平菇菌株對褐斑病抗性的初步評價

盛春鴿 王延鋒 史 磊 潘春磊 王金賀 劉姿彤 張鵬 于海洋 董雪梅

（黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院，黑龍江牡丹江157041）

平菇在我國廣泛栽培，產(chǎn)量居于第一位，是我國出口創(chuàng)匯的主要食用菌之一[1，2]。細(xì)菌性褐斑病是平菇生產(chǎn)過程中重要病害之一，其發(fā)病快，傳播廣，一旦發(fā)病很難控制，造成平菇減產(chǎn)，商品性狀下降，菇農(nóng)經(jīng)濟(jì)效益蒙受嚴(yán)重?fù)p失。

細(xì)菌性褐斑病病原菌為托拉斯假單胞菌（Pseudomoms tolaasii），該病原菌只侵染食用菌子實體的表面組織，形成直徑l～4 mm的淺褐色或是深色壞死斑，嚴(yán)重情況下病斑遍及整個子實體表面，其感染深度一般不會超過2～3 mm[3]。輕微發(fā)病時幼菇菇體生長緩慢，隨著子實體的生長，病斑顏色不斷變深并逐漸集結(jié)成片，成熟時個別子實體畸形。嚴(yán)重發(fā)病會導(dǎo)致子實體發(fā)黏萎縮，散發(fā)出腐臭氣味。在潮濕條件下，子實體感染病原菌所形成的褐色病斑表面會有一薄層菌膿，當(dāng)斑點干燥后，菌蓋會發(fā)生開裂。細(xì)菌性褐斑病不僅發(fā)生在菇場內(nèi)正在生長的子實體上，采摘后的食用菌子實體在加工、包裝、運輸和銷售等過程中的褐變有時也與細(xì)菌性褐斑病有關(guān)[4，5]。

表1 供試平菇菌株及來源

研究以25個平菇菌株為供試材料，通過人工接種褐斑病病原菌，觀察統(tǒng)計接種后感染情況，對25個菌株的發(fā)病情況進(jìn)行觀察，通過病情指數(shù)的大小評價菌株的抗病程度，為日后褐斑病的研究和平菇抗性材料的選育奠定一定的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株供試菌株見表1。除平（新疆-阿勒泰）及美味側(cè)耳2為野生菌株分離保存外，其它菌株皆為常規(guī)栽培菌株。

1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)料配方LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，氯化鈉10 g，去離子水定容至1000 mL，121℃滅菌30 min，冷卻后用于培養(yǎng)托拉斯假單胞菌；栽培種培養(yǎng)料：木屑78%，麩皮10%，稻糠10%，石膏1%，石灰1%（水適量）。

1.3 試驗方法

1.3.1 病原菌菌懸液的制備和接種 將托拉斯假單胞菌劃線接種于LB培養(yǎng)基上，25℃恒溫培養(yǎng)48 h后，刮取純培養(yǎng)物溶于無菌水制備懸浮液，將菌懸液稀釋到OD450=0.7，病原菌的菌懸液要現(xiàn)配現(xiàn)用。待正常培養(yǎng)條件下的平菇子實體生長至半徑1～2 cm時，取制備好的菌懸液1 mL均勻涂抹于子實體表面。每個處理設(shè)3次重復(fù)，每個重復(fù)接種5個子實體。

1.3.2 發(fā)病情況觀察和病情指數(shù)統(tǒng)計 在預(yù)設(shè)環(huán)境中培養(yǎng)24 h后，觀察褐斑病發(fā)病情況，依據(jù)子實體病變程度將病情賦值0～6，0代表無任何病變。用病情指數(shù)來表征病變程度：病情指數(shù)=Σ（各病級的子實體個數(shù)×病級值）/（調(diào)查總個數(shù)×最高級值）×100，根據(jù)公式計算病情指數(shù)，病情指數(shù)越大代表病變越嚴(yán)重。

2 結(jié)果與分析

2.1 病級值分級根據(jù)接種后病斑的顏色和形態(tài)，將發(fā)病情況分為如下6級，見圖1。1級感病子實體菌蓋上有輕微黃斑，顏色淺淡，難于辨識；2級感病子實體菌蓋上病斑顏色淺黃，發(fā)病較輕，容易辨識；3級感病子實體菌蓋上病斑顏色稍深，呈黃色，個別的侵入較深呈現(xiàn)凹陷的黃色斑點；4級感病子實體菌蓋上病斑顏色更深，呈黃色至棕色，有的呈現(xiàn)黃色的凹陷；5級感病子實體菌蓋上呈現(xiàn)棕色病斑，有的斑點聯(lián)結(jié)在一起形成棕色暗區(qū)，有的則形成深黃色凹陷斑點；6級感病子實體菌蓋上病斑呈暗褐色，周圍有侵入的更深的不規(guī)則壞死斑，有的在感染處形成白色或微黃色絨毛。

圖1 各病級值下的平菇子實體

2.2 發(fā)病情況統(tǒng)計對22℃時各平菇菌株的發(fā)病指數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果見表2?？傮w上看，通常菌蓋顏色深的發(fā)病相對較重，發(fā)病情況和菌肉質(zhì)地?zé)o明顯聯(lián)系。

表2 25個平菇供試菌株的病情指數(shù)

有研究表明，病情指數(shù)和菌株的抗性水平有一定的聯(lián)系[6]，病情指數(shù)越小的，菌株的抗病能力越強，本研究根據(jù)病情指數(shù)的大小評價平菇菌株的抗性，結(jié)果見表3。高抗菌株有包括灰美二號、俄2014平2、韓CB54等3個菌株，占調(diào)查總數(shù)的12%；中抗菌株有10株，包括韓CB69、韓CBS06、韓CB101等，占40%；中感菌株7株，包括美味側(cè)耳2、豫平5號、黑平1號等，占28%；易感菌株5株，包括韓CB2、韓CB4、平（新疆-阿勒泰）等，占20%。

表3 依據(jù)病情指數(shù)劃分的菌株類型及數(shù)量

3 小結(jié)

褐斑病作為平菇的主要病害之一，一直備受關(guān)注，然而由于褐斑病發(fā)病的不確定性，一直缺少一套行之有效的方法使平菇免受褐斑病的威脅，鑒于此抗病品種的培育可能會成為防治平菇褐斑病最有效率、最有前景的措施之一。要選育出好的抗病品種，首先要做的就是對廣泛的平菇資源進(jìn)行抗性評價與鑒定。研究通過人工接種病原菌的方式觀察統(tǒng)計病情指數(shù)，從而對平菇菌株的抗病性進(jìn)行客觀評價。為褐斑病的抗性育種提供一定的理論基礎(chǔ)。