毛細(xì)管電泳法用于檢測糖化血紅蛋白的優(yōu)勢性分析

紀(jì)玉松

[摘要] 目的 分析用于檢測糖化血紅蛋白的毛細(xì)管電泳法的性能，并與伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀進(jìn)行對比和分析，以期指導(dǎo)臨床應(yīng)用。方法 選取正常人、缺鐵性貧血患者和血紅蛋白變異者各10名，每人靜脈采集全血6 mL，加入抗凝劑制成標(biāo)本，為正常組、缺鐵性貧血組和變異體組，每組血液標(biāo)本平均分為兩份，分別用毛細(xì)管電泳儀和伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀進(jìn)行糖化血紅蛋白的檢測，記錄數(shù)據(jù)并進(jìn)行分析比對，運用統(tǒng)計學(xué)方法處理數(shù)據(jù)。結(jié)果 ①在無干擾因素的情況下，毛細(xì)管電泳法和伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀對于糖化血紅蛋白的檢測相關(guān)性良好，其含量分別為（5.55±0.54）%和（5.53±0.52）%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t<2.101，P>0.05）。②糖化血紅蛋白變異體對兩種檢測方法的影響 在變異體存在的情況下，兩種檢測方法檢測結(jié)果存在差異，毛細(xì)管電泳法的結(jié)果與血糖結(jié)果相符，具體結(jié)果見表2、表3。③缺鐵性貧血對兩種檢測方法的影響缺鐵性貧血可使糖化值升高，具體結(jié)果見表4。結(jié)論 毛細(xì)管電泳法與伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀相比具有明顯優(yōu)勢，應(yīng)用條件較簡單，可操作性和可重復(fù)性高，前者不受變異體干擾，與臨床診斷結(jié)果相符，且能提示缺鐵性貧血的存在與否，適合應(yīng)用到臨床的診斷檢查中。

[關(guān)鍵詞] 糖化血紅蛋白檢測；毛細(xì)管電泳法；伯樂D10糖化血紅蛋白檢測；優(yōu)勢

[中圖分類號] R587.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-4062（2016）11（a）-0006-03

Capillary Electrophoresis Method Used for Determination of Glycosylated Hemoglobin Advantage Analysis

JI Yu-song

Clinical laboratory ，Qingdao Chenyang Peoples Hospital，Qingdao，Shandong Province，266000 China

[Abstract] Objective To analysis of capillary electrophoresis method used for determination of glycosylated hemoglobin performance， and compared with Bio-Rad D10 glycated hemoglobin analyzer and analysis， in order to guide clinical application. Methods Choose normalpeople，patients with iron deficiency anemia and hemoglobin variability each 10， each vein whole blood collected 6 ml， join the anticoagulant specimen， respectively divided into four groups， respectively， the normal group， iron deficiency anemia group and variants， each group of average blood specimen was divided into two， respectively， with capillary electrophoresis apparatus and Bio-Rad D10 test the glycosylated hemoglobin a1c analyzer， record the data and analysis， process the data by statistical methods. Results 1， In the case of no interference factors， capillary electrophoresis and bole D10 for glycosylated hemoglobin a1c analyzer test correlation is good， its content， respectively. （5.55 ± 0.54） % and（5.53 ± 0.52） %， there is no statistical difference（t<2.101，P>0.05）. 2， Glycated hemoglobin variant of the influence of two kinds of detection methods In the presence of variants， differences between two methods of testing results， the results of capillary electrophoresis with blood sugar results of specific results are shown in table 2 and table 3.3， The influence of iron deficiency anemia of two kinds of detection methods Iron deficiency anemia can make the saccharification value increases， the specific results are shown in table. Conclusion Capillary electrophoresis method compared with bole D10 glycated hemoglobin analyzer has obvious advantages， the application condition is relatively simple， high maneuverability and repeatability， the former can't be interfered variants， consistent with clinical diagnosis， and can suggest the existence of the iron deficiency anemia， suitable for application in clinical diagnostic work-up.

[Key words] HbAlc Test； Capillary electrophoresis； Bio-Rad D10 glycosylated hemoglobin test； Advantage

糖化血紅蛋白是血紅蛋白中2條B鏈的N端纈氨酸和葡萄糖非酶化不可逆結(jié)合形成的，與血糖濃度成正比，隨紅細(xì)胞的凋亡而消失[1]。因其不受進(jìn)食等的影響，通過測定糖化血紅蛋白的含量，可以反映糖尿病患者在過去幾個月的時間內(nèi)糖尿病控制情況的好壞，也可預(yù)測三個月內(nèi)糖尿病的病情變化。并且糖化血紅蛋白的檢測與血糖的檢測相比較穩(wěn)定，故糖化血紅蛋白的檢測具有重要的臨床意義[2]。該研究選擇以高效液相色譜法為原理的伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀進(jìn)行對比，明確毛細(xì)管電泳法的優(yōu)勢，以求臨床的檢測更加準(zhǔn)確與便捷。研究表明，在糖化血紅蛋白的干擾因素中，血紅蛋白變異體和缺鐵性貧血對于檢測準(zhǔn)確性干擾最常見，故該次研究分別以血紅蛋白變異體和缺鐵性貧血作為變量，對兩組檢測方法進(jìn)行了比對，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

正常組、變異體組、缺鐵性貧血組分別選取10名正常人（無糖尿病、貧血等疾病的健康人）、血紅蛋白變異體患者、缺鐵性貧血患者，靜脈采全血6 mL，平均分為兩份，加入抗凝劑EDTA，制成血液樣本，于4°C環(huán)境下保存。見表1。

1.2 對象的納入標(biāo)準(zhǔn)

血紅蛋白變異體組病例納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床檢查中HbA1c結(jié)果與血糖結(jié)果不符，經(jīng)血紅蛋白電泳檢測后確認(rèn)存在血紅蛋白變異體的病例。缺鐵性貧血組病例納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)臨床血液學(xué)依據(jù)[2]。正常組納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)全面檢查后，排除糖尿病，貧血等的健康人。

1.3 儀器和試劑

毛細(xì)管蛋白電泳儀和伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀，及其各自配套試劑。

1.4 原理

毛細(xì)管電泳法原理： 在堿性緩沖液及高電壓環(huán)境下，由于血紅蛋白不同組分所攜帶電荷數(shù)差異的存在，在電場力的作用下其泳動速率也存在差異，因而可以完成不同組分的分離，并予以測定[3]。伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀原理： 采用高效液相色譜法（HPLC）檢測全血糖化血紅蛋白，由于糖化后的血紅蛋白所帶電荷數(shù)的差異，測量其在波長為440 nm時的吸收情況，通過軟件進(jìn)行測定和計算，從而完成糖化血紅蛋白的測定[4]。

1.5 方法

①無干擾因素的情況下兩種方法的比較：取正常組樣本分為兩組，分別用毛細(xì)管電泳法和伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀檢測糖化血紅蛋白，記錄其結(jié)果，并進(jìn)行兩獨立樣本的t檢驗，分析兩種方法測得的糖化血紅蛋白含量。②糖化血紅蛋白變異體對兩種方法的影響 選取變異組的樣本血，分為兩組，分別編號。分別采用上述兩種檢測方法對兩組樣本血進(jìn)行糖化血紅蛋白的檢測，記錄其數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。將樣本委托上海伯豪生物科技有限公司進(jìn)行血紅蛋白基因測序，得出變異體類型。③缺鐵性貧血對兩種方法的影響 選取缺鐵性貧血組的樣本血，分為兩組，并予以編號。采用上述兩種檢測方法對兩組樣本進(jìn)行檢測，并進(jìn)行血清學(xué)檢查，記錄數(shù)據(jù)

1.6 統(tǒng)計方法

采用軟件SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，P<0.01為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 無干擾因素的情況下兩種方法的比較結(jié)果

經(jīng)兩獨立樣本t檢驗得P>0.05，t<2.101，認(rèn)為兩種檢測方法在無干擾因素情況下測得糖化血紅蛋白含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，二者相關(guān)性良好，見表2。

2.2 兩種檢測方法的檢測結(jié)果

伯樂A10糖化血紅蛋白分析儀測得的HbA1c結(jié)果與實際血糖值不符，而毛細(xì)管電泳法測得結(jié)果與血糖值基本一致。變異體類型主要為Hb E、Hb J-Bangkok、Hb NewYork、Hb G-Taipei和Hb F，見表3。

2.3 缺鐵性貧血對兩種檢測方法的影響

缺鐵性貧血對兩種檢測方法的影響見表4、表5。

3 討論

糖化血紅蛋白是糖基化的血紅蛋白，因其生成量取決于血糖濃度，與進(jìn)食等因素?zé)o關(guān)，故臨床上通過測定糖化血紅蛋白的含量可以診斷患者是否患有糖尿病以及反映糖尿病治療情況和預(yù)后。糖化血紅蛋白測定是指測定糖化了的血紅蛋白占總的血紅蛋白的比例，正常人糖血紅蛋白約占4%～6%，>6.5%基本可以確定為糖尿病患者，因為較血糖檢測穩(wěn)定，故糖化血紅蛋白檢測在臨床具有重要的意義。檢測糖化血紅蛋白的方法有很多，如高效液相色譜法，免疫層析法、電泳法等，高效液相色譜法是目前最經(jīng)典的檢測方法之一。該次研究用毛細(xì)管電泳法與伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀（其原理為高效液相色譜法）做對比，比較二者相關(guān)性以及得出毛細(xì)管電泳法檢測糖化血紅蛋白的優(yōu)勢變異體組的有關(guān)結(jié)果顯示，毛細(xì)管電泳法的檢測結(jié)果與實際血糖結(jié)果一致，而伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀的結(jié)果不一致。故在變異體存在的情況下，毛細(xì)管電泳法的優(yōu)勢性顯而易見，這與某研究表明的電泳法可以分離絕大部分血紅蛋白變異體相一致[5]；而伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀不能提示血紅蛋白變異體，其檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性完全取決于變異體糖化率和正常血紅蛋白糖化率的一致性。而后者結(jié)果的偏差很容易造成臨床上的誤診。缺鐵性貧血（IDA）的血清學(xué)檢查結(jié)果顯示，空腹血糖無明顯差異，缺鐵性貧血組血清鐵含量明顯減少，總鐵結(jié)合力明顯增加，糖化血紅蛋白含量增加，IDA使得HbA1c檢測結(jié)果高于正常值，經(jīng)補鐵治療后，結(jié)果均下降。但伯樂D10檢測儀僅可顯示糖化值的變化，無法確定是否有缺鐵性貧血病史；毛細(xì)管電泳儀可得出HbA2 值，目前HbA2的臨界值為2.25%，可以根據(jù)其結(jié)果對IDA進(jìn)行篩查。并且，在進(jìn)行糖化血紅蛋白的檢測過程中，毛細(xì)管電泳法對環(huán)境條件、溫濕度、pH的要求均低于伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀。且操作性更強，可重復(fù)操作，樣本用量較小。

綜上所述，毛細(xì)管電泳法具有精確性高，操作性強，受干擾因素少的優(yōu)勢，更加符合現(xiàn)代醫(yī)療的要求。與伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀相比，毛細(xì)管電泳法在缺鐵性貧血或糖化血紅蛋白變異等存在的情況下，對診斷更加具有參考價值，可以提示變異體存在與否以及其類型，提示是否有缺鐵性貧血的發(fā)生，診斷準(zhǔn)確性更高，更具有臨床參考價值，建議在臨床中推廣使用，以提高糖化血紅蛋白的檢測效率與精確度，減少誤診的可能性。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 王宏平.糖化血紅蛋白的檢測意義[J].中國實用醫(yī)藥，2007， 2（6）：10-11.

[2] 鄧家棟.臨床血液學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2001：23-86.

[3] 李卿，劉文彬，金中淦，等.毛細(xì)管電泳法檢測糖化血紅蛋白的分析性能評估[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2015，30（2）：181-182.

[4] 楊興萍.美國伯樂D-10糖化血紅蛋白分析儀的性能評價[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（21）：2683-2684.

[5] WeyKamp C，Waenink-Wieggers H，Kemna E，et al. HbAlc：performance of the Sebia cupillary[J].Clim Chem Lab Med，2013，51（6）：129-131.

（收稿日期：2016-07-17）