清胰II號對重癥急性胰腺炎大鼠腸道免疫損傷的影響

周淼，代靜靜，兌丹華，敖宇

（1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 普通外科，貴州 遵義563000； 2.遵義市第一人民醫(yī)院 重癥監(jiān)護(hù)室，貴州 遵義 563000）

急性胰腺炎是臨床上常見的急腹癥，具有較高的發(fā)病率和病死率。20%～30%患者病情較兇險，總體病死率為5%～10%[1]。SAP發(fā)生后炎癥因子大量釋放，隨后機體會代償產(chǎn)生大量抑炎因子，使機體處于免疫麻痹狀態(tài)[2]，此時腸道免疫功能受到抑制，腸道內(nèi)細(xì)菌、內(nèi)毒素向腸外組織遷移，導(dǎo)致繼發(fā)感染，甚至導(dǎo)致多器官功能衰竭。清胰II號制劑是治療急性胰腺炎的有效中藥復(fù)方制劑，前期的實驗研究[3-4]表明，清胰II號制劑能有效改善重癥急性胰腺炎（SAP）大鼠胰腺及胰外臟器損傷，抑制腸道細(xì)菌移位。本實驗的宗旨建立大鼠SAP模型，觀察不同處理組回腸組織的病理改變，檢測血清IL-1、IL-10的濃度及回腸高遷移率族蛋白1（HMGB1）mRNA表達(dá)，CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的凋亡情況，并與谷氨酰胺進(jìn)行比較，探討中藥清胰II號對SAP大鼠腸道免疫的保護(hù)作用及可能的機制。為其開發(fā)提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料

清胰II號制劑由課題組提供，?；悄懰徕c購買于美國Sigma公司，10%水合氯醛由遵義醫(yī)學(xué)院提供，健康SD大鼠購自重慶第三軍醫(yī)大學(xué)[證書編號為SCXK（渝）2012-0005]，引物設(shè)計與合成購自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司，熒光定量PCR試劑盒（提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄，擴(kuò)增）均購買于寶生物工程（大連）有限公司，流式細(xì)胞儀（美國BECKMAN COULTER），CD3+，CD4+，CD8+抗體均購買于Biolegend。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及模型建立 選取SD大鼠80只，體質(zhì)量200～250 g，鼠齡8～10周，雌雄不限，將80只大鼠隨機分為假手術(shù)組（n=8），SAP模型組（SAP組，n=24），SAP模型+清胰II號干預(yù)組（清胰II號組，n=24），SAP模型+陽性藥物谷氨酰胺干預(yù)組（谷氨酰胺組，n=24）。術(shù)前禁食12 h，不禁水，10%水合氯醛（0.33 mL/100 g）麻醉動物，假手術(shù)組大鼠開腹后僅翻動腸管，其余組大鼠采用膽胰管逆行注射5%牛磺膽酸鈉（0.1 mL/100 g）制SAP模型；清胰II號組大鼠于SAP制模蘇醒后予清胰II號灌胃（1 mL/100 g，1次/6 h），谷氨酰胺組大鼠于SAP制模蘇醒后予谷氨酰胺灌胃（0.15 g/100 g，1次/6 h），另兩組以同樣的方式給予生理鹽水。

1.2.2 標(biāo)本采集和保存 假手術(shù)組僅在術(shù)后6 h采集標(biāo)本，其余組分別于術(shù)后6、12、24 h采集標(biāo)本。大鼠麻醉后經(jīng)原切口入腹，用促凝管由下腔靜脈取血3～5 mL，室溫擱置片刻后，3 000 r/min離心15 min，EP管收集上層血清，-80 ℃冰箱保存，備血清IL-1、IL-10的檢測，取部分回腸生理鹽水沖洗干凈，勻漿法提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后-80 ℃冰箱保存，備HMGB1基因的檢查；取部分胰腺組織，10%中性福爾馬林溶液中固定，4 μm連續(xù)切片供HE染色。取末端回腸組織固定于10%中性甲醛緩沖液中，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，HE染色，由專業(yè)病理醫(yī)師觀察切片，收集回腸Peyer結(jié)制備成單細(xì)胞懸液行流式細(xì)胞術(shù)檢測。

1.2.3 胰腺組織病理學(xué)評分 在光鏡下比較各組胰腺病理學(xué)改變，按照鏡下病理學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)，由病理科醫(yī)生進(jìn)行雙盲評分。

1.2.4 RT-PCR檢測回腸組織中的6、12、24 h的HMGB1 mRNA的表達(dá) 參照TaKaRa公司RNAiso Reagent試劑盒說明提取組織中總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，熒光定量PCR反應(yīng)條件:95 ℃ 30 s，95 ℃ 5 s，57 ℃ 30 s，40 個循環(huán)，末循環(huán):55 ℃ 10 min。HMGB1上游引物:5'-TGA GAA GCT GGC TGT AAT GC-3'，下游引物:5'-AAA TGG CTT GGA CAA CTG GTA-3'，擴(kuò)增長度為222 bp；β-actin上游引物:5'-TGT CAC CAA CTG GGA CGA TA-3'，下游引物:5'-GGG GTG TTG AAG GTC TCA AA-3'，擴(kuò)增長度為165 bp。

1.2.5 回腸組織的病理學(xué)檢測 取一段回腸，暴露黏膜面，用預(yù)冷生理鹽水徹底沖洗，切取5 mm×3 mm×3 mm大小回腸組織，固定于4%戊二醛固定溶液，標(biāo)本用逐級增高濃度的酒精（30%→50%→70%→80%→90%→100%）脫水2次，吸出乙醇，加入醋酸異戊酯與乙醇1:1混合液，進(jìn)行干燥及樣品導(dǎo)電處理，最后行電鏡掃描。

1.2.6 T淋巴細(xì)胞亞群的凋亡檢測 收集回腸Peyer結(jié)制備成單細(xì)胞懸液，立即按CD3+、CD4+、CD8+流式抗體試劑盒說明（CD3+、CD4+、CD8+分別由PE、PE-Cy7、APC標(biāo)記）及凋亡檢測試劑盒說明（Annexin V-FITC/PI）行流式細(xì)胞術(shù)檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件。本實驗數(shù)據(jù)定量資料結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較用單因素方差分析（one-way ANOVA），組間比較用q檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 胰腺組織病理學(xué)檢測結(jié)果

假手術(shù)組大鼠胰腺組織無充血、水腫及壞死（圖1A）；SAP組胰腺腺泡腫脹、間質(zhì)水腫，大片出血及壞死灶，大量炎性細(xì)胞浸（圖1B）；清胰II號組（圖1C）及谷氨酰胺組（圖1D）大鼠胰腺組織周圍間質(zhì)均明顯水腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，間質(zhì)及毛細(xì)血管周圍中等量炎性細(xì)胞浸潤，腺泡細(xì)胞壞死較SAP模型組輕。各組術(shù)后胰腺病理學(xué)評分均明顯且逐漸升高（均P＜0.05），但兩個治療組評分在相同時間點上均明顯低于SAP組（均P＜0.05），且兩組在相同時間點差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）（表1）。

圖1 各組術(shù)后6 h胰腺組織病理學(xué)檢測（HE×100） A:假手術(shù)組；B:SAP組；C:清胰II號組；D:谷氨酰胺組Figure 1 Pathological examination of the pancreatic tissues in each group at postoperative 6 h (HE×100) A:Sham operation group;B:SAP group; C:Qingyi II group; D:Glutamine group

表1 大鼠胰腺病理學(xué)評分比較（n=8，±s）Table 1 Comparison of pathological scores for pancreatic damage among groups of rats (n=8,±s)

表1 大鼠胰腺病理學(xué)評分比較（n=8，±s）Table 1 Comparison of pathological scores for pancreatic damage among groups of rats (n=8,±s)

注:1）與假手術(shù)組比較，P＜0.05；2）與SAP組同時間點比較，P＜0.05Note:1) P＜0.05 vs.sham operation group; 2) P＜0.05 vs.SAP group

組別 6 h 12 h 24 h假手術(shù)組 0 — —SAP 組 7.00±0.821) 11.00±0.821) 13.5±0.501)清胰II號組 4.75±0.961),2) 8.00±0.821),2)10.00±0.821),2)谷氨酰胺組 4.00±0.821),2) 8.00±0.821),2)10.00±0.821),2)

2.2 回腸組織病理學(xué)檢測結(jié)果

2.2.1 光鏡觀察 光鏡下假手術(shù)組回腸組織無水腫、出血及壞死，腺體結(jié)構(gòu)完整；SAP組鏡下見回腸組織結(jié)構(gòu)紊亂、間質(zhì)水腫、出血，大量中性粒細(xì)胞浸潤，局部灶性壞死；兩個治療組鏡下見腸黏膜組織水腫、充血，少量中性粒細(xì)胞浸潤，程度較SAP組輕（圖2）。

圖2 各組術(shù)后6 h回腸組織病理學(xué)檢測（HE×100） A:假手術(shù)組；B:SAP組；C:清胰II號組；D:谷氨酰胺組Figure 2 Pathological examination of the ileal tissues in each group at postoperative 6 h (HE×100) A:Sham operation group; B:SAP group; C:Qingyi II group; D:Glutamine group

2.2.2 電鏡觀察結(jié)果 電鏡下見假手術(shù)組腸黏膜表面微絨毛清晰，數(shù)目多，直立、凸起，排列整齊；SAP組鏡微絨毛壞死、脫落、融合；兩個治療組回腸黏膜表面微絨毛萎縮變短，絨面間隙增寬，排列欠整齊（圖3）。

圖3 各組術(shù)后6 h回腸組織電鏡觀察（×10 000） A:假手術(shù)組；B:SAP組；C:清胰II號組；D:谷氨酰胺組Figure 3 Electron microscopic observation of the ileal tissues in each group at postoperative 6 h (×10 000) A:Sham operation group;B:SAP group; C:Qingyi II group; D:Glutamine group

2.3 血清IL-1、IL-10的濃度檢測結(jié)果

與對照組比較，其余各組術(shù)后血清IL-1、IL-10水平均明顯并逐漸升高（均P＜0.05），但兩個治療組各時間點的IL-1、IL-10的升高程度均小于SAP組（均P＜0.05），且兩組間同時間點各指標(biāo)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）（表2）。

表2 各組大鼠各時間點血清IL-1和IL-10的濃度水平（n=8，±s）Figure 2 Serum levels of IL-1 and IL-10 in each group of rats at diあerent postoperative time points (n=8,±s)

注:1）與假手術(shù)組比較，P＜0.05；2）與SAP組同時間點比較，P＜0.05Note:1) P＜0.05 vs.sham operation group; 2) P＜0.05 vs.SAP group

組別 IL-1 IL-10 6 h 12 h 24 h 6 h 12 h 24 h假手術(shù)組 14.4 970±0.5 019 — — 7.3 430±0.4 404 — —SAP 組 21.3 680±0.6 3491) 32.3780±2.2 8421) 44.9585±1.2 9631) 13.3606±0.5 2261) 14.9 835±0.8 7901) 19.0 393±1.1 9921)清胰II號組 18.0830±0.7 3141),2)24.7675±2.2 0481),2)32.7723±2.1 9811),2) 30.9153±1.3 3001),2)18.8363±1.2 5441),2)24.8222±2.2 1651),2)谷氨酰胺組 17.2856±1.7 1381),2)23.3280±3.4 0421),2)30.9153±1.3 3001),2) 15.6348±0.6 5731),2)18.6348±1.8 0601),2)24.8278±0.9 5121),2)

2.4 回腸HMGB1表達(dá)檢測結(jié)果

與對照組比較，其余各組術(shù)后回腸組織HMGB1 mRNA相對表達(dá)量均明顯并逐漸升高（均P＜0.05），但兩個治療組各時間點的回腸組織HMGB1 mRNA相對表達(dá)量的升高程度均小于SAP組（均P＜0.05），且兩組間同時間點HMGB1 mRNA表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）（表3）。

表3 各組各時間點大鼠回腸HMGB1 mRNA相對表達(dá)量（n=8，±s）Table 3 Relative expression levels of HMGB1 mRNA on the ileal tissues of each group of rats at diあerent postoperative time points (n=8,±s)

表3 各組各時間點大鼠回腸HMGB1 mRNA相對表達(dá)量（n=8，±s）Table 3 Relative expression levels of HMGB1 mRNA on the ileal tissues of each group of rats at diあerent postoperative time points (n=8,±s)

注:1）與假手術(shù)組比較，P＜0.05；2）與SAP組同時間點比較，P＜0.05Note:1) P＜0.05 vs.sham operation group; 2) P＜0.05 vs.SAP group

組別 6 h 12 h 24 h假手術(shù)組 1.0 396±0.5 626 — —SAP 組 4.1 703±1.3 1661) 35.8 489±3.00481) 63.7041±2.4 5971)清胰II號組 1.3 816±0.5 7071),2) 4.5 859±1.53871),2) 21.3879±6.0 8201),2)谷氨酰胺組 1.6 025±0.1 5041),2) 2.2 252±0.1 4051),2) 2.5953±0.1 4931),2)

2.5 各組大鼠淋巴細(xì)胞凋亡率

與對照組比較，其余各組術(shù)后回腸組織CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞凋亡率均明顯升高（均P＜0.05），其中SAP組CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞凋亡率隨時間呈逐漸升高趨勢，但兩個治療組以上淋巴細(xì)胞的凋亡率隨時間呈逐漸降低趨勢，且各時間點均小于SAP組（均P＜0.05），此外，兩治療組間同時間點各T細(xì)胞亞群的凋亡率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）（表4）。

表4 各組大鼠各時間點淋巴細(xì)胞凋亡率（n=8，±s）Table 4 Apoptosis rates of T lymphocytes in each group of rats at diあerent time points (n=8,±s)

表4 各組大鼠各時間點淋巴細(xì)胞凋亡率（n=8，±s）Table 4 Apoptosis rates of T lymphocytes in each group of rats at diあerent time points (n=8,±s)

注:1）與假手術(shù)組比較，P＜0.05；2）與SAP組同時間點比較，P＜0.05Note:1) P＜0.05 vs.sham operation group; 2) P＜0.05 vs.SAP group

項目 6 h 12 h 24 h CD3+假手術(shù)組 1.1 400±0.2 966 — —SAP 組 10.1 000±0.5 4311) 16.9 400±2.4 6001) 26.6 000±0.9 4071)清胰II號組 9.2 200±0.2 7721),2) 6.7 000±0.7 0361),2) 3.2 000±0.1 0001),2)谷氨酰胺組 9.1000±0.2 4491),2) 5.3400±0.7 4031),2) 3.5200±0.8 7011),2)CD4+假手術(shù)組 1.1 200±0.2 280 — —SAP 組 9.8 200±0.2 2801) 14.2 000±2.8 4431) 25.0 200±1.4 2551)清胰II號組 8.9400±0.3 6471),2) 6.9400±1.0 4071),2) 2.7 600±0.3 3621),2)谷氨酰胺組 9.0400±0.4 3931),2) 7.4200±0.1 9241),2) 2.9 200±0.1 6431),2)CD8+假手術(shù)組 1.1 600±0.1 342 — —SAP 組 10.3 400±0.6 5801) 14.9 800±3.1 4991) 27.1000±1.5 7581)清胰II號組 7.5 600±0.4 5611),2) 7.6 000±0.2 4491),2) 3.9 800±0.1 4831),2)谷氨酰胺組 7.6 800±0.3 7011),2) 7.4 400±0.2 0741),2) 3.9 600±0.3 6471),2)

3 討 論

腸黏膜屏障一般由機械屏障、化學(xué)屏障、免疫屏障和生物屏障構(gòu)成。多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的釋放是造成腸黏膜屏障損傷、腸道通透性增加和腸源性感染的原因[5-8]。其中，腸道免疫屏障可以很好的避免腸道內(nèi)菌群發(fā)揮不當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)，讓促炎和抗炎處于平衡之中[9]。SAP時，大量炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子釋放，使腸道出現(xiàn)微循環(huán)障礙，大量免疫細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腸道局部或全身免疫力下降，從而導(dǎo)致腸道發(fā)生免疫功能損傷，最終可導(dǎo)致腸道功能衰竭[10]?？梢?，發(fā)生SAP時，加強對腸道黏膜免疫屏障的保護(hù)，對腸黏膜屏障乃至對全身免疫功能都有積極作用。

HMGB1作為一種晚期炎癥因子[11-12]，幾乎存在于所有的細(xì)胞中。Wolfson等[13-14]研究發(fā)現(xiàn):用HMGB1處理腸上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞后，可引起單層細(xì)胞屏障功能喪失。Luan等[15]的研究表明，AP大鼠腸黏膜中HMGB1含量明顯升高。Yang等[16]的研究顯示含HMGB1的膽汁可破壞腸黏膜屏障。上述研究均證實HMGB1介導(dǎo)了SAP時IBFD的發(fā)病過程，但其發(fā)病機制尚不十分明確。SAP時存在T淋巴細(xì)胞亞群變化[17]。喬世峰等[18]研究了SAP大鼠腸道免疫功能的變化，發(fā)現(xiàn)SAP發(fā)生后各期CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明顯下降，說明大鼠早期即發(fā)現(xiàn)腸黏膜免疫功能明顯下降。王興鵬等[19-20]的研究發(fā)現(xiàn)ANP大鼠回腸Peyer集合淋巴結(jié)中存在大量凋亡淋巴細(xì)胞，亦證明了SAP大鼠存在腸道免疫屏障受損。

HMGB1是眾所周知的危險相關(guān)分子模式或警報素，能夠激活先天性免疫反應(yīng)。HMGB1可激活樹突狀細(xì)胞并誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟，成熟樹突狀細(xì)胞通過淋巴管遷移到淋巴結(jié)，將其在外周組織獲得的外源性抗原提呈給未致敏T細(xì)胞，從而啟動免疫反應(yīng)。董寧等[21]研究顯示，大面積燒傷患者傷后HMGB1含量與T淋巴細(xì)胞免疫功能障礙相關(guān)。另有研究[22]發(fā)現(xiàn)HMGB1能顯著誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)TLR4下調(diào),進(jìn)而參與調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的免疫活性。以上研究表明HMGB1不僅對T淋巴細(xì)胞免疫功能具有直接調(diào)節(jié)作用，還可通過影響細(xì)胞免疫中其它重要細(xì)胞的功能繼而間接地調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫功能。近年來，從細(xì)胞免疫角度探討HMGB1與IBFD的關(guān)系引起了廣泛關(guān)注。

HMGB1不僅是種晚期炎性因子，同時也是一種免疫調(diào)節(jié)因子。前期實驗[23]已經(jīng)證實在SAP時，大鼠血HMGB1隨時間推移，不斷升高。本實驗顯示，HMGB1介導(dǎo)并參與了SAP及IBFD病程的發(fā)展，隨病程的進(jìn)展，回腸HMGB1 mRNA表達(dá)量越來越高，同時，血清IL-1、IL-10濃度及CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的凋亡越來越高。HMGB1可能通過對CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的調(diào)節(jié)，從細(xì)胞免疫途徑介導(dǎo)并參與SAP時腸免疫功能障礙的發(fā)生。

清胰II號制劑是治療急性胰腺炎的有效中藥復(fù)方制劑，前期的實驗研究[24]表明，清胰II號制劑能有效改善SAP大鼠胰外臟器損傷，對腸屏障功能具有良好的保護(hù)作用。在肖青川等[25]的研究中發(fā)現(xiàn)，SAP大鼠予清胰II號治療后，其回腸HMGB1 mRNA表達(dá)量下調(diào)，移位細(xì)菌數(shù)量減少，回腸病理改變減輕，說明清胰II號可能通過下調(diào)回腸HMGB1 mRNA表達(dá)，從而改善腸道功能。

本研究顯示，SAP模型組胰腺病理評分與假手術(shù)組相比均明顯升高，模型復(fù)制成功；隨著病程時間的延長，胰腺病理損傷越來越重，予以清胰II號及谷氨酰胺干預(yù)治療后，各組各對應(yīng)時間點胰腺病理評分均較SAP組降低，說明治療有效，且兩組治療效果無明顯差異。IL-1、IL-10濃度顯示，SAP組各時間點較假手術(shù)組升高，兩個治療組較SAP組各時間點下降，但兩個治療組各對應(yīng)時間點無統(tǒng)計學(xué)差異，說明清胰II號和谷氨酰胺均可以有效降低炎癥介質(zhì)。清胰II號及谷氨酰胺灌胃后，各時間點回腸HMGB1 mRNA表達(dá)量均較模型組下降，各時間點CD3+、CD4+、CD8+的凋亡率較模型組下降，回腸病理損傷較模型組減輕。隨著用藥時間的延長，各時間點各T細(xì)胞的凋亡率呈下降趨勢，表明兩種藥物均能時間抑制腸道淋巴細(xì)胞的凋亡。

綜上所述，重癥急性胰腺炎時，大量炎癥因子釋放，腸道屏障功能受損，在SAP并IBFD的過程中，HMGB1作為晚期炎性因子及免疫刺激因子參與其中，HMGB1可能通過對腸道T淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)，從細(xì)胞免疫途徑介導(dǎo)腸黏膜免疫屏障功能障礙，促進(jìn)SAP的病情進(jìn)展。清胰II號制劑對SAP大鼠腸黏膜免疫屏障功能具有保護(hù)作用，其機制可能是通過降低機體HMGB1的表達(dá)，使CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的凋亡減少，從而改善SAP時腸道免疫功能。

參考文獻(xiàn)

[1]中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會胰腺疾病學(xué)組,《中華胰腺病雜志》編輯委員會,《中華消化雜志》編輯委員會,等.中國急性胰腺炎診治指南(2013,上海)[J].中華胰腺病雜志,2013,13(2):73–78.doi:10.3760/cma.j.issn.1674–1935.2013.02.001.Pancreatic Disease Group of Digestive Disease Branch of Chinese Medical Association,Editorial Committee of Chinese Journal of Pancreatology,Editorial Committee of Chinese Journal of Digestion,et al.Chinese guidelines for the management of acute pancreatitis (Shanghai,2013)[J].Chinese Journal of Pancreatology,2013,13(2):73–78.doi:10.3760/cma.j.issn.1674–1935.2013.02.001.

[2]Rahman SH,Ammori BJ,Holmfield J,et al.Intestinal hypoperfusion contributes to gut barrier failure in severe acute pancreatitis[J].J Gastrointest Surg,2003,7(1):26–35.

[3]蔡治方,兌丹華,陳正修,等.清胰II號顆粒劑對大鼠重癥急性胰腺炎合并腎損傷時的保護(hù)作用[J].山東醫(yī)藥,2012,52(28):10–12.doi:10.3969/j.issn.1002–266X.2012.28.004.Cai ZF,Dui DH,Chen ZX,et al.Changes of acute renal injury in SAP rats and the protective function of QingYi II[J].Shandong Medical Journal,2012,52(28):10–12.doi:10.3969/j.issn.1002–266X.2012.28.004.

[4]兌丹華,彭慈軍,趙鵬,等.清胰II號對香豬重癥急性胰腺炎胰肺損害的保護(hù)作用[J].消化外科,2004,3(6):419–422.doi:10.3760/cma.j.issn.1673–9752.2004.06.011.Dui DH,Peng CJ,Zhao P,e al.Protective effects of the Qingyi II on pancreas and pulmonary following SAP in pigs[J].Journal of Digcstive Surgery,2004,3(6):419–422.doi:10.3760/cma.j.issn.1673–9752.2004.06.011.

[5]Capurso G,Zerboni G,Signoretti M,et al.Role of the gut barrier in acute pancreatitis [J].J Clin Gastroenterol,2012,46(Suppl):S46–51.doi:10.1097/MCG.0b013e3182652096.

[6]葛鵬磊,賈乾斌,李寧,等.GLP-2對膽總管結(jié)扎大鼠腸道細(xì)菌移位及內(nèi)毒素血癥的影響[J].中國普通外科雜志,2012,21(2):173–177.Ge PL,Jia QB,Li N,et al.Effect of glucagon-like peptide 2 (GLP-2) on bacterial translocation and endotoxemia in rats with common bile duct ligation[J].Chinese Journal of General Surgery,2012,21(2):173–177.

[7]Jamdar S,Siriwardena AK.Contemporary management of infected necrosis complicating severe acute pancreatitis[J].Crit Care,2006,10(1):101.

[8]Pitchumoni CS,Patel NM,Shah P.Factors in fluencing mortality in acute pancreatitis:can we alter them?[J].J Clin Gastroenterol,2005,39(9):798–814.

[9]Chen VL,Kasper DL.Interactions between the intestinal microbiota and innate lymphoid cells[J].Gut Microbes,2014,5(1):129–140.doi:10.4161/gmic.27289.

[10]Barreau F,Hugot JP.Intestinal barrier dysfunction triggered by invasive bacteria[J].Curr Opin Microbiol,2014,17:91–98.doi:10.1016/j.mib.2013.12.003.

[11]Shen X,Li WQ.High-mobility group box 1 protein and its role in severe acute pancreatitis[J].World J Gastroenterol,2015,21(5):1424–1235.doi:10.3748/wjg.v21.i5.1424.

[12]尹朝奇,賀全勇,羅成群,等.HSF-1在HMGB1誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用[J].中國普通外科雜志,2016,25(9):1291–1295.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2016.09.011.Yin CQ,He QY,Luo CQ,et al.Role of HSF-1 in inflammatory response induced by HMGB1[J].Chinese Journal of General Surgery,2016,25(9):1291–1295.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2016.09.011.

[13]Wolfson RK,Chiang ET,Garcia JG.HMGB1 induces human lung endothelial cell cytoskeletal rearrangement and barrier disruption[J].Microvasc Res,2011,81(2):189–197.doi:10.1016/j.mvr.2010.11.010.

[14]Dai S,Sodhi C,Cetin S,et al.Extracellular high mobility group box-1 (HMGB1) inhibits enterocyte migration via activation of Tolllike receptor-4 and increased cell-matrix adhesiveness[J].J Biol Chem,2010,285(7):4995–5002.doi:10.1074/jbc.M109.067454.

[15]Luan ZG,Zhang H,Ma XC,et al.Role of high-mobility group box 1 protein in the pathogenesis of intestinal barrier injury in rats with severe acute pancreatitis[J].Pancreas,2009,39(2):216–223.doi:10.1097/MPA.0b013e3181bab5c5.

[16]Yang R,Miki K,Oksala N,et al.Bile high-mobility group box 1 contributes to gut barrier dysfunction in experimental endotoxemia[J].Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2009,297(2):R362–369.doi:10.1152/ajpregu.00184.2009.

[17]Luan ZG,Ma XC,Zhang H,et al.Protective effect of ethyl pyruvate on pancreas injury in rats with severe acute pancreatitis[J].J Surg Res,2013,181(1):76–84.doi:10.1016/j.jss.2012.05.066.

[18]喬世峰,孫家邦,李非,等.重癥胰腺炎大鼠腸道免疫功能改變及精氨酸的調(diào)節(jié)作用[J].中國免疫學(xué)雜志,2006,22(8):761–763.Qiao SF,Sun JB,Li F,et al.Alterations of intestinal immune function and regulatory effects of L-arginine in rats with experimental severe acute pancreatitis[J].Chinese Journal of Immunology,2006,22(8):761–763.

[19]王興鵬,王冰嫻,吳愷,等.細(xì)胞凋亡在急性壞死型胰腺炎早期腸黏膜上皮細(xì)胞死亡中的作用[J].中華消化雜志,2001,21(5):267–270.doi:10.3760/j.issn:0254–1432.2001.05.003.Wang XP,Wang BX,Wu K,et al.Role of apoptosis in the cell death of rat intestinal epithelium during the early stage of acute necrotizing pancreatitis[J].Chinese Journal of Digestion,2001,21(5):267–270.doi:10.3760/j.issn:0254–1432.2001.05.003.

[20]Ammori BJ,Cairns A,Dixon MF,et al.Altered intestinal morphology and immunity in patients with acute necrotizing pancreatitis[J].J Hepatobiliary Pancreat Surg,2002,9(4):490–496.

[21]董寧,金伯泉,姚詠明,等.嚴(yán)重?zé)齻蠹?xì)胞免疫改變及其與高遷移率族蛋白B1的相關(guān)性[J].中華外科雜志,2008,46(10):759–762.doi:10.3321/j.issn:0529–5815.2008.10.011.Dong N,Jin BQ,Yao YM,et al.Change in T cell-mediated immunity and its relationship with high mobility group box-1 protein levels in extensively burned patients[J].Chinese Journal of Surgery,2008,46(10):759–762.doi:10.3321/j.issn:0529–5815.2008.10.011.

[22]Rovere-Querini P,Capobianco A,Scaffidi P,et al.HMGB1 is an endogenous immune adjuvant released by necrotic cells[J].EMBO Rep,2004,5(8):825–830.

[23]趙建鋒,兌丹華,代靜靜,等.清胰II號對重癥急性胰腺炎大鼠胰腺損傷的保護(hù)作用及機制探討[J].山東醫(yī)藥,2016,56(10):25–26.doi:10.3969/j.issn.1002–266X.2016.10.009.Zhao JF,Dui DH,Dai JJ,et l.Protective effect and mechanism of Qingyi II against prancreatic damage caused by acute pancreatitis in rats[J].Shandong Medical Journal,2016,56(10):25–26.doi:10.3969/j.issn.1002–266X.2016.10.009.

[24]蔡治方,兌丹華,王俊,等.清胰II號方對重癥急性胰腺炎大鼠腸黏膜屏障功能的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,32(4):490–493.Cai ZF,Dui DH,Wang J,et al.Effects of Qingyi II Recipe on the Intestinal Barrier Function of Severe Acute Pancreatitis Rats[J].Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine,2012,32(4):490–493.

[25]肖青川,兌丹華,蘭天罡,等.清胰II號顆粒劑對急性壞死性胰腺炎大鼠腸道細(xì)菌移位的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009,29(10):905–909.doi:10.3321/j.issn:1003–5370.2009.10.011.Xiao QC,Dui DH,Lan TG,et al.Effects of Qingyi II Granules on Intestinal Bacterial Translocation In Rats with Acute Necrotizing Pancre-atitis[J].Chinese Journal of Integrated Traditional and Western medicine,2009,29(10):905–909.doi:10.3321/j.issn:1003–5370.2009.10.011.