雙孢蘑菇三級菌種生產關鍵技術

王靜靜 羅燕娜 李旭東 趙 亮 張愛萍

（新疆生產建設兵團第六師農業(yè)科學研究所，新疆五家渠831300）

雙孢蘑菇（Agaricusbisporus）是典型的草腐性真菌。新疆農副產品原料豐富，閑置日光溫室較多，使得雙孢蘑菇產業(yè)已逐漸成為當?shù)剞r業(yè)結構調整的支柱產業(yè)。

目前，新疆主要利用種植蔬菜的日光溫室進行改造后生產雙孢蘑菇，菌包主要來自新疆九鼎天庫生物科技有限公司及健源食用菌專業(yè)合作社等加工廠，栽培的品種有A15、W192、As2796等。但菌種供應主要來自內地，部分菌種仍由國外控制生產。菌種是雙孢蘑菇產業(yè)鏈的首道關鍵環(huán)節(jié)，其質量好壞和成本高低直接決定了栽培成敗。筆者在進行各類試驗、示范及生產調研的基礎上，較為系統(tǒng)地總結出我區(qū)雙孢蘑菇的三級菌種生產關鍵技術，旨在為本地區(qū)菌種生產者提供技術參考。

1 母種制作關鍵技術

經多次試驗研究表明，雙孢蘑菇目前最優(yōu)母種培養(yǎng)基仍為麥粒煮汁培養(yǎng)基。其關鍵點是優(yōu)良菌株的選擇、組織分離部位的確定及培養(yǎng)基的制作。除從正規(guī)科研單位購買的母種外，凡經過分離培養(yǎng)獲得的菌株用作母種時必須進行出菇試驗，證明其具有優(yōu)良性狀，方可用于生產。

1.1 母種培養(yǎng)基制作制作1 L麥粒煮汁培養(yǎng)基需麥粒 200 g，葡萄糖 20 g，瓊脂 18～20 g，MgSO40.5 g，KH2PO42 g，蛋白胨1.5 g。操作要點是：將麥粒煮至透亮無白芯，表皮無破裂后，用4層紗布過濾。取濾液繼續(xù)加熱，并加入化學試劑、瓊脂和蛋白胨，先要用少量涼水攪勻再加入，邊加邊用玻璃棒攪拌，試劑全部加入后定容。制作的關鍵環(huán)節(jié)是麥粒煮的火候一定要掌握到位，煮的過久麥粒表皮破裂，淀粉外泄，造成麥粒結塊，滅菌不易徹底。此時，一些尚存活的抗熱性細菌，遇到外泄淀粉營養(yǎng)便會造成木霉菌污染。過生，麥粒種淀粉、脂肪等物質不能分解為麥芽糖等物質，不易于菌絲利用，這是造成菌絲生長速度變慢的主要原因。

1 L麥粒煮汁培養(yǎng)基可分裝試管80～90支，分裝試管時要注意流出的培養(yǎng)基不可粘在試管口的壁上，以防日后生霉。然后用101kPa高壓滅菌35 min，趁熱擺成斜面培養(yǎng)基，長度為試管長度的2/3左右，斜面上端距棉塞2～3 cm為宜。做好的培養(yǎng)基放置2～3 d確認無菌后，方可使用。

1.2 優(yōu)良菌株的獲得

1.2.1 子實體選擇 最好是選取前兩潮菇形圓正、菌蓋肥厚、健康、具有本品種特性的子實體，一般是隨采隨處理，在4℃保存最多不超過1 d，將其切除菇根，用無菌水將菇面沖洗干凈，再用75%酒精棉對菇體表面進行消毒。

1.2.2 組織分離技術 在所選取的子實體的菇柄中部用解剖刀縱切一刀后，用手掰開菇體，再在菇蓋與菇柄交界處切五個小方塊，隨后挑取一小塊約0.5 cm大小的組織，迅速移接到試管培養(yǎng)基中間處并用棉塞封口。其關鍵技術，是如何判斷出生命力較強的離體組織。

1.2.3 母種培養(yǎng) 接種后，將試管置于20～25℃下恒溫遮光培養(yǎng)3～4 d后，可見到組織塊上長出白色茸毛狀菌絲體，周圍無雜菌污染，即說明分離成功。然后在菌落的邊緣，用無菌接種針挑取先端菌絲轉移到新的培養(yǎng)基斜面上，在20～25℃下經過5～7 d培養(yǎng)，菌絲長滿斜面而無雜菌污染的，即為純菌絲體菌種，可用來進行擴繁。1支純菌絲試管菌種一般可擴繁20～30支母種，1支母種可擴繁原種3瓶，擴繁時要先將老接種菌塊去掉。

2 原種制作關鍵技術

試驗研究表明，雙孢蘑菇原種麥粒培養(yǎng)基制作時，加入一些棉子殼、牛糞或糞草用作封口料，對菌絲生長能起引導作用，菌絲生長較均勻且較快。原種制作關鍵點是：要求所使用的封口料糞草須較碎、較短，以避免滅菌后麥粒與封口料出現(xiàn)斷層，影響菌絲生長速度；其次麥粒要保持適宜含水量。

2.1 封口料制作封口料用量約占麥粒培養(yǎng)基的10%～20%。用棉子殼、牛糞作原料，其比例按60%棉子殼、40%干牛糞、2%石膏、1.5%石灰，根據(jù)天氣情況決定發(fā)酵時間的長短，夏季一般需7～10 d，發(fā)酵期間需翻堆2～3次。也可選用發(fā)酵好的糞草作為封口料，使用前用0.1%石灰水預濕，含水量應保持在45%，pH8左右。

2.2 培養(yǎng)基制作制種前一天，先將麥粒淘洗干凈，然后在0.2%石灰水中浸泡10～12 h，瀝去水后用清水反復沖洗至pH8左右，然后煮沸至麥粒透亮無白芯表皮無破裂，約10 min后用笊籬瀝干水分，攤開，至麥粒表面水分晾干，含水量在45%左右，加入1.5%輕質碳酸鈣和1%石膏拌勻后裝瓶。一般用750 mL的瓶裝料，裝至瓶肩后再用封口料進行封口壓實，用抹布將菌種瓶內壁口擦干凈，要求加棉花塞至距料面1 cm以上，松緊度以棉塞能提起整個瓶身為宜，并在棉塞上面蓋上防水蓋，避免棉塞潮濕而造成雜菌污染。之后在101kPa高壓下滅菌3 h，待緩慢降壓后出鍋，搬至接種間進行臭氧滅菌。

2.3 接種與發(fā)菌接種時，先用接種針將試管中老接種菌塊去掉，然后迅速取出帶培養(yǎng)基的母種放入原種瓶內的培養(yǎng)料上，立即蓋好瓶口。

發(fā)菌場所要求干凈整潔，空氣清新，溫度23～25℃，空氣相對濕度60%～70%，遮光培養(yǎng)，擺放勿過擠，及時剔除污染瓶，培養(yǎng)25～30 d菌絲可布滿瓶，待用。一般1瓶原種（750 mL）可接40袋栽培種。

3 栽培種制作技術

栽培種培養(yǎng)基的配制，與原種培養(yǎng)基制作基本一致，只是不需加封口料，直接裝袋（13 cm×23 cm聚丙烯袋），用套環(huán)封口，高壓滅菌3 h，待自然降壓后將料包運至冷卻室，放至常溫后才能進行接種。其關鍵技術是：在接種前須挑選健壯無雜菌污染的原種，并將封口料清除后方可挖種轉接，要將菌種均勻覆蓋于培養(yǎng)料表面，可促使菌絲快速布滿料面，減少雜菌污染。

接種后在23～25℃下遮光培養(yǎng)，30 d菌絲可布滿袋。每袋栽培種約350 g，一般1 m2料床需播3袋栽培種。

4 菌種鑒定與保存

4.1 菌種質量鑒定菌種質量鑒定，一般是通過感官檢驗和栽培性狀檢驗來確定。感官檢驗，是從菌種的長勢、顏色、菌齡、均勻度等方面確定菌種活力，這需要一定的經驗值。栽培性狀，可通過出菇試驗，從菇形、出菇快慢、產量、品質等方面進行鑒定菌種種性。在菌種進行大量擴繁時，一定要對菌種的質量和種性做正規(guī)的栽培試驗。

優(yōu)良母種要求菌絲濃白、粗壯，無干燥、收縮和發(fā)黃現(xiàn)象；原種和栽培種要求菌絲色澤潔白無雜色（菌）出現(xiàn)，菌種瓶（袋）內無黃色汁液滲出，接種后一般48 h后開始萌發(fā)。

4.2 菌種保存母種滿管后短期保存，可置于4℃冰箱，保藏期不超過90 d；長期保存，可采用液氮保存法、石蠟保存法等。原種和栽培種一般不做儲備菌種，根據(jù)栽培時間有計劃進行生產。母種轉管次數(shù)要少，最多不超過5次。原種和栽培種短時間保存，也可置于4℃冰箱保存，一般不超過30 d。

一般栽培400 m2的設施內需栽培種420 kg，依次可推算需原種11瓶，母種4支試管。