• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    超聲處理對大豆7S蛋白潛在致敏性的影響

    2017-03-31 05:35:02祖琴琴朱杰瑞楊安樹陳紅兵
    食品科學(xué) 2017年5期
    關(guān)鍵詞:致敏性抗原性巰基

    鄧 涵,祖琴琴,朱杰瑞,楊安樹,陳紅兵

    (南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室,南昌大學(xué)中德聯(lián)合研究院,江西 南昌 330047)

    超聲處理對大豆7S蛋白潛在致敏性的影響

    鄧 涵,祖琴琴,朱杰瑞,楊安樹*,陳紅兵

    (南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室,南昌大學(xué)中德聯(lián)合研究院,江西 南昌 330047)

    利用超聲波改性處理大豆7S蛋白,并評估超聲處理產(chǎn)物體外消化性及消化產(chǎn)物抗原性和潛在致敏性的變化。結(jié)果表明,7S蛋白耐唾液、胃液消化,但其在300 W超聲處理80 min后易被十二指腸消化;進一步利用體外免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)G結(jié)合能力評估消化產(chǎn)物抗原性的強弱,超聲處理7S蛋白后,隨著超聲處理時間(0~120 min)的延長,其消化產(chǎn)物的抗原性總體上呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢,在超聲100 min時,消化產(chǎn)物的抗原性最低;利用體外IgE結(jié)合能力評估其潛在致敏性,隨超聲處理時間(0~120 min)的延長,大豆7S蛋白消化產(chǎn)物的IgE結(jié)合能力呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢,超聲80 min時,其消化產(chǎn)物IgE結(jié)合能力最低。研究結(jié)果表明超聲

    大豆7S蛋白;超聲;體外消化性;抗原性;潛在致敏性

    大豆是一種營養(yǎng)豐富的食用蛋白資源。在亞洲,大豆制品消費已有上千年的歷史,并且一直深受廣大消費者的青睞[1-2]。然而,作為8大類過敏食物之一,大豆制品對于大豆過敏人群存在著潛在的危險[3]。據(jù)文獻報道,90%的大豆過敏是由免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig)E介導(dǎo),可引發(fā)產(chǎn)生過敏性皮炎、胃腸道紊亂等一系列的癥狀[4-5]。大豆過敏患者約占食品過敏總?cè)藬?shù)的25%[6]。迄今為止,大豆過敏尚無特效療法。因此,為了減少大豆過敏的危害,利用食品加工方法開發(fā)低致敏或脫敏的大豆制品刻不容緩[7]。大豆含有35%~40%蛋白質(zhì),按照沉降模式,可分為2S、7S、11S和15S 4 個主要組分[8]。在已發(fā)現(xiàn)的38 種大豆過敏原中,Gly m Bd 30K、Gly m Bd 28K和β-伴大豆球蛋白中的Gly m Bd 60K被認為是3 種主要的大豆過敏原,且都存在于大豆7S蛋白中[9]。因此,研究大豆7S蛋白的致敏性控制具有非常重要的意義。

    高強度超聲波是指機械振蕩頻率達到20~100 kHz的聲波,其作為一種高效的食品加工技術(shù)被廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)中。由于超聲波的空化和直進流作用會使能量高度聚集,產(chǎn)生一系列高溫、高壓的物理效應(yīng),可導(dǎo)致部分蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變[10]。有研究表明,超聲處理能使食物過敏原結(jié)構(gòu)的構(gòu)象發(fā)生改變[11]。如利用超聲處理蝦過敏原提取物,再通過蝦過敏患者的血清學(xué)實驗發(fā)現(xiàn):一定條件下超聲處理能夠降低蝦過敏原蛋白的免疫活性,這可能是由于超聲波破壞了蝦過敏原的IgE識別位點[12]。也有研究發(fā)現(xiàn)[13-14],超聲處理可使大豆7S蛋白一級結(jié)構(gòu)因蛋白聚合發(fā)生變化,這些聚合物的形成可能掩蓋抗原表位,進而使大豆的致敏性發(fā)生變化。目前國內(nèi)外借助超聲波加工降低大豆致敏性的研究很少,鑒于超聲處理在降低其他食物過敏性方面有一定成效,所以期待其可以成功應(yīng)用于生產(chǎn)低致敏豆制品。

    基于南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室對超聲強度對大豆蛋白影響的研究,首先將大豆7S蛋白經(jīng)不同時間超聲處理(40 kHz、300 W)[15]。然后經(jīng)體外模擬唾液、胃液和十二指腸液消化,利用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、Tricine-SDS-PAGE方法分析超聲處理對大豆7S蛋白消化性的影響,并采用體外IgG、IgE的結(jié)合能力評估消化產(chǎn)物的抗原性和潛在致敏性,研究旨在探討利用超聲處理降低大豆致敏性的現(xiàn)實意義,為生產(chǎn)低過敏大豆食品提供一定的理論參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    東農(nóng)42大豆 東北農(nóng)業(yè)大學(xué);β-巰基乙醇、考馬斯亮藍G-250、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)標準品、Acr/Bis溶液、過硫酸銨(ammonium persulphate,AP)、預(yù)染Marker、低分子質(zhì)量蛋白Marker 上海生工公司;甲叉丙烯酰胺-三羥甲基氨基甲烷(Bis-Tris)、甘氨脫氧膽酸鈉、牛膽酸鈉胰蛋白酶、卵磷脂、胃蛋白酶、胰蛋白酶、兔抗大豆蛋白血清、辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)標記羊抗兔IgG二抗、鄰苯二胺(o-phenylenediamine,OPD) 美國Sigma公司;其他試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    SB-5200DTD超聲波清洗機 寧波新芝生物科技股份有限公司;TU-1901紫外-可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;PB-10型酸度計 德國Sartorius公司;Allegra 64 R高速冷凍離心機 美國Beckman公司;Power Pac 3000迷你型蛋白電泳儀、Model 1860酶聯(lián)免疫檢測儀、Universal HoodⅡ凝膠成像系統(tǒng) 美國Bio-Rad公司;ImmunoCAP 100熒光免疫分析儀 瑞典法瑪西亞公司。

    1.3 方法

    1.3.1 大豆7S蛋白的提取

    為減輕因研磨發(fā)熱引起的大豆蛋白空間改變,稱取一定質(zhì)量大豆在液氮下進行研磨,以料液比1∶15(m/V)加入正己烷進行脫脂、風(fēng)干,即得脫脂豆粉。大豆7S蛋白提取方法參照文獻[16-17]進行,所得蛋白在經(jīng)透析后置于-20 ℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2 大豆7S蛋白質(zhì)量濃度的測定

    以BSA制標準曲線用Bradford[18]法測定,紫外分光光度計595 nm波長處測其吸光度并繪制標準曲線。用50 mmol/L Tris溶解大豆7S蛋白,混勻,離心(8 000 r/min、4 ℃、30 min)取上清液。將樣品質(zhì)量濃度稀釋到BSA蛋白標準曲線的范圍內(nèi),取2.5 mL考馬斯亮藍G-250溶液與0.5 mL待測樣品混勻,室溫條件下靜置3 min后測定吸光度,根據(jù)待測蛋白的稀釋倍數(shù)和標準曲線計算樣品質(zhì)量濃度。

    1.3.3 超聲處理

    稀釋大豆7S蛋白至質(zhì)量濃度為6 mg/mL,將其置于超聲裝置中40 kHz、300 W強度下分別處理0、20、40、60、80、100、120 min,處理后置于-20 ℃條件下凍存。

    1.3.4 體外模擬消化

    參照Amigo-Benavent等[19]的方法并略有調(diào)整。

    1.3.4.1 模擬唾液消化

    取1 mL超聲處理后7S蛋白置于37 ℃水浴中,先加入1 mL唾液緩沖液反應(yīng)15 min,再加入2.5 mL α-淀粉酶溶液(150 U)反應(yīng)2 min,用1 mol/L HCl調(diào)pH值至3.5終止反應(yīng)。

    1.3.4.2 模擬胃液消化

    取1 mL上述唾液消化產(chǎn)物置于37 ℃水浴中,與0.5 mL胃蛋白酶液,250 μL卵磷脂和250 μL NaCl(35 mmol/L,pH 2.0)反應(yīng)60 min,用1 mol/L NaHCO3調(diào)pH值至7.0以終止反應(yīng)。

    1.3.4.3 模擬十二指腸液消化

    取2 mL上述胃消化產(chǎn)物,與0.25 mol/L Bis-Tris(pH 6.5)、1 mol/L CaCl2、0.250 mol/L膽鹽混合,置于37 ℃水浴中預(yù)熱15 min后,加入0.5 mL胰蛋白酶、6 μL α-糜蛋白酶和2.784 mL超純水反應(yīng)60 min后,再置于85 ℃水浴鍋中滅酶處理5 min。

    1.3.5 SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE

    選用質(zhì)量分數(shù)為12%分離膠、4%濃縮膠進行SDS-PAGE,檢測大豆7S蛋白經(jīng)超聲處理以及體外消化后分子質(zhì)量的變化。選用質(zhì)量分數(shù)為4%濃縮膠、10%夾層膠和16.5%致密膠進行Tricine-SDS-PAGE,分析消化產(chǎn)物中小分子蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量。濃縮膠恒流6 mA,分離膠電流調(diào)至12 mA,直至溴酚藍指示劑涌動至分離膠底部,電泳結(jié)束。

    1.3.6 游離巰基含量分析

    采用Ellman[20]的方法:取不同超聲時間處理的大豆7S蛋白溶于pH 8.0的緩沖液中(0.086 mol/L Tris-0.09 mol/L甘氨酸-4 mmol/L乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)),使其蛋白終質(zhì)量濃度為2 mg/mL。向3 mL蛋白液中加入0.03 mL埃爾曼試劑,兩者迅速混合,在20 ℃避光條件下靜置反應(yīng)15 min,在紫外分光光度計412 nm波長處讀取吸光度,設(shè)置3 組平行。游離巰基的含量通過所測吸光度與摩爾消光系數(shù)13 600 L/mol的比值計算得出,單位為μmol/g。

    1.3.7 體外IgG結(jié)合能力的評估

    用方正滴定法確定最佳包被蛋白質(zhì)量濃度和一抗稀釋倍數(shù)[21]。采用競爭抑制酶聯(lián)免疫吸附測定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)法測定IgG結(jié)合能力來評估消化產(chǎn)物抗原性的強弱。具體操作步驟如下:酶標板每孔加入最佳包被蛋白質(zhì)量濃度的包被液,4 ℃條件下過夜。次日加入磷酸鹽吐溫(PBST)緩沖液洗3 次后,加入250 μL 1%的明膠在37 ℃條件下封阻1 h,洗滌3 次,置于4 ℃?zhèn)溆?。取另一塊酶標板,明膠封阻1 h,洗滌3 次后,加入體積比1∶1的不同質(zhì)量濃度梯度的競爭抗原(不同超聲處理時間的大豆7S蛋白)和一抗(兔抗大豆蛋白血清),37 ℃條件下溫育1 h。從該板每孔中吸取100 μL轉(zhuǎn)移至第一塊板內(nèi),37 ℃條件下溫育1 h,洗滌3 次。加入羊抗兔HRP酶標二抗(1∶5 000),37 ℃條件下溫育1 h,加入100 μL OPD顯色底物,避光反應(yīng)15 min后加入50 μL H2SO4溶液終止反應(yīng),在酶標儀490 nm波長處測光密度值。按式(1)計算IgG抑制率。

    式中:B為不同超聲時間下競爭蛋白的OD值;B0為無競爭蛋白時的OD值。

    1.3.8 體外IgE結(jié)合能力的評估

    利用ImmunoCAP 100熒光免疫分析儀篩選大豆過敏血清,以過敏患者血清作為一抗,構(gòu)建血清池。實驗中的7 位大豆過敏患者信息見表1。

    表 1 大豆過敏患者信息Table 1 Information about the patients with soybean allergy

    具體方法與1.3.7節(jié)相似,部分稍作如下改變:包被未加工的7S蛋白和加工后的競爭蛋白質(zhì)量濃度為15 μg/mL;一抗使用1∶15稀釋的過敏患者人血清,與超聲處理后的7S蛋白37 ℃溫育1 h;二抗使用1∶5 000稀釋的生物素標記的IgE二抗,37 ℃溫育2 h,洗板結(jié)束后每孔加入100 μL 1∶60稀釋的HRP-鏈霉素標記的親和素,37 ℃溫育1 h。按式(2)計算IgE抑制率。

    式中:B為不同超聲時間下競爭蛋白的OD值;B0為無競爭蛋白時的OD值。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

    所有實驗至少重復(fù)3 次,數(shù)據(jù)分析采用SPSS統(tǒng)計分析軟件。統(tǒng)計顯著性分析用單因素方差分析,以P<0.05表明具有顯著性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 大豆7S蛋白質(zhì)量濃度的確定

    采用Bradford法繪制標準曲線得到線性回歸方程:y=0.002 2x+0.001 9(R2=0.999 2),測得7S蛋白質(zhì)量濃度為25.10 mg/mL。

    2.2 超聲處理大豆7S蛋白的電泳圖

    圖 1 超聲處理7S蛋白SDS-PAGE圖Fig. 1 SDS-PAGE patterns of 7S globulin subjected to ultrasonic treatment

    由圖1可以看出,超聲處理前后大豆7S蛋白電泳條帶的組成與灰度并未發(fā)生顯著變化,且隨著超聲時間的延長,SDS-PAGE顯示的超聲處理后大豆7S蛋白條帶和灰度與未處理加工的大豆7S蛋白幾乎一致,表明大豆7S蛋白超聲處理后,其分子質(zhì)量并未發(fā)生顯著變化,這與Karki等[22]的研究結(jié)果相似。

    圖 2 超聲處理對大豆7S蛋白游離巰基的影響Fig. 2 Free -SH content in soybean 7S protein subjected to ultrasonic treatment

    2.3 超聲處理前后大豆7S蛋白游離巰基變化游離巰基含量變化可反映蛋白的變性程度,且對蛋白的功能性質(zhì)有關(guān)鍵的影響[23]。經(jīng)過不同時間超聲處理的大豆7S蛋白游離巰基的變化如圖2所示。隨著超聲處理時間的延長,游離巰基含量變化趨勢為先增加后減少。超聲0~80 min時,游離巰基含量增加,這可能是由于超聲處理產(chǎn)生的空穴現(xiàn)象下的紊流、高壓和剪切力的作用使掩埋的巰基暴露,或空穴作用破壞了蛋白分子中的二硫鍵,從而產(chǎn)生了新的游離巰基[11]。80 min時,巰基含量達到最高值,蛋白質(zhì)破壞程度達到最大。超聲時間超過80 min時,巰基含量反而呈現(xiàn)下降趨勢。這可能是由于在高密度超聲處理形成的空穴作用中產(chǎn)生了瞬態(tài)自由基(?OH、H?),這些自由基經(jīng)交叉反應(yīng)又產(chǎn)生氫過氧化物,氫過氧化物進一步氧化巰基,形成新的二硫鍵,該變化可導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生折疊[24]。

    2.4 體外模擬消化

    2.4.1 模擬唾液和胃液消化

    圖 3 超聲處理7S蛋白經(jīng)體外模擬唾液(A)和胃液(B)消化后電泳圖Fig. 3 Effect of ultrasonic treatment on salivary (A) and gastric (B) digestion of 7S globulin

    如圖3A和3B所示,與未超聲的大豆7S蛋白比較,不同超聲時間處理后的7S蛋白經(jīng)唾液和胃液消化后蛋白分子質(zhì)量并未發(fā)生明顯變化,同時,其條帶灰度也與未處理蛋白基本保持一致。結(jié)果表明:超聲處理對大豆7S蛋白在唾液和胃液中消化性的影響沒有顯著差異。Bowman等[25]指出食物中致敏強的過敏原一般具有抗消化性。本研究電泳結(jié)果也表明在口腔和胃消化階段,7S蛋白作為一種強致敏性的過敏原,具有較強的耐唾液和胃液消化性。

    2.4.2 模擬十二指腸液消化

    圖 4 超聲處理7S蛋白腸消化產(chǎn)物的SDS-PAGE(A)和Tricine-SDSPAGE(B)圖Fig. 4 SDS-PAGE (A) and Tricine-SDS-PAGE (B) patterns of intestinal digestion products of 7S globulin subjected to ultrasonic treatment

    如圖4所示,未加工和不同時間超聲處理的大豆7S蛋白經(jīng)十二指腸液中消化后,其蛋白條帶發(fā)生顯著變化,產(chǎn)生一些分子質(zhì)量<26 kD的小分子片段;同時,蛋白灰度減弱,即消化后殘留的蛋白量呈現(xiàn)降低趨勢,且在超聲80 min時,大豆7S蛋白條帶的灰度達到最弱。結(jié)果表明超聲處理的大豆7S蛋白易被十二指腸消化,超聲處理80 min時最易被消化,可能是由于此時超聲處理后的蛋白質(zhì)破壞程度達到最大,因此,最易被十二指腸液消化,這可從上述游離巰基結(jié)果得到證明。

    2.5 超聲處理大豆7S蛋白的消化產(chǎn)物與IgG結(jié)合能力

    過敏原的抗原決定簇在經(jīng)消化道進入免疫系統(tǒng)前只有保持足夠完整又有免疫原性的蛋白或蛋白片段才具有潛在致敏的可能[26]。在利用間接競爭ELISA評估抗原性實驗中,常用使IgG的抑制率達到50%時對應(yīng)的競爭抗原的濃度即半抑制濃度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值來表征IgG結(jié)合能力進而表征抗原性的強弱,IC50值越大,達到半抑制率所需競爭抗原濃度越高,即抗原性越弱。實驗結(jié)果如圖5所示,IC50值均大于0,超聲處理(0~120 min)后的7S蛋白消化產(chǎn)物具有免疫原性。隨著超聲處理時間的延長,大豆7S蛋白的抗原性總體上呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢,且80 min時IC50值達到最小,約為5 μg/mL,此時7S蛋白的抗原性達到最高。

    圖 5 超聲處理7S蛋白消化產(chǎn)物的IgG結(jié)合能力Fig. 5 IgG-binding capacity of digestion products of 7S globulin subjected to ultrasonic treatment

    2.6 超聲處理大豆7S蛋白的消化產(chǎn)物與IgE結(jié)合能力

    通過比較不同時間超聲處理后消化產(chǎn)物所對應(yīng)的IgE抑制率來評估7S蛋白的潛在致敏性。抑制率越低,競爭抗原與過敏患者人血清的結(jié)合能力越弱,即潛在致敏性越低。實驗結(jié)果如圖6所示,隨著7S蛋白超聲處理時間的延長,其小腸消化產(chǎn)物的IgE抑制率總體呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢。與未超聲處理(對照組)相比,分別經(jīng)超聲處理20、40 min后,7S蛋白腸消化產(chǎn)物的IgE抑制率有顯著差異(P<0.05),40 min時,其潛在致敏性最高;延長超聲時間,7S蛋白消化產(chǎn)物的IgE抑制率呈下降趨勢,與超聲處理40 min的樣品相比,超聲處理80 min后,其消化產(chǎn)物的IgE抑制率有極顯著差異(P<0.01),此時,IgE抑制率達到了最低。這可能與經(jīng)80 min超聲作用后,大豆7S蛋白最易被十二指腸消化,導(dǎo)致其過敏原結(jié)構(gòu)上的改變有關(guān)。

    圖 6 超聲處理7S蛋白消化產(chǎn)物的IgE結(jié)合能力Fig. 6 IgE-binding capacity of digestion products of 7S globulin subjected to ultrasonic treatment

    3 討論與結(jié)論

    超聲已被廣泛應(yīng)用于食品加工中,但在食物過敏方面的研究卻很少。Li Zhenxin等[12]利用超聲波較全面地分析了其對蝦的過敏原的影響,并取得較好的效果。Kasera[14]、Gulseren[24]等的研究結(jié)果都表明超聲會影響蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變,而食物過敏原大部分是蛋白質(zhì),因此通過超聲處理改變過敏原結(jié)構(gòu),進而引起其致敏性變化的方法具有可行性。本研究首先對大豆致敏原7S蛋白進行不同時間的超聲處理,測定其表面游離巰基含量的變化來分析蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的改變,然后模擬人體胃腸消化,分析其消化產(chǎn)物致敏性的變化。

    隨著超聲時間的延長,游離巰基的含量先升高又降低,可能是超聲處理使7S蛋白結(jié)構(gòu)展開,部分二硫鍵斷裂,形成新的巰基,繼續(xù)增加超聲時間,巰基重新締合形成二硫鍵,過敏蛋白發(fā)生進一步折疊,從而對某些過敏表位產(chǎn)生影響,這和孫英杰[27]的研究結(jié)果一致。國內(nèi)外許多文獻采用體外模擬胃腸液消化過敏原,并分析其消化產(chǎn)物的抗原性與致敏性變化,該方法被普遍認為是體外評估過敏原致敏性的一個重要手段[28],研究結(jié)果顯示:超聲處理對大豆7S蛋白在唾液和胃液中消化的影響不顯著,但在十二指腸消化中,經(jīng)超聲處理后的蛋白可以被消化成小分子物質(zhì)。在80 min時,7S蛋白消化產(chǎn)物的條帶和灰度發(fā)生顯著變化,消化程度最為顯著,這可能是因為此時過敏原蛋白的三級結(jié)構(gòu)展開程度最大,使更多的水解位點暴露在分子表面,促進亞基與水解酶充分接觸。大豆過敏是由IgE介導(dǎo)的Ⅰ型超敏反應(yīng)[5],而致敏原要保持完整的抗原決定簇才有致敏的可能性。從抗原性與致敏性的結(jié)果可以看出,不同超聲時間處理7S蛋白消化產(chǎn)物都存在潛在致敏性,在超聲處理時間40 min時,7S蛋白的抗原性、致敏性增強到最高點,可能與超聲處理使過敏蛋白結(jié)構(gòu)展開,暴露出更多IgE結(jié)合表位有關(guān);隨著超聲時間的繼續(xù)延長,7S蛋白的致敏性反而降低,在80 min時致敏性顯著降低,這可能是由于超聲處理時間的延長,使過敏蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生折疊,從而掩埋了某些表位。過敏反應(yīng)是一個十分復(fù)雜的過程,超聲處理引起過敏原致敏性變化的機制還有待深入的研究。

    本實驗利用不同時間的超聲處理對大豆7S蛋白的潛在致敏性進行研究,7S蛋白經(jīng)過40 kHz、300 W超聲強度加工處理80 min時,其三級結(jié)構(gòu)破壞程度最大,也更易被十二指腸消化,且消化產(chǎn)物的潛在致敏性降至最低。

    [1] YANG A, YU X W, ZHENG A, et al. Rebalance between 7S and 11S globulins in soybean seeds of differing protein content and 11SA4[J]. Food Chemistry, 2016, 210: 148-155. DOI:10.1016/ j.foodchem.2016.04.095.

    [2] NISHINARI K, FANG Y, GUO S, et al. Soy proteins: a review on composition, aggregation and emulsif i cation[J]. Food Hydrocolloids, 2014, 39: 301-318. DOI:10.1016/j.foodhyd.2014.01.013.

    [3] VERMA A K, KUMAR S, DAS M, et al. A comprehensive review of legume allergy[J]. Clinical Reviews in Allergy & Immunology, 2013, 45(1): 30-46. DOI:10.1007/s12016-012-8310-6.

    [4] 田斌強, 鄧乾春, 謝筆鈞, 等. 食物過敏原與過敏性消除方法[J]. 食品科技, 2007, 32(11): 9-13. DOI:10.3969/j.issn.1005-9989.2007.11.003.

    [5] WANG T, QIN G X, SUN Z W, et al. Advances of research on glycinin and β-conglycinin: a review of two major soybean allergenic proteins[J]. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 2014, 54(7): 850-862. DOI:10.1080/10408398.2011.613534.

    [6] KLEINE-TEBBE J, WANGORSCH A, VOGEL L, et al. Severe oral allergy syndrome and anaphylactic reactions caused by a Bet v 1- related PR-10 protein in soybean, SAM22[J]. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2002, 110(5): 797-804. DOI:10.1067/ mai.2002.128946.

    [7] 楊慧, 陳紅兵, 程偉, 等. 大豆主要過敏原及其脫敏方法的研究進展[J].食品科學(xué), 2011, 32(21): 273-277. DOI:10.1067/mai.2002.128946.

    [8] L’HOCINE L, BOYE J I. Allergenicity of soybean: new developments in identification of allergenic proteins, crossreactivities and hypoallergenization technologies[J]. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 2007, 47(2): 127-143. DOI:10.1080/10408390600626487.

    [9] WU Y M, GUAN R X, LIU Z X, et al. Synthesis and degradation of the major allergens in developing and germinating soybean seed[J]. Journal of Integrative Plant Biology, 2012, 54(1): 4-14. DOI:10.1111/ j.1744-7909.2011.01092.x.

    [10] SHRIVER S K, YANG W W. Thermal and nonthermal methods for food allergen control[J]. Food Engineering Reviews, 2011, 3(1): 26-43. DOI:10.1007/s12393-011-9033-9.

    [11] 郭孝武, 馮岳松. 超聲提取分離[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2008: 10-25.

    [12] LI Z X, LIN H, CAO L M, et al. Effect of high intensity ultrasound on the allergenicity of shrimp[J]. Journal of Zhejiang University Science B, 2006, 7(4): 251-256. DOI:10.1631/jzus.2006.B0251.

    [13] 祖琴琴, 華萍, 龔育清, 等. 基于食品物理加工技術(shù)對大豆過敏原的影響[J]. 食品工業(yè)科技, 2014, 35(5): 360-364. DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2014.05.064.

    [14] KASERA R, SINGH A B, KUMAR R, et al. Effect of thermal processing and γ-irradiation on allergenicity of legume proteins[J]. Food and Chemical Toxicology, 2012, 50(10): 3456-3461. DOI:10.1016/j.fct.2012.07.031.

    [15] YANG H, GAO J Y, YANG A S, et al. The ultrasound-treated soybean seeds improve edibility and nutritional quality of soybean sprouts[J]. Food Research International, 2015, 77: 704-710. DOI:10.1016/ j.foodres.2015.01.011.

    [16] LIU C, WANG H L, CUI Z M, et al. Optimization of extraction and isolation for 11S and 7S globulins of soybean seed storage protein[J]. Food Chemistry, 2007, 102(4): 1310-1316. DOI:10.1016/ j.foodchem.2006.07.017.

    [17] NAGANO T, HIROTSUKA M, MORI H, et al. Dynamic viscoelastic study on the gelation of 7S globulin from soybeans[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1992, 40(6): 941-944. DOI:10.1021/ jf00018a004.

    [18] BRADFORD M M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of proteindye binding[J]. Analytical biochemistry, 1976, 72(1/2): 248-254. DOI:10.1016/0003-2697(76)90527-3.

    [19] AMIGO-BENAVENT M, CLEMENTE A, FERRANTI P, et al. Digestibility and immunoreactivity of soybean β-conglycinin and its deglycosylated form[J]. Food Chemistry, 2011, 129(4): 1598-1605. DOI:10.1016/j.foodchem.2011.06.015.

    [20] ELLMAN G L. Tissue sulfhydryl groups[J]. Archives of Biochemistry and Biophysics, 1959, 82(1): 70-77. DOI:10.1016/0003-9861(59)90090-6.

    [21] 袁水林, 熊鼎, 陳紅兵, 等. 間接競爭 ELISA法檢測牛乳中β-乳球蛋白含量的準確性評價[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(18): 100-104. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201418020.

    [22] KARKI B, LAMSAL B P, GREWELL D, et al. Functional properties of soy protein isolates produced from ultrasonicated defatted soy fl akes[J]. Journal of the American Oil Chemists’ Society, 2009, 86(10): 1021-1028. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201418020.

    [23] 涂宗財, 張雪春, 劉成梅, 等. 超高壓微射流對花生蛋白結(jié)構(gòu)的影響[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報, 2008, 24(9): 306-308.

    [24] GULSEREN I, GUZEY D, BRUCE B D, et al. Structural and functional changes in ultrasonicated bovine serum albumin solutions[J]. Ultrason Sonochem, 2007, 14(2): 173-183. DOI:10.1016/ j.ultsonch.2005.07.006.

    [25] BOWMAN C C, SELGRADE M K. Differences in allergenic potential of food extracts following oral exposure in mice reflect differences in digestibility: potential approaches to safety assessment[J]. Toxicological Sciences, 2008, 102(1): 100-109. DOI:10.1093/toxsci/ kfm288.

    [26] 王翠燕, 孫璐, 周催, 等. BALB/c小鼠動物模型評價食物過敏性的可行性研究[J]. 中國食品學(xué)報, 2015, 15(11): 7-15. DOI:10.16429/ j.1009-7848.2015.11.002.

    [27] 孫英杰. 超聲波處理對大豆分離蛋白結(jié)構(gòu)和功能性質(zhì)影響研究[D].哈爾濱: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué), 2014: 31.

    [28] ASTWOOD J D, LEACH J N, FUCHS R L. Stability of food allergens to digestion in vitro[J]. Nature Biotechnology, 1996, 14(10): 1269-1273. DOI:10.1038/nbt1096-1269.

    Effect of Ultrasonic Treatment on the Potential Allergenicity of Soybean 7S Globulin

    DENG Han, ZU Qinqin, ZHU Jierui, YANG Anshu*, CHEN Hongbing
    (State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Sino-German Joint Research Institute, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

    Soybean 7S globulin was modif i ed by ultrasonic treatment, and the changes in its in vitro digestibility, and the antigenicity and potential allergenicity of its digestion products were evaluated. Results showed that the 7S globulin was resistant to saliva and gastric juice, but it was easy to be digested in the duodenum after ultrasonic processing 300 W for 80 min. The antigenicity assessed by in vitro IgG binding showed that the antigenicity of the digestion products increased fi rstly but then decreased as the ultrasonic processing time (0?120 min) increased, reaching the lowest level at 100 min. The potential allergenicity assessed by in vitro IgE binding exhibited an initial increase followed by a decrease with ultrasonic processing time up to 120 min, reaching the lowest level at 80 min. These results suggest that soybean 7S globulin with ultrasonic processing for 80 min has a lower potential allergenicity.

    soybean 7S globulin; ultrasonic; in vitro digestibility; antigenicity; potential allergenicity

    10.7506/spkx1002-6630-201705006

    TS214.2

    A

    1002-6630(2017)05-0032-06

    鄧涵, 祖琴琴, 朱杰瑞, 等. 超聲處理對大豆7S蛋白潛在致敏性的影響[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(5): 32-37. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201705006. http://www.spkx.net.cn

    DENG Han, ZU Qinqin, ZHU Jierui, et al. Effect of ultrasonic treatment on the potential allergenicity of soybean 7S globulin[J]. Food Science, 2017, 38(5): 32-37. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201705006. http://www.spkx.net.cn

    2016-06-30

    國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(2013AA102205);國家自然科學(xué)基金地區(qū)科學(xué)基金項目(31460439);江西省科技廳對外科技合作計劃項目(20142BDH80002);江西省青年科學(xué)家培養(yǎng)對象計劃項目(20122BCB23006);江西省科技廳知識產(chǎn)權(quán)局項目(20143BBM26107)

    鄧涵(1996—),女,碩士研究生,研究方向為食品安全。E-mail:denghan1996@163.com

    *通信作者:楊安樹(1972—),男,教授,博士,研究方向為食品科學(xué)。E-mail:yanganshu@ncu.edu.cn

    80 min具有降低大豆7S蛋白潛在致敏性的作用。

    猜你喜歡
    致敏性抗原性巰基
    花生致敏蛋白Ara h1與咖啡酸互作對其抗原性的影響
    一類具有抗原性的腫瘤-免疫系統(tǒng)的定性分析
    新型加工技術(shù)可降低花生致敏性
    鴿毛滴蟲黏附蛋白AP33的理化特性與抗原性分析及細胞表位預(yù)測
    全蒸發(fā)頂空—氣相色譜—質(zhì)譜法快速測定塑料玩具中的致敏性芳香劑
    淺議葡萄酒生產(chǎn)中使用的潛在食品過敏原及標識管理
    高致病性PRRSV JL-04/12株核衣殼蛋白的表達與抗原性分析
    巰基-端烯/炔點擊反應(yīng)合成棒狀液晶化合物
    海洋中β-二甲基巰基丙酸內(nèi)鹽降解過程的研究進展
    巰基和疏水性對蛋白質(zhì)乳化及凝膠特性的影響
    午夜a级毛片| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 天天添夜夜摸| 黄色女人牲交| 欧美黑人精品巨大| 午夜免费观看网址| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 成人三级黄色视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲午夜理论影院| 亚洲av成人一区二区三| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 啦啦啦在线免费观看视频4| 真人做人爱边吃奶动态| 男男h啪啪无遮挡| 久久青草综合色| 亚洲在线自拍视频| 亚洲情色 制服丝袜| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日韩大尺度精品在线看网址 | 久久午夜综合久久蜜桃| 成人影院久久| 国产成人av激情在线播放| 欧美中文综合在线视频| 国产精品永久免费网站| 国产一区二区三区视频了| 在线观看免费视频网站a站| 在线观看免费视频网站a站| 天堂动漫精品| 亚洲性夜色夜夜综合| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产欧美日韩一区二区三| 午夜免费观看网址| 久久久久久久午夜电影 | 咕卡用的链子| 国产1区2区3区精品| 无限看片的www在线观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 又紧又爽又黄一区二区| 中文亚洲av片在线观看爽| 大型黄色视频在线免费观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产精品 国内视频| 久99久视频精品免费| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 色播在线永久视频| 国产精品免费视频内射| 免费在线观看影片大全网站| 大型黄色视频在线免费观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日韩成人在线观看一区二区三区| 在线观看免费视频网站a站| 国产黄a三级三级三级人| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久中文字幕一级| 丝袜人妻中文字幕| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产成人精品久久二区二区91| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美色视频一区免费| 免费在线观看亚洲国产| 欧美大码av| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 97人妻天天添夜夜摸| 丝袜在线中文字幕| 在线视频色国产色| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲精品一二三| 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 中文字幕人妻熟女乱码| 国产亚洲欧美98| 国产高清videossex| 丁香六月欧美| 搡老熟女国产l中国老女人| 午夜两性在线视频| 97碰自拍视频| 久热这里只有精品99| 国产三级黄色录像| 日韩欧美免费精品| 亚洲黑人精品在线| 久99久视频精品免费| av网站在线播放免费| xxxhd国产人妻xxx| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 老司机亚洲免费影院| 亚洲成人久久性| av视频免费观看在线观看| 久久中文字幕一级| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 成人亚洲精品av一区二区 | 久久人人97超碰香蕉20202| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲伊人色综图| 1024香蕉在线观看| 五月开心婷婷网| 交换朋友夫妻互换小说| 久久精品成人免费网站| 性欧美人与动物交配| 日日爽夜夜爽网站| 色婷婷久久久亚洲欧美| 曰老女人黄片| www.自偷自拍.com| 国产欧美日韩一区二区三| 国产精品日韩av在线免费观看 | 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 五月开心婷婷网| cao死你这个sao货| 制服诱惑二区| 首页视频小说图片口味搜索| 精品一区二区三区av网在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 午夜激情av网站| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日韩精品青青久久久久久| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 成年人免费黄色播放视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产色视频综合| 很黄的视频免费| 级片在线观看| 高清欧美精品videossex| 999精品在线视频| 午夜免费成人在线视频| 另类亚洲欧美激情| 美女高潮到喷水免费观看| 日韩av在线大香蕉| 在线观看日韩欧美| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 免费观看精品视频网站| 欧美日韩精品网址| 不卡一级毛片| 两个人免费观看高清视频| 国产有黄有色有爽视频| 一级,二级,三级黄色视频| 操出白浆在线播放| 欧美另类亚洲清纯唯美| 一区二区三区国产精品乱码| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| www.自偷自拍.com| 一进一出好大好爽视频| а√天堂www在线а√下载| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲在线自拍视频| 咕卡用的链子| 12—13女人毛片做爰片一| 国产主播在线观看一区二区| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产精品 国内视频| 精品国产一区二区久久| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 香蕉久久夜色| 亚洲精品在线美女| 精品人妻在线不人妻| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产单亲对白刺激| 一个人观看的视频www高清免费观看 | aaaaa片日本免费| 精品一区二区三区av网在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 自线自在国产av| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲七黄色美女视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品国内亚洲2022精品成人| 一级a爱视频在线免费观看| 国产视频一区二区在线看| 一级a爱片免费观看的视频| videosex国产| 成年人黄色毛片网站| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 日韩欧美国产一区二区入口| 老汉色av国产亚洲站长工具| 视频在线观看一区二区三区| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产激情欧美一区二区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 午夜精品在线福利| 一级片'在线观看视频| 美国免费a级毛片| 婷婷精品国产亚洲av在线| 一二三四社区在线视频社区8| av网站免费在线观看视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 麻豆一二三区av精品| 亚洲精品在线美女| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 十八禁人妻一区二区| √禁漫天堂资源中文www| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 日韩精品青青久久久久久| 一进一出好大好爽视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 午夜91福利影院| 午夜免费成人在线视频| 亚洲人成77777在线视频| 国产国语露脸激情在线看| 我的亚洲天堂| 国产精品1区2区在线观看.| 在线观看一区二区三区| 在线看a的网站| 99久久精品国产亚洲精品| 在线国产一区二区在线| 自线自在国产av| 成人免费观看视频高清| 99热国产这里只有精品6| 国产精品 欧美亚洲| 少妇 在线观看| 亚洲片人在线观看| 久久99一区二区三区| 婷婷丁香在线五月| 成人永久免费在线观看视频| 在线视频色国产色| 国产有黄有色有爽视频| www国产在线视频色| 精品国产国语对白av| 亚洲精品一区av在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 桃色一区二区三区在线观看| 久久精品国产综合久久久| 日本五十路高清| 露出奶头的视频| 极品人妻少妇av视频| 男男h啪啪无遮挡| 大型黄色视频在线免费观看| 午夜福利在线免费观看网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 香蕉久久夜色| 亚洲成人免费av在线播放| 99国产综合亚洲精品| 操美女的视频在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | avwww免费| 久久久久久久精品吃奶| 成人亚洲精品av一区二区 | 亚洲av熟女| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 女性被躁到高潮视频| 国产精品综合久久久久久久免费 | 日本五十路高清| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 精品电影一区二区在线| 黄色视频不卡| 99热国产这里只有精品6| 精品国内亚洲2022精品成人| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 交换朋友夫妻互换小说| 久久久国产成人精品二区 | 午夜亚洲福利在线播放| 欧美成人免费av一区二区三区| 黄色成人免费大全| 午夜福利,免费看| 成人黄色视频免费在线看| 久久青草综合色| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 嫩草影院精品99| 久久久久国产一级毛片高清牌| 老司机在亚洲福利影院| 88av欧美| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美最黄视频在线播放免费 | 亚洲av成人av| 一进一出抽搐动态| 在线观看免费高清a一片| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久香蕉精品热| 亚洲欧美激情在线| 久久狼人影院| 国产精品成人在线| 一级毛片精品| 波多野结衣av一区二区av| 大陆偷拍与自拍| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 极品人妻少妇av视频| 又黄又粗又硬又大视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 大型黄色视频在线免费观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 色尼玛亚洲综合影院| 999久久久精品免费观看国产| 国产三级黄色录像| 亚洲成国产人片在线观看| 成年版毛片免费区| 亚洲av电影在线进入| 成年女人毛片免费观看观看9| a级毛片黄视频| 88av欧美| 国产97色在线日韩免费| 水蜜桃什么品种好| 欧美激情 高清一区二区三区| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 88av欧美| 欧美丝袜亚洲另类 | 无遮挡黄片免费观看| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美最黄视频在线播放免费 | 精品国产乱码久久久久久男人| 伦理电影免费视频| 亚洲 国产 在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 黄片播放在线免费| 97碰自拍视频| 亚洲精华国产精华精| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 欧美一区二区精品小视频在线| 日韩欧美免费精品| 国产在线精品亚洲第一网站| 好男人电影高清在线观看| 欧美日韩乱码在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲少妇的诱惑av| av超薄肉色丝袜交足视频| 脱女人内裤的视频| 亚洲自拍偷在线| a在线观看视频网站| 丁香六月欧美| 亚洲美女黄片视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久 成人 亚洲| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产成人精品久久二区二区91| 黄片播放在线免费| 亚洲自拍偷在线| 国产成人影院久久av| 亚洲 欧美一区二区三区| 男女午夜视频在线观看| 日韩人妻精品一区2区三区| av国产精品久久久久影院| 亚洲第一av免费看| 黄片小视频在线播放| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久亚洲精品不卡| 亚洲精品中文字幕在线视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 美女午夜性视频免费| 99精品久久久久人妻精品| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 9热在线视频观看99| 国产不卡一卡二| 少妇被粗大的猛进出69影院| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲自拍偷在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 精品电影一区二区在线| 久久久精品欧美日韩精品| 美女扒开内裤让男人捅视频| 午夜视频精品福利| 久久久久久久久久久久大奶| 一级毛片精品| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美色视频一区免费| 亚洲欧美一区二区三区久久| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 男人舔女人的私密视频| 国产成人精品久久二区二区91| 可以在线观看毛片的网站| 啦啦啦免费观看视频1| av福利片在线| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 黄片播放在线免费| 天天影视国产精品| 欧美精品一区二区免费开放| 无限看片的www在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲av第一区精品v没综合| 热re99久久国产66热| 在线免费观看的www视频| 欧美中文日本在线观看视频| 国产99白浆流出| 啪啪无遮挡十八禁网站| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美激情 高清一区二区三区| 成年女人毛片免费观看观看9| 超碰97精品在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久亚洲精品不卡| 99久久精品国产亚洲精品| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 中亚洲国语对白在线视频| 日韩免费高清中文字幕av| 99国产精品免费福利视频| 91麻豆av在线| 波多野结衣高清无吗| 后天国语完整版免费观看| 水蜜桃什么品种好| 黄频高清免费视频| 亚洲专区中文字幕在线| 久久九九热精品免费| 九色亚洲精品在线播放| 91av网站免费观看| 国产精品电影一区二区三区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 99国产极品粉嫩在线观看| 中文欧美无线码| 曰老女人黄片| 露出奶头的视频| 怎么达到女性高潮| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产成人欧美在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 午夜亚洲福利在线播放| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 午夜福利一区二区在线看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 三上悠亚av全集在线观看| 青草久久国产| 成年版毛片免费区| 天堂中文最新版在线下载| netflix在线观看网站| 成年人免费黄色播放视频| 91大片在线观看| 国产不卡一卡二| 最新在线观看一区二区三区| 成人av一区二区三区在线看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | a级毛片黄视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品免费视频内射| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 久久青草综合色| 宅男免费午夜| 久久久国产一区二区| 国产三级在线视频| 午夜免费激情av| 女性被躁到高潮视频| 成在线人永久免费视频| xxxhd国产人妻xxx| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 中出人妻视频一区二区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲中文字幕日韩| 日韩大码丰满熟妇| 水蜜桃什么品种好| 免费观看人在逋| 久久久久久久久中文| 欧美激情 高清一区二区三区| 日本三级黄在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日本wwww免费看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产黄色免费在线视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| av在线天堂中文字幕 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 9热在线视频观看99| 男女之事视频高清在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美激情 高清一区二区三区| 夫妻午夜视频| 国产成人系列免费观看| 国产成人av教育| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产成人影院久久av| 国产精品98久久久久久宅男小说| 大陆偷拍与自拍| 国产1区2区3区精品| www.999成人在线观看| 最新美女视频免费是黄的| 国产主播在线观看一区二区| 中文字幕色久视频| 国产野战对白在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 麻豆久久精品国产亚洲av | 黄色成人免费大全| 18禁美女被吸乳视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 视频区欧美日本亚洲| 一区二区三区国产精品乱码| 在线天堂中文资源库| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产成年人精品一区二区 | 18禁国产床啪视频网站| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产一区在线观看成人免费| 最新在线观看一区二区三区| 国产av在哪里看| 男人操女人黄网站| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 又黄又粗又硬又大视频| 美女高潮到喷水免费观看| 久久久久久久久免费视频了| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产激情久久老熟女| 国产精品久久久av美女十八| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产精品久久久久久人妻精品电影| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 黄色视频,在线免费观看| 热re99久久国产66热| 成人免费观看视频高清| 黄色毛片三级朝国网站| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 免费在线观看完整版高清| 欧美大码av| 国产精品免费一区二区三区在线| 制服人妻中文乱码| 在线免费观看的www视频| 9色porny在线观看| 在线免费观看的www视频| 天堂影院成人在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产亚洲欧美精品永久| 一级a爱片免费观看的视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| e午夜精品久久久久久久| 男女午夜视频在线观看| 亚洲免费av在线视频| 村上凉子中文字幕在线| 在线av久久热| 一级a爱片免费观看的视频| 91麻豆av在线| 免费少妇av软件| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 精品一区二区三卡| 国产亚洲欧美精品永久| 在线观看免费视频网站a站| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美激情 高清一区二区三区| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲熟妇熟女久久| 男人操女人黄网站| 超碰97精品在线观看| 一区在线观看完整版| 99久久人妻综合| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产在线观看jvid| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲视频免费观看视频| 久久热在线av| 国产精品一区二区三区四区久久 | av中文乱码字幕在线| 很黄的视频免费| 国产三级在线视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产高清videossex| 精品乱码久久久久久99久播| 一级毛片女人18水好多| 国产精品免费一区二区三区在线| 我的亚洲天堂| 成人免费观看视频高清| 国产熟女xx| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美精品亚洲一区二区| 麻豆av在线久日| 999久久久精品免费观看国产| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产伦人伦偷精品视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久 成人 亚洲| 久久香蕉国产精品| 亚洲午夜理论影院| 国产精品一区二区三区四区久久 | 色哟哟哟哟哟哟| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美日韩黄片免| x7x7x7水蜜桃| 美女午夜性视频免费| 精品第一国产精品| 女性生殖器流出的白浆| 精品久久久精品久久久| 亚洲五月天丁香| 色哟哟哟哟哟哟| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 波多野结衣av一区二区av| 高清在线国产一区| 91精品三级在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 69av精品久久久久久| 丝袜在线中文字幕| 国产单亲对白刺激| 国产av一区二区精品久久| 国产在线精品亚洲第一网站|