激釋放大量的肌酸激酶而間接激活肝星狀細(xì)胞,影響肝纖維化的病理過(guò)程[12-14]。如果在非活動(dòng)性HBsAg攜帶狀態(tài),肝硬化已經(jīng)存在,盡管發(fā)展緩慢,但仍在繼續(xù)[15],而MIF中和性抗體則對(duì)過(guò)度炎癥反應(yīng)具有顯著的保護(hù)作用[16]。

    本研究分析HBV攜帶者外周血MIF與肝臟炎癥和纖維化程度的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)MIF水平與肝臟的G、S分級(jí)呈正相關(guān)(r分別為0.379、0.637),提示HBV攜帶者M(jìn)IF水平的變化與肝臟組織損害程度相關(guān),亦與肝病的嚴(yán)重程度有關(guān)。由于肝活檢具有創(chuàng)傷性、標(biāo)本誤差以及判讀誤差,患者也不愿意接受一次或多次的肝臟穿刺檢查,從而很難及時(shí)發(fā)現(xiàn)肝臟病理改變[17]。相較與肝組織活檢,血清MIF作為更簡(jiǎn)便、更客觀、更有價(jià)值且非創(chuàng)傷性的血清學(xué)監(jiān)測(cè)指標(biāo),可提高對(duì)HBV攜帶者的早期診斷、早期干預(yù)能力,更準(zhǔn)確地判斷病情,以期有效改善預(yù)后。

    綜上所述,MIF可能在肝臟炎癥和纖維化發(fā)病過(guò)程中起重要作用,檢測(cè)血清MIF水平可作為HBV攜帶者肝臟組織出現(xiàn)病理改變?cè)缙谠\斷的重要指標(biāo)。對(duì)MIF在HBV攜帶者肝臟病理改變過(guò)程中參與機(jī)制的深入研究,有利于探求治療慢性乙型肝炎和降低慢性乙肝發(fā)病率的新途徑。

    [1] 施文娟,成軍.乙型肝炎相關(guān)性肝功能衰竭患者外周血中巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子的表達(dá)及意義[J/OL].中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志:電子版,2014,8(6):777-780[2016-10-16].http://kns.cnki.net/kns/ViewPage/viewsave.aspx.

    [2] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì),中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南:2010年版[J].臨床肝膽病雜志,2011,27(1):Ⅰ-Ⅻ.

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    (責(zé)任編輯:羅芳)

    2016-11-09

    南昌市科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目-社會(huì)發(fā)展領(lǐng)域(洪科發(fā)計(jì)字[2013]203號(hào)13)

    R512.62

    A

    1009-8194(2017)03-0011-02

    10.13764/j.cnki.lcsy.2017.03.004

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