基層獸醫(yī)檢測實(shí)驗(yàn)室血凝與血凝抑制試驗(yàn)的一些經(jīng)驗(yàn)

劉曉云 （山東省鄒平縣畜牧獸醫(yī)局 256200）

基層獸醫(yī)檢測實(shí)驗(yàn)室血凝與血凝抑制試驗(yàn)的一些經(jīng)驗(yàn)

劉曉云 （山東省鄒平縣畜牧獸醫(yī)局 256200）

近年來，基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室作為動(dòng)物疫病預(yù)防與控制工作的重要技術(shù)支撐，在動(dòng)物疫病預(yù)防控制，特別是重大動(dòng)物疫情預(yù)防控制工作中發(fā)揮著重要作用。血凝和血凝抑制試驗(yàn)是目前基層獸醫(yī)檢測實(shí)驗(yàn)室開展疫病診斷、流行病學(xué)調(diào)查、免疫程序制定及免疫效果監(jiān)測等的主要試驗(yàn)方法之一。在工作中常用于檢測禽流感，新城疫的免疫和非免疫抗體水平。

筆者根據(jù)自己在基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展血凝與血凝抑制試驗(yàn)時(shí)遇到的問題，總結(jié)了以下幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)。

1 雞紅細(xì)胞的采集制取工作

受條件所限，基層實(shí)驗(yàn)室中往往缺乏spf雞，在采集雞全血時(shí)可選擇健康公雞。翅靜脈采血及心臟采血皆可。洗紅細(xì)胞時(shí)，應(yīng)使用生理鹽水或pH為7.4的PBS液多洗滌幾次。每次洗滌離心完成后，應(yīng)用吸管吸取壓積紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞和上清洗滌液。更換洗滌液后應(yīng)搖勻沉淀在底部的紅細(xì)胞，防止多次離心后結(jié)塊。在離心及吸取液體時(shí)應(yīng)注意輕拿輕放，防止紅細(xì)胞破裂。制取完畢的1%紅細(xì)胞懸濁液應(yīng)放在4℃冰箱中保存，用時(shí)搖勻。保存時(shí)間不宜超過48h，防止溶血，干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2 實(shí)驗(yàn)過程中的振蕩搖勻

血凝與血凝抑制試驗(yàn)中需要三次對(duì)血凝板微量振蕩。第1次，血凝試驗(yàn)中加入紅細(xì)胞后振蕩，振蕩必須完全。第2次，待檢血清與4HAU病毒抗原混合，振蕩必須完全。第3次，是抗原抗體反應(yīng)完成后加入紅細(xì)胞，此時(shí)振蕩不可時(shí)間過長，容易導(dǎo)致抗原抗體結(jié)合物分離。在使用一次性塑料血凝板的時(shí)候，由于一次性塑料血凝板比較脆弱難以固定，振蕩過程中液滴容易飛濺出來?？墒褂檬滞凶∫淮涡运芰涎?，手背接觸微量振蕩器進(jìn)行振蕩搖勻。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定

根據(jù)國標(biāo)判定標(biāo)準(zhǔn)，在血凝試驗(yàn)中完全凝集1%紅細(xì)胞(無淚滴狀流淌)的最高抗原稀釋倍數(shù)作為終點(diǎn)。在實(shí)際試驗(yàn)中把握住完全凝集四個(gè)字非常重要。實(shí)驗(yàn)人員經(jīng)常有出現(xiàn)錯(cuò)讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果的情況。觀察凝集孔時(shí)候應(yīng)注意完全凝集的紅細(xì)胞均勻的平鋪在凝集孔底部。凝集孔中央無滑落的紅血球。45°角傾斜血凝板，無紅細(xì)胞淚滴狀流淌。

同樣在血凝抑制試驗(yàn)中完全抑制4HAU病毒抗原的最高血清稀釋倍數(shù)作為。觀察時(shí)應(yīng)對(duì)照未加入抗原的對(duì)照孔。45°傾斜96孔板，當(dāng)未加抗原對(duì)照孔紅細(xì)胞淚滴狀流淌觸及凝集孔的側(cè)壁時(shí)，觀察其他孔內(nèi)紅細(xì)胞淚滴狀流淌是否觸及側(cè)壁。只有同未加入抗原的對(duì)照孔流淌程度相同才可以判定為完全抑制4HAU病毒抗原。

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2017–02–21）