子宮腺肌病中缺氧誘導(dǎo)因子—1的表達(dá)及其臨床意義

賀凌云　朱煒　羅君玲

【摘要】 目的：探討子宮腺肌病患者在位和異位內(nèi)膜組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1蛋白的表達(dá)及其臨床意義。方法：采用免疫組化方法檢測子宮腺肌病患者的在位和異位內(nèi)膜組織各60例，并將其與正常子宮內(nèi)膜30例的陽性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：HIF-1表達(dá)中，子宮腺肌病內(nèi)膜、肌層的表達(dá)大于正常子宮內(nèi)膜及肌層。子宮腺肌病中異位和在位內(nèi)膜中的表達(dá)為86.67%和65.00%，相比正常子宮內(nèi)膜33.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。異位內(nèi)膜表達(dá)也高于在位內(nèi)膜，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：子宮腺肌病的發(fā)生、發(fā)展與HIF-1關(guān)系密切，可促進(jìn)子宮腺肌病細(xì)胞的生長、血管形成。

【關(guān)鍵詞】 子宮腺肌病； 缺氧誘導(dǎo)因子-1； 免疫組化

【Abstract】 Objective：To explore the clinical significance and expression of Hypoxia inducible factor-1 in adenomyosis.Mehtod：Immunohistochemical method was used to detect the each 60 cases of eutopic and ectopic endometrial tissue with adenomyosis， and the positive rate was compared with that of normal endometrium in 30 cases.Result：The expression of the muscular layer and endometrium of adenomyosis in HIF-1 were greater than that of normal endometrium and muscular layer；expression in ectopic and eutopic endometrium of adenomyosis were respectively 86.67% and 65.00%， compared with normal endometrium of 33.33%，there were statistically significant differences（P<0.05）.The expression of ectopic endometrium was higher than that in eutopic endometrium，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：The occurrence and development of adenomyosis is closely related to HIF-1，which can promote the growth and angiogenesis of adenomyosis.

【Key words】 Adenomyosis； Hypoxia inducible factor-1； Immunohistochemical

First-authors address：Peoples Hospital of Yingde City in Guangdong Province，Yingde 513000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.07.008

子宮腺肌病是指子宮內(nèi)膜腺體及其周圍間質(zhì)慢性侵襲進(jìn)入子宮肌層，進(jìn)行性生長而產(chǎn)生的病變，發(fā)病機(jī)制不清，主要表現(xiàn)為繼發(fā)性進(jìn)行性加重的痛經(jīng)、月經(jīng)量增多、不孕不育等，已成為危害廣大婦女身心健康的重要婦科疾病，藥物治療以及保守手術(shù)治療效果差，尤其對渴望生育的婦女臨床治療非常棘手。研究認(rèn)為缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）為缺氧狀態(tài)下可調(diào)控新生血管生成，本研究旨在通過臨床資料分析，免疫組化檢測HIF-1在子宮腺肌病中的表達(dá)情況并探討臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本科2012年1月-2015年1月診斷明確的子宮腺肌病患者異位、在位內(nèi)膜組織各60例，年齡40～52歲，平均（46.2±3.1）歲；其中增生期患者38例，分泌期22例；月經(jīng)起始時(shí)間、周期異常46例（76.67%）；痛經(jīng)病史54例（90.00%）。同時(shí)選取同年份在本科因非子宮腺肌病疾病前來門診或病房行診刮術(shù)的正常子宮內(nèi)膜30例作為對照組，年齡26～58歲，平均（45.7±3.0）歲，刮診術(shù)后內(nèi)膜組織經(jīng)病理診斷考慮為正常子宮內(nèi)膜，月經(jīng)起始時(shí)間、周期異常24例（80.00%），痛經(jīng)病史25例（86.67%）?；颊吣挲g、月經(jīng)史、臨床表現(xiàn)等一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有病例病理診斷均經(jīng)2名副主任及以上醫(yī)師診斷，一般條件可，無高血壓、糖尿病，無術(shù)前使用激素史。

1.2 方法 手術(shù)室取子宮腺肌病患者的在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜組織，非子宮腺肌病疾病前來門診或病房行診刮術(shù)的正常子宮內(nèi)膜，取材后立即放入4%中性甲醛中固定72 h后脫水包埋，每個組織塊均先進(jìn)行HE染色，篩選，明確診斷后進(jìn)行免疫組化染色，參照陰性對照組進(jìn)行分析。

1.3 主要試劑 包括濃縮型兔抗人HIF-1多克隆抗體，使用稀釋度為1∶50，購自武漢博士德生物工程有限公司，通用型二抗購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，用公司提供陽性玻片作為對照組，采用通用免疫組化進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn) 參照Birner等[1]展示，在低倍鏡視野下隨機(jī)觀察5個視野數(shù)的共計(jì)1000個細(xì)胞，綜合染色強(qiáng)度和陽性內(nèi)膜細(xì)胞總數(shù)占總內(nèi)膜細(xì)胞數(shù)的百分比進(jìn)行處理，HIF-1蛋白表達(dá)定位于膜細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，呈現(xiàn)出棕黃色或棕褐色的顆粒表現(xiàn)。此外，染色強(qiáng)度按以下標(biāo)準(zhǔn)評估：著色弱，但強(qiáng)于對照者為1分，稍清晰者為2分，強(qiáng)者為3分；陽性細(xì)胞占總內(nèi)膜細(xì)胞數(shù)≤10%者為（-），計(jì)0分，10%～50%者為2分，51%～ 80%者為3分，大于80%者為4分。上述兩項(xiàng)評分相加，3分為弱陽性（+），4～5分為陽性，6～7分為強(qiáng)陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料采用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化結(jié)果 正常子宮肌層與正常子宮內(nèi)膜表達(dá)沒有區(qū)別，子宮腺肌病肌層、內(nèi)膜和正常子宮肌層、內(nèi)膜表達(dá)比較均有區(qū)別，腺肌病表達(dá)均大于正常子宮，見圖1。

2.2 HIF-1在患者異位、在位內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá) HIF-1在子宮腺肌病患者的異位、在位內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況可見，異位和在位內(nèi)膜中的表達(dá)為86.67%和65.00%，相比正常子宮內(nèi)膜的33.33%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。同時(shí)，異位內(nèi)膜表達(dá)也高于在位內(nèi)膜，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

目前，關(guān)于子宮腺肌病該病發(fā)生發(fā)展變化原因與機(jī)制不明，有學(xué)者認(rèn)為，子宮肌層內(nèi)的各種細(xì)胞因子、免疫因子、激素及其受體、酶及酶的抑制劑等，對其發(fā)生與發(fā)展均起著重要的作用[2]。當(dāng)前，對于該病的治療包括曼月樂（左炔諾孕酮宮內(nèi)緩釋系統(tǒng)）、子宮動脈栓塞或阻斷治療、腹腔鏡聯(lián)合促性腺釋放激素激動劑（GnRH-a）和放置左炔諾孕酮宮內(nèi)緩釋系統(tǒng)（LNG-IUS）、芳香化酶抑制劑等治療方法，但對于其與缺氧誘導(dǎo)因子之間的關(guān)系的研究并未見[2-11]。有學(xué)者認(rèn)為子宮動脈栓塞治療該病痛經(jīng)的有效率為77.2%[12]，同時(shí)，高強(qiáng)度聚焦超聲消融治療能改善有生育要求的子宮腺肌病患者的臨床癥狀，且不增加妊娠及分娩時(shí)并發(fā)癥的發(fā)生率[13]，聯(lián)合GnRH-α和/或LNG-IUS能提高高強(qiáng)度聚焦超聲消融治療子宮腺肌病痛經(jīng)的療效，降低復(fù)發(fā)率[14]。

1991年研究者在探討缺氧誘導(dǎo)的紅細(xì)胞成素（EPO）基因表達(dá)譜中首先發(fā)現(xiàn)的一種DNA結(jié)合蛋白，命名為缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1），進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，其可調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧代謝，起到關(guān)鍵因子的作用。研究發(fā)現(xiàn)HIF-1的靶基因多達(dá)40種[15]，其功能主要涉及血管的生成、塑型，轉(zhuǎn)化，促使紅細(xì)胞生成、糖轉(zhuǎn)運(yùn)分解、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞增殖和細(xì)胞存活等重要作用[16]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1在缺氧狀態(tài)下可調(diào)控血管生成，通過影響血管生存其他因子的表達(dá)，包括血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）及其受體-1、內(nèi)皮素-1、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶、人內(nèi)皮細(xì)胞環(huán)氧合酶-2等因子，而直接或間接參與血管生成的全過程[17]。文獻(xiàn)[18]報(bào)道提示上述血管生成因子與子宮腺肌病發(fā)病相關(guān)。

本文通過免疫組化分析，研究結(jié)果提示，正常子宮肌層與正常子宮內(nèi)膜在HIF-1的表達(dá)沒有區(qū)別；子宮腺肌病肌層、內(nèi)膜和正常子宮肌層、內(nèi)膜表達(dá)比較均有區(qū)別，腺肌病表達(dá)均大于正常子宮。同時(shí)，統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，異位和在位內(nèi)膜中的表達(dá)為86.67%和65.00%，相比正常子宮內(nèi)膜33.33%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。同時(shí)，異位內(nèi)膜表達(dá)也高于在位內(nèi)膜（P<0.05），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

從免疫組化分析中可見，具體的細(xì)胞組織中，內(nèi)膜細(xì)胞中可見表達(dá)增強(qiáng)，而在間質(zhì)細(xì)胞中幾乎未見表達(dá)，表明HIF-1的激活可能與子宮腺肌病的發(fā)病關(guān)系密切，異位和在位的內(nèi)膜相對處于缺氧狀態(tài)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞過度表達(dá)缺氧誘導(dǎo)因子，促進(jìn)對靶基因的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞對缺氧的耐受能力增強(qiáng)，引起表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)。同時(shí)，在子宮膜異位癥中，HIF-1α在異位內(nèi)膜過度表達(dá)，且與異位內(nèi)膜的血管生成密切相關(guān)，推測HIF-1α可能在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用[19]。有關(guān)學(xué)者認(rèn)為，HIF-1蛋白的表達(dá)科導(dǎo)致大量的VEGF產(chǎn)生，從而促使微血管的生成，間接表明缺氧誘導(dǎo)因子在子宮腺肌病中的重要地位[20]。諸多學(xué)者也認(rèn)為，子宮腺肌病動物模型中，通過甲氧雌二醇-2，可抑制HIF-1蛋白的表達(dá)，從而抑制疾病的生長和發(fā)展[21]。筆者的臨床資料分析認(rèn)為，通過手術(shù)切除子宮或其他的治療方案治療子宮腺肌病，可有效治療該病，但是否可通過抑制缺氧誘導(dǎo)因子，抑制血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)，抑制微血管生成，從而治療子宮腺肌病，需做進(jìn)一步的研究，筆者認(rèn)為HIF-1也參與子宮腺肌病的血管生成，可能是血管生成的核心調(diào)控因子之一。

綜上所述，子宮腺肌病的發(fā)生、發(fā)展是由多因素、多步驟、多階段構(gòu)成的復(fù)雜過程，可能涉及多個細(xì)胞因子及基因的激活或抑制。筆者認(rèn)為，HIF-1與子宮腺肌病發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，促進(jìn)子宮腺肌病細(xì)胞的生長、血管形成。

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（收稿日期：2017-01-12） （本文編輯：周亞杰）