免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

王寅彪，劉 肖，李青梅，郭軍慶

·綜述·

免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

王寅彪1，2，劉 肖2，李青梅2，郭軍慶2

目的 探討免疫層析試紙檢測(cè)在即時(shí)檢測(cè)中的研究現(xiàn)狀及未來(lái)的發(fā)展方向和應(yīng)用價(jià)值。方法 參閱國(guó)內(nèi)外發(fā)表的文獻(xiàn)，綜述免疫層析試紙?jiān)诳乖?、抗體、半抗原檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用及利用新納米材料提高檢測(cè)敏感度的設(shè)計(jì)策略。結(jié)果 傳統(tǒng)的免疫層析試紙主要以膠體金作為示蹤物利用競(jìng)爭(zhēng)法或夾心法對(duì)半抗原、抗原和抗體等進(jìn)行檢測(cè)，但存在敏感度不足及定量檢測(cè)受限等問(wèn)題，結(jié)合不同納米材料進(jìn)行新型試紙研發(fā)將有助于克服這些缺陷，向更高敏感性、定量、多聯(lián)的檢測(cè)方向發(fā)展。結(jié)論 免疫層析試紙是進(jìn)行即時(shí)檢測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的重要工具，未來(lái)可用于對(duì)大規(guī)模群體實(shí)施檢測(cè)，獲取大數(shù)據(jù)，建立疾病或食品安全預(yù)警評(píng)價(jià)信息平臺(tái)。

免疫色譜法；免疫層析試紙；綜述

Abstract：Objective This paper aimed to review the current use and future development of immunochromatographic strip in instant testing. Methods Advanced research papers were studied and reviewed for summarizing the use of strip test in detecting antigens，antibodies，and haptens，and novel strategies in enhancing sensitivity of the strip test utilizing new nano-materials. Results Conventional strip test mainly used colloidal gold as tracers or competition format for detecting antigens，antibodies，and haptens.However， it was limited by relatively low sensitivity and difficulty of quantitate detection.Combination of different newly-developed nano-materials with strip will be helpful for more sensitive，quantitative，and multiplex detection. Conclusion Immunochromatographic strip is an important application for instant testing and site detection，and will be used for detecting large population for acquiring big data and establishing prewarning platforms of disease prevention and food safety surveillance.

Key words：immunochromatography；immunochromatographic test strip；review

免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)是基于單克隆抗體技術(shù)、免疫標(biāo)記技術(shù)及免疫層析技術(shù)發(fā)展起來(lái)的一種新型的簡(jiǎn)化檢測(cè)技術(shù)，可用于抗原、抗體及半抗原的定性、半定量及定量檢測(cè)，具有簡(jiǎn)便、特異、快速、敏感的特點(diǎn)，且不依賴(lài)于專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員及昂貴的儀器設(shè)備［1］。試紙由樣品墊、膠金墊、NC膜及吸水紙等材料依附在有一定硬度的支架上組成，對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，在吸水紙的吸引作用及毛細(xì)管作用下，液體樣品依次通過(guò)樣品墊、膠金墊、NC膜，到達(dá)吸水紙端。NC膜上固化有兩道線(xiàn)：檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)。質(zhì)控線(xiàn)顯色指示測(cè)試有效，檢測(cè)線(xiàn)則根據(jù)檢測(cè)模式的不同而呈現(xiàn)紅色或不顯色，以指示陽(yáng)性或陰性結(jié)果。免疫層析試紙的檢測(cè)原理主要有兩種：夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法。利用夾心法檢測(cè)時(shí)，膠體金標(biāo)記的抗體或抗原與相應(yīng)的被檢測(cè)物（analyte）結(jié)合后，可以被檢測(cè)線(xiàn)上的另外一株抗體攔截顯色，同時(shí)多余的金標(biāo)抗體或金標(biāo)抗原被質(zhì)控線(xiàn)上的抗體攔截顯色。若樣品中不含被檢測(cè)物，則不能與金標(biāo)抗體或金標(biāo)抗原結(jié)合，不被檢測(cè)線(xiàn)攔截顯色，而質(zhì)控線(xiàn)上的抗體則與金標(biāo)抗體或抗原結(jié)合顯色。即陰性樣品僅有質(zhì)控線(xiàn)顯色，檢測(cè)線(xiàn)不顯色；陽(yáng)性樣品在檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)同時(shí)顯色［2］。利用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)時(shí)，當(dāng)樣品中的被檢測(cè)物與金標(biāo)抗體結(jié)合后，就能阻斷金標(biāo)抗體與檢測(cè)線(xiàn)上的固化物（BSA-analyte）結(jié)合，此時(shí)膠體金顆粒不在檢測(cè)線(xiàn)上聚集，也就不顯色，多余的金標(biāo)抗體與質(zhì)控線(xiàn)上的抗體結(jié)合，使金顆粒聚集顯色。而如果樣品中不含有被檢測(cè)物，那么也就不能阻斷金標(biāo)抗體與檢測(cè)線(xiàn)上的固化物結(jié)合，此時(shí)檢測(cè)線(xiàn)上將發(fā)生膠體金的聚集顯色，同樣，質(zhì)控線(xiàn)也因金顆粒的聚集而顯色；即檢測(cè)陰性樣品時(shí)，結(jié)果同時(shí)出現(xiàn)檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)；檢測(cè)陽(yáng)性樣品時(shí)，僅出現(xiàn)質(zhì)控線(xiàn)，不出現(xiàn)檢測(cè)線(xiàn)，與夾心法的結(jié)果判定恰恰相反［3］。試紙檢測(cè)的樣品類(lèi)型包括血液、尿液、乳液、口腔液等，可用于食品及水質(zhì)安全檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、傳染病檢測(cè)及慢性非傳染性疾病檢測(cè)。

1 膠體金試紙檢測(cè)

傳統(tǒng)的即時(shí)檢測(cè)試紙主要以膠體金作為標(biāo)記物，以檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)的顯色情況及強(qiáng)度進(jìn)行定性和半定量檢測(cè)，已在抗原檢測(cè)、抗體檢測(cè)和半抗原檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)揮顯著作用。

1.1 抗原檢測(cè) 抗原檢測(cè)試紙的檢測(cè)靶標(biāo)可以是微生物抗原，如病毒、細(xì)菌以及非微生物抗原，如自身抗原、腫瘤抗原等。常見(jiàn)的檢測(cè)模式有3種：①金標(biāo)單抗，多抗攔截；②金標(biāo)多抗，單抗攔截；③金標(biāo)單抗，識(shí)別不同位點(diǎn)的單抗攔截。最早出現(xiàn)的抗原檢測(cè)試紙主要是針對(duì)人絨毛膜促性腺素（human chorionic gonadotropin，HCG）、A群鏈球菌及衣原體的檢測(cè)［4］。近年來(lái)，免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)被廣泛應(yīng)用于傳染病病原體、腫瘤及心血管疾病檢測(cè)方面。Reid等制備了檢測(cè)口蹄疫病毒的層析試紙，可檢測(cè)7種血清型的口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease viruses，F(xiàn)MDV）［5］。Niu等制備了檢測(cè)食物中金黃色葡萄球菌的試紙，檢測(cè)限達(dá)103 CFU·mL-1，可快速評(píng)價(jià)食品及水質(zhì)安全［6］。Gholamzad等分別利用雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法建立了檢測(cè)金黃色葡萄球菌腸毒素B的膠體金檢測(cè)試紙，檢測(cè)限分別達(dá)到10 ng·mL-1和 25 ng· mL-1［7］。Ma等 制 備 了 用 于 檢 測(cè)HIV-1 p24抗原的膠體金試紙，檢測(cè)限達(dá)25 pg·mL-1，為HIV感染的早期診斷提供了高效便捷的方法［8］。Wu等利用雙抗體夾心法制備了檢測(cè)前列腺特異抗原（prostate-specific antigen，PSA）的膠體金試紙，可作為監(jiān)測(cè)前列腺癌病情變化和療效觀察的有效工具［9］。

1.2 抗體檢測(cè) 抗體檢測(cè)試紙的檢測(cè)靶標(biāo)一般為IgA、IgG及IgE等。常見(jiàn)的檢測(cè)模式有兩種：①金標(biāo)抗原，二抗／SPA攔截；②金標(biāo) SPA或二抗，抗原攔截。Yang等利用金標(biāo)蛋白抗原或多肽建立了檢測(cè)O型FMDV病毒抗體的膠體金試紙檢測(cè)方法，其中金標(biāo)多肽檢測(cè)試紙可特異區(qū)分疫苗免疫抗體與野毒感染抗體［10-11］。Cheng等以金標(biāo)二抗，抗原攔截的模式建立了檢測(cè)H5和H6亞型禽流感抗體的膠體金試紙?jiān)\斷方法，與血凝抑制試驗(yàn)符合率非常高［12］。Zhang等制備了檢測(cè)血清旋毛蟲(chóng)抗體的膠體金試紙，利用結(jié)合哺乳動(dòng)物IgG的SPA作為攔截線(xiàn)，可檢測(cè)人、寵物、動(dòng)物血清旋毛蟲(chóng)抗體［13］。Xiang等表達(dá)了丙肝病毒（hepatitis C virus，HCV）不同的蛋白抗原，以高免疫原性的蛋白抗原建立了雙抗原夾心膠體金試紙用于HCV抗體的檢測(cè)，為臨床監(jiān)測(cè)HCV感染提供了簡(jiǎn)便方法［14］。

1.3 半抗原檢測(cè) 半抗原檢測(cè)試紙的檢測(cè)靶標(biāo)通常為抗生素、農(nóng)藥、獸藥、生物毒素、激素等小分子物質(zhì)。常見(jiàn)的檢測(cè)模式有兩種：①金標(biāo)單抗，人工抗原攔截；②金標(biāo)人工抗原，單抗攔截。利用競(jìng)爭(zhēng)法原理，張改平等制備了檢測(cè)鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇等β-激動(dòng)劑的膠體金試紙條，實(shí)現(xiàn)了對(duì)此類(lèi)瘦肉精產(chǎn)品的定性及半定量檢測(cè)［15］。Li等建立了檢測(cè)苯乙醇胺A的膠體金快速檢測(cè)方法，因篩選的單抗具有高親和力，使得檢測(cè)限達(dá) 0.1 ng·mL-1［16］。Wang等建立了半定量檢測(cè)奶粉中大豆致敏蛋白glycinin和β-conglycinin的試紙檢測(cè)技術(shù)［17］。Hua等建立了檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中8種有機(jī)磷農(nóng)藥的膠體金試紙檢測(cè)方法［18］。近來(lái)，用于細(xì)菌性疾病治療的抗生素殘留問(wèn)題越來(lái)越受到重視，因此研究人員先后制備了檢測(cè)慶大霉素、四環(huán)素、氯霉素、氟苯尼考等抗生素的膠體金試紙［19-21］。谷物中極低濃度真菌毒素即可對(duì)人或動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生毒害，Sun等制備了可同時(shí)檢測(cè)谷物中赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮的膠體金免疫層析試紙［22］。

1.4 其他檢測(cè) 除對(duì)抗原、抗體及半抗原進(jìn)行檢測(cè)外，免疫層析試紙?jiān)谄渌麢z測(cè)領(lǐng)域，尤其是對(duì)金屬離子及核酸檢測(cè)方面也存在廣泛應(yīng)用。Tang等以競(jìng)爭(zhēng)法模式建立了檢測(cè)水中重金屬鉛的膠體金試紙檢測(cè)方法，檢測(cè)限達(dá)50 ng·mL-1，該法需要 TiO2對(duì)樣品中的鉛進(jìn)行富集［23］。Liu等制備了檢測(cè)水樣及血液樣品中鉻離子Cr3+的膠體金試紙，檢測(cè)時(shí)需要通過(guò)預(yù)處理將樣品中Cr6+的還原為Cr3+，定性檢測(cè)限達(dá)50 ng·mL-1，定量檢測(cè)的線(xiàn)性范圍為 5～80 ng·mL-1［24］。核酸檢測(cè)包括 3個(gè)主要步驟：樣品制備（核酸提取與純化）、擴(kuò)增（PCR／LAMP）及檢測(cè)（熒光信號(hào)、濁度），將其檢測(cè)步驟與免疫層析試紙結(jié)合可制備出核酸檢測(cè)試紙（nucleic acid lateral flow，NALF）［25］。核酸試紙檢測(cè)存在抗體依賴(lài)和抗體非依賴(lài)兩種模式?？贵w依賴(lài)模式建立在夾心法基礎(chǔ)上，首先使用兩種小分子半抗原，硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）和生物素（Biotin）分別標(biāo)記上下游擴(kuò)增引物，再使用對(duì)應(yīng)的抗體作為金標(biāo)抗體及檢測(cè)線(xiàn)上的攔截抗體?？贵w非依賴(lài)模式則利用金標(biāo)寡核苷酸與檢測(cè)線(xiàn)上的寡核苷酸分別結(jié)合擴(kuò)增片段的兩端，擴(kuò)增產(chǎn)物僅需在室溫條件下與金標(biāo)寡核苷酸進(jìn)行3 min孵育雜交即可用于檢測(cè)［26］。Roskos等利用親和素標(biāo)記納米微球，生物素和地高辛標(biāo)記引物，抗地高辛抗體作為檢測(cè)線(xiàn)制備了檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌基因組DNA的試紙，并且將63℃的LAMP擴(kuò)增與試紙整合形成了可移動(dòng)小型設(shè)備，為核酸即時(shí)檢測(cè)提供了更方便快速的方法［27］。

2 新型試紙檢測(cè)

現(xiàn)有的膠體金試紙檢測(cè)存在兩個(gè)局限：一是定量檢測(cè)受限；二是敏感性稍低?？朔蓚€(gè)局限的方法有：①篩選利用高親和力的單抗；②利用更為敏感的納米材料作為標(biāo)記物；③利用更為精密的試紙信號(hào)讀取儀；④利用新的顯色增強(qiáng)策略。新型試紙檢測(cè)技術(shù)主要針對(duì)傳統(tǒng)試紙的這兩種局限而不斷改良，向著多靶標(biāo)、定量、高敏感性檢測(cè)方向發(fā)展。已用于提高試紙檢測(cè)敏感性的新材料有：磁顆粒、熒光微球、量子點(diǎn)、上轉(zhuǎn)換熒光粉、碳納米顆粒、銪納米顆粒等；此類(lèi)免疫層析技術(shù)雖然需要使用配套的儀器對(duì)結(jié)果信號(hào)（磁信號(hào)、電化學(xué)信號(hào)、化學(xué)發(fā)光信號(hào)、熒光信號(hào)）進(jìn)行讀取，但可在不影響特異性的前提下，顯著提升敏感性，而且可實(shí)現(xiàn)定量的檢測(cè)分析。試紙閱讀儀通過(guò)將檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)的顏色強(qiáng)度轉(zhuǎn)變?yōu)楣饷芏戎祵?shí)現(xiàn)定量分析。鑒于被分析物濃度、反應(yīng)時(shí)間和溫度對(duì)結(jié)果的影響較大，故通常采用檢測(cè)線(xiàn)光密度與質(zhì)控線(xiàn)光密度的比值進(jìn)行定量判定［28］。Hou等使用智能手機(jī)作為試紙閱讀器實(shí)現(xiàn)了對(duì)HCG抗原和癌胚抗原的檢測(cè)，該模式既可以利用LED依據(jù)顏色變化判定結(jié)果，又可以利用UV-LED結(jié)合內(nèi)置軟件進(jìn)行定量分析［29］。

Zhao等利用紅外—可見(jiàn)光上轉(zhuǎn)換材料標(biāo)記單抗，以競(jìng)爭(zhēng)法模式制備了檢測(cè)作物中黃曲霉毒素AFB1的定量檢測(cè)試紙，檢測(cè)限（0.03 ng·mL-1）比常規(guī)膠體金試紙（0.25 ng·mL-1）低近 10倍［30］。Sakurai等利用熒光微球（fluorescent beads）標(biāo)記單抗建立的試紙檢測(cè)方法可以對(duì)鼻拭子樣品對(duì)季節(jié)性流感進(jìn)行快速分型并且可檢測(cè)大多數(shù)H5亞型的流感病毒，檢測(cè)敏感度較膠體金標(biāo)記的試紙檢測(cè)方法提高 10～100倍［31-32］。

Taranova等利用多色（紅綠黃）量子點(diǎn)建立了檢測(cè)牛奶中氧氟沙星、氯霉素、鏈霉素三類(lèi)抗生素的多聯(lián)試紙檢測(cè)方法（含3道 T線(xiàn)），既可以根據(jù)類(lèi)似于交通信號(hào)燈一樣的顏色變化進(jìn)行定性判定，又可以通過(guò)測(cè)量熒光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)，三類(lèi)抗生素檢測(cè)限分別達(dá) 0.3 ng·mL-1、0.12 ng·mL-1、0.2 ng·mL-1，比酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）敏感 80～200倍［33］。Wang等利用多色量子點(diǎn)標(biāo)記不同單抗，噴附兩種單抗混合物作為T(mén)線(xiàn)，通過(guò)檢測(cè)量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度建立了定量多聯(lián)檢測(cè)多種腫瘤標(biāo)志物的試紙檢測(cè)方法，對(duì)甲種胎兒球蛋白和癌胚抗原的檢測(cè)限分別達(dá)到了3 ng·mL-1和2 ng·mL-1。作者提出將T線(xiàn)加寬并使用雙層結(jié)合墊（conjugate pad）可實(shí)現(xiàn)對(duì)3種及3種以上腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行多聯(lián)定量檢測(cè)［34］。

Chen等利用超順磁性納米顆粒標(biāo)記單抗，以雙抗體夾心法制備了檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物——糖類(lèi)抗原72-4（carbohydrate antigen 72-4，CA 72-4）的磁性免疫層析試紙，既可以肉眼判定結(jié)果，也可以使用測(cè)定器（magnetic assay reader，MAR）檢測(cè)磁性強(qiáng)度進(jìn)行定量分析，檢測(cè)限達(dá) 0.38 IU·mL-1［35］。Duan等利用Fe3O4磁納米顆粒代替膠體金制備了納米酶試紙條，應(yīng)用于埃博拉病毒（Ebola virus，EBOV）GP蛋白的檢測(cè)，比常規(guī)試紙檢測(cè)敏感度提升100倍，對(duì)新布尼亞病毒的檢測(cè)敏感度與 ELISA相當(dāng)［36］。該試紙既可以通過(guò)磁納米顆粒分離富集樣品，又可以利用磁納米顆粒的類(lèi)過(guò)氧化物酶活性催化DAB、TMB、AEC等底物增強(qiáng)顯色。

Song等首先向細(xì)菌培養(yǎng)物中加入FITC，非特異性地標(biāo)記O157型大腸桿菌，再利用FITC標(biāo)記的特異性抗體及T線(xiàn)上的特異性單抗建立了檢測(cè)大腸桿菌O157型的試紙檢測(cè)方法，使得檢測(cè)線(xiàn)出現(xiàn)了FITC的熒光信號(hào)增強(qiáng)效果，檢測(cè)敏感度比常規(guī)膠體金試紙高10倍，與 ELISA相當(dāng)［37］。

Hwang等將拉曼訊號(hào)分子（Raman reporter）如Cy5修飾到中空的金納米顆粒表面再與單抗進(jìn)行標(biāo)記，制備了表面增強(qiáng)拉曼光譜標(biāo)記偶聯(lián)物用于葡萄球菌腸毒素 B（staphylococcal enterotoxin B，SEB）的檢測(cè)，檢測(cè)限低達(dá)0.001 ng·mL-1，比常規(guī)ELISA檢測(cè)方法低3個(gè)數(shù)量級(jí)［38］。SEB是一種熱穩(wěn)定型腸毒素，劑量低于1 ng·mL-1即可造成中毒。使用小型輕便的拉曼光譜計(jì)進(jìn)行閱讀，真正實(shí)現(xiàn)了既具高敏感性又能定量地檢測(cè)。Yao等則將熒光染料Cy5修飾的單抗用作檢測(cè)線(xiàn)，使用膠體金標(biāo)記單抗檢測(cè)癌胚抗原，檢測(cè)結(jié)果既可通過(guò)顏色變化進(jìn)行定性判定，又可通過(guò)檢測(cè)Cy5熒光的淬滅進(jìn)行定量分析。該方法與以往嘗試給單抗負(fù)載更多的Cy5以提高試紙檢測(cè)敏感性的方式不同，它利用的是膠體金納米顆粒的熒光淬滅能力，與傳統(tǒng)試紙檢測(cè)方式相比，該法可將檢測(cè)敏感度提高2個(gè)數(shù)量級(jí)［39］。

Han等制備了可定性及半定量檢測(cè)動(dòng)物體液（血液、尿液、乳液）中存在的三類(lèi)（β-激動(dòng)劑、磺胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)）26種藥物的膠體金多聯(lián)檢測(cè)試紙（含3道T線(xiàn)）。他采用凍干的金標(biāo)單抗而非直接噴附在膠金墊上的模式，這使得金標(biāo)單抗與樣品中的被分析物有充分的結(jié)合時(shí)間，從而也使檢測(cè)敏感度提高了 10倍［40］。

Kuang等制備了用于檢測(cè)飲用水中重金屬鉛的顯色增強(qiáng)型的免疫層析試紙，比常規(guī)競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)試紙敏感度提升 4倍，檢測(cè)限達(dá) 0.19 ng·mL-1［41］。該檢測(cè)方法不需要采用TiO2對(duì)樣品中的鉛進(jìn)行富集，采用較大金納米顆粒標(biāo)記山羊抗小鼠抗體作為增強(qiáng)信號(hào)，以較小金納米顆粒標(biāo)記OVA單抗及重金屬鉛單抗，較小的金納米顆粒流動(dòng)較快，當(dāng)其被檢測(cè)線(xiàn)捕獲后，會(huì)出現(xiàn)顯色，當(dāng)較大的金標(biāo)山羊抗小鼠抗體流動(dòng)到檢測(cè)線(xiàn)時(shí)會(huì)與已結(jié)合的金標(biāo)單抗反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)信號(hào)增強(qiáng)。

Wang等將拉曼訊號(hào)分子異硫氰基—孔雀石綠修飾到中空的金納米顆粒表面，金標(biāo)特異性的核酸探針，以生物素標(biāo)記的引物進(jìn)行核酸擴(kuò)增，鏈霉素標(biāo)記的特異寡核苷酸作為檢測(cè)線(xiàn)，建立了檢測(cè)Kaposi肉瘤相關(guān)皰疹病毒DNA和桿菌性血管瘤病DNA的多聯(lián)試紙，檢測(cè)敏感度比利用金納米顆粒及銀納米顆粒建立的多聯(lián)檢測(cè)試紙高1萬(wàn)倍［42］。

鑒于腫瘤特異性標(biāo)志物的缺乏，Warren分別利用血漿凝血酶和間質(zhì)金屬蛋白酶多肽底物將PEG包裹的氧化鐵納米顆粒與生物素標(biāo)記的熒光素進(jìn)行連接，通過(guò)靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)，30 min后收集尿液，利用免疫層析試紙進(jìn)行檢測(cè)，最低檢測(cè)限低于1 nM，實(shí)現(xiàn)了對(duì)血栓塞及直腸癌的篩查［43］。

3 結(jié)語(yǔ)

免疫層析試紙檢測(cè)具有輕簡(jiǎn)、快速、特異、敏感等特點(diǎn)，非常適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和即時(shí)檢測(cè)，已在抗原、抗體及半抗原檢測(cè)領(lǐng)域取得顯著成績(jī)。未來(lái)試紙檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展要在保證傳統(tǒng)優(yōu)勢(shì)的基礎(chǔ)上，利用新材料、新的設(shè)計(jì)策略向更高敏感性、定量、多聯(lián)檢測(cè)方向發(fā)展，試紙的數(shù)字化檢測(cè)可以在互聯(lián)網(wǎng)+時(shí)代背景下對(duì)大規(guī)模群體實(shí)施檢測(cè)，獲取大數(shù)據(jù)，用于建立預(yù)警評(píng)價(jià)信息平臺(tái)。

［1］ Zhang G，Guo J，Wang X.Immunochromatographic lateral flow strip tests［J］.Methods Mol Biol，2009，504：169-183.

［2］ 張改平，郭軍慶，李青梅，等.動(dòng)物疫病免疫試紙快速檢測(cè)技術(shù)概述［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，38（9）：174-176.

［3］ 張改平，職愛(ài)民，鄧瑞廣，等.獸藥殘留的免疫學(xué)快速檢測(cè)技術(shù)概述［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，38（9）：193-196.

［4］ Scolaro KL，Lloyd KB，Helms KL.Devices for home evaluation of women’s health concerns［J］.Am J Health Syst Pharm，2008，65（4）：299-314.

［5］ Reid SM，F(xiàn)erris NP，Brüning A，et al.Development of a rapid chromatographic strip test for the pen-side detection of footand-mouth disease virus antigen［J］.J Virol Methods，2001，96（2）：189-202.

［6］ Niu K，Zheng X，Huang C，et al.A colloidal gold nanoparticlebased immunochromatographic test strip for rapid and convenient detection of Staphylococcus aureus［J］.J Nanosci Nanotechnol，2014，14（7）：5151-5156.

［7］ Gholamzad M，Khatami MR，Ghassemi S，et al.Detection of staphylococcus enterotoxin B（SEB）using an immunochromatographic test strip［J］.Jundishapur JMicrobiol，2015，8（9）：e26793.

［8］ Ma Y，Ni C，Dzakah EE，et al.Development of monoclonal antibodies against HIV-1 p24 protein and its application in colloidal gold immunochromatographic assay for HIV-1 detection［J］.Biomed Res Int，2016，2016：6743904.

［9］ Wu CC，Lin HY，Wang CP，et al.Evaluation of a rapid quantitative determination method of PSA concentration with gold immunochromatographic strips［J］.BMC Urol，2015，15（3）：109.

［10］Yang S，Yang J，Zhang G，et al.Development of an immunochromatographic strip for the detection of antibodies against foot-and-mouth disease virus serotype O［J］.J Virol Methods，2010，165（2）：139-144.

［11］ Yang S，Yang J，Zhang G，et al.Development of a peptidebased immunochromatographic strip for differentiation of serotype O foot-and-mouth disease virus-infected pigs from vaccinated pigs［J］.J Vet Diagn Invest，2010，22（3）：412-415.

［12］Cheng Y，Wang L，Wang C.Immunochromatographic strip assay development for avian influenza antibody detection［J］.Jpn J Vet Res，2015，63（4）：183-190.

［13］Zhang G，Guo J，Wang X，et al.Development and evaluation of an immunochromatographic strip for trichinellosis detection［J］.Vet Parasitol，2006，137（3-4）：286-293.

［14］ Xiang T，Jiang Z，Zheng J，et al.A novel double antibody sand-wich-lateral flow immunoassay for the rapid and simple detection of hepatitis C virus［J］.Int J Mol Med，2012，30（5）：1041-1047.

［15］張改平，王選年，肖肖.瘦肉精的毒害作用及其試紙快速檢測(cè)技術(shù)［J］.中國(guó)動(dòng)物檢疫，2011，28（5）：1-6.

［16］Junhua L，Chunsheng L，Meng W，et al.Development of an ultrasensitive immunochromatographic assay（ICA）strip for the rapid detection of phenylethanolamine A in urine and pork samples［J］.J Food Sci，2015，80（4）：T894-899.

［17］Wang Y，Deng R，Zhand G，et al.Rapid and sensitive detection of the food allergen glycinin in powdered milk using a lateral flow colloidal gold immunoassay strip test［J］.J Agric Food Chem，2015，63（8）：2172-2178.

［18］ Hua X，Yang J，Wang L，et al.Development of an enzyme linked immunosorbent assay and an immunochromatographic assay for detection of organophosphorus pesticides in different agricultural products［J］.PLoS One，2012，7（12）：e53099.

［19］ Guo L，Song S，Liu L，et al.Comparsion of an immunochromatographic strip with ELISA for simultaneous detection of thiamphenicol，florfenicol and chloramphenicol in food samples［J］.Biomed Chromatogr，2015，29（9）：1432-1439.

［20］Taranova NA，Kruhlik AS，Zvereva EA，et al.Highly sensitive immunochromatographic identification of tetracycline antibiotics in milk［J］.Int J Anal Chem，2015，2015：347621.

［21］Chen Y，Li X，He L，et al.Immunoassays for the rapid detection of gentamicin and micronomicin in swine muscle［J］.J AOAC Int，2010，93（1）：335-342.

［22］Sun Y，Xing G，Yang J，et al.Development of an immunochromatographic test strip for simultaneous qualitative and quantitative detection of ochratoxin A and zearalenone in cereal［J］.J Sci Food Agric，2016，96（11）：3673-3678.

［23］Tang Y，Zhai YF，Xiang JJ，et al.Colloidal gold probe-based immunochromatographic assay for the rapid detection of lead ions in water samples［J］.Environ Pollut，2010，158（6）：2074-2077.

［24］Liu X，Xiang JJ，Tang Y，et al.Colloidal gold nanoparticle probe based immunochromatographic assay for the rapid detection of chromium ions in water and serum samples［J］.Anal Chim Acta，2012，745：99-105.

［25］ Niemz A，F(xiàn)erguson TM，Boyle DS.Point-of-care nucleic acid testing for infectious diseases［J］.Trends Biotechnol，2011，29（5）：240-250.

［26］Jauset-Rubio M，Svobodova M，Mairal T，et al.Ultrasensitive，rapid and inexpensive detection of DNA using paper based lateral flow assay［J］.Sci Rep，2016，6：37732.

［27］Roskos K，Hickerson AI，Lu HW，et al.Simple system for isothermal DNA amplification coupled to lateral flow detection［J］.PLoS One，2013，8（7）：e69355.

［28］Anfossi L，Calderara M，Baggiani C，et al.Development and application of a quantitative lateral flow immunoassay for fumonisins in maize［J］.Anal Chim Acta，2010，682（1-2）：104-109.

［29］Hou Y，Wang K，Xiao K，et al.Smartphone-based dual-modality imaging system for quantitative detection of color or fluorescent lateral flow immunochromatographic strips［J］.Nanoscale Res Lett，2017，12（1）：291.

［30］Zhao Y，Liu X，Wang X，et al.Development and evaluation of an up-converting phosphor technology-based lateral flow assay for rapid and quantitative detection of aflatoxin B1 in crops［J］.Talanta，2016，161：297-303.

［31］ Sakurai A，Takayama K，Nomura N，et al.Broad-spectrum detection of H5 subtype influenza A viruses with a new fluorescent immunochromatography system［J］.PLoS One，2013，8（11）：e76753.

［32］Sakurai A，Takayama K，Nomura N，et al.Fluorescent immunochromatography for rapid and sensitive typing of seasonal influenza viruses［J］.PLoS One，2015，10（2）：e0116715.

［33］ Taranova NA，Berlina AN，Zherdev AV，et al.‘Traffic light’immunochromatographic test based on multicolor quantum dots for the simultaneous detection of several antibiotics in milk［J］.Biosens Bioelectron，2015，63：255-261.

［34］Wang C，Hou F，Ma Y.Simultaneous quantitative detection of multiple tumor markers with a rapid and sensitive multicolor quantum dots based immunochromatographic test strip［J］.Biosens Bioelectron，2015，68：156-162.

［35］Chen Y，Wang K，Liu Z，et al.Rapid detection and quantification of tumor marker carbohydrate antigen 72-4（CA72-4）using a superparamagnetic immunochromatographic strip［J］.Anal Bioanal Chem，2016，408（9）：2319-2327.

［36］Duan D，F(xiàn)an K，Zhang D，et al.Nanozyme-strip for rapid local diagnosis of Ebola［J］.Biosens Bioelectron，2015，74：134-141.

［37］Song C，Liu J，Li J，et al.Dual FITC lateral flow immunoassay for sensitive detection of Escherichia coli O157：H7 in food samples［J］.Biosens Bioelectron，2016，85：734-739.

［38］ Hwang J，Lee S，Choo J.Application of a SERS-based lateral flow immunoassay strip for rapid and sensitive detection of Staphylococcal enterotoxin B［J］.Nacoscale，2013，8（22）：11418-11425.

［39］Yao Y，Guo W，Zhang J，et al.Reverse fluorescence enhancement and colorimetric bimodal signal readout immunochromatography test strip for ultrasensitive large-scale screening and postoperative monitoring［J］.ACS App Mater Interfaces，2016，8（35）：22963-22970.

［40］Han S，Zhou T，Yin B，et al.A sensitive and semi-quantitative method for determination of multi-drug residues in animal body fluids using multiplex dipstick immunoassay［J］.Anal Chim Acta，2016，927：64-71.

［41］Kuang H，Xing C，Hao C，et al.Rapid and highly sensitive detection of lead ions in drinking water based on a strip immunosensor［J］.Sensors（Basel），2013，13（4）：4214-4124.

［42］Wang X，Choi N，Cheng Z，et al.Simultaneous detection of dual nucleic acids using a SERS-based lateral flow assay biosensor［J］.Anal Chem，2017，89（2）：1163-1169.

［43］Warren AD，Kwong GA，Wood DK，et al.Point-of-care diagnostics for noncommunicable diseases using synthetic urinary biomarkers and paper microfluidics［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2014，111（10）：3671-3576.

Research Advance of Immunochromatographic Strip Test

WANG Yin-biao1，2，LIU Xiao2，LI Qing-mei2，GUO Jun-qing2
（1.School of Public Health，Xinxiang Medical University，Xinxiang 453003，China；2.Henan Academy of Agricultural Sciences，Henan Provincial Key Laboratory of Animal Immunology，Zhengzhou 450002，China）

R115；R446.6

A

1672-688X（2017）03-0236-05

10.15926／j.cnki.issn1672-688x.2017.03.022

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2016YFD0500700）

2017-06-12

1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453003 2.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，河南省動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南鄭州450002

王寅彪（1986—），男，河南新鄉(xiāng)人，博士，講師，從事衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫工作。

郭軍慶，男，博士，研究員，E-mail：guojunqing2008＠gmail.com