豆腐果苷抗抑郁活性的研究

楊敏

(1.云南大學教育部自然資源藥物化學重點實驗室，云南 昆明 650091；2.云南農(nóng)業(yè)大學香料研究所，云南 昆明 650051)

豆腐果苷抗抑郁活性的研究

楊敏1,2

(1.云南大學教育部自然資源藥物化學重點實驗室，云南 昆明 650091；2.云南農(nóng)業(yè)大學香料研究所，云南 昆明 650051)

目的：探討豆腐果苷的抗抑郁作用。方法：60只昆明種小鼠，雄性，隨機分為6組，每組10只。分別為豆腐果苷四種劑量組(20、30、40、50 mg·kg-1)，陽性對照組鹽酸丙米嗪(IMI，45 mg·kg-1)，空白對照組(蒸餾水)，各組分別灌胃相應(yīng)藥物。觀察6 min，小鼠懸尾實驗記錄后5 min內(nèi)給藥組和對照組小鼠累計不動時間，小鼠強迫游泳實驗記錄后4 min內(nèi)給藥組和對照組小鼠累計不動時間。采用小鼠懸尾實驗及小鼠強迫游泳實驗方法研究豆腐果苷的抗抑郁作用。結(jié)果：在小鼠懸尾實驗和小鼠強迫游泳實驗中，與空白對照組比較，豆腐果苷在30 mg·kg-1劑量下能明顯縮短小鼠的懸尾不動時間(P<0.05)，在30、50 mg·kg-1劑量下能明顯縮短小鼠強迫游泳的不動時間(P<0.05)。結(jié)論：豆腐果苷在行為絕望動物模型中呈現(xiàn)抗抑郁作用。

豆腐果苷；抗抑郁；懸尾；強迫游泳

抑郁癥是以抑郁為主要癥狀的一種常見病，其發(fā)病機制十分復(fù)雜，與多種受體和神經(jīng)遞質(zhì)的紊亂有關(guān)，治療抑郁癥的藥物也主要與神經(jīng)生化機制的調(diào)節(jié)有關(guān)，而目前抗抑郁藥只能緩解部分癥狀，對神經(jīng)及血管等多種系統(tǒng)和組織有不同程度的毒副作用。因此研究開發(fā)療效好，毒副作用少的抗抑郁新藥成為近年來研究的熱點[1,2]。

豆腐果苷(Helicid，對甲醛基苯-O-β-D-阿洛吡喃糖苷)系從山龍眼科植物深山龍眼(Helicia erratica Hook.)的果實中分離出的有效成分[3]，其化學結(jié)構(gòu)與天麻苷相似，但鎮(zhèn)靜、安眠、止痛的作用較天麻苷強[4]。研究表明，豆腐果苷具有多種藥物活性，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用尤為突出，臨床上主要用于治療神經(jīng)官能癥引起的頭痛，失眠等癥，無明顯急性毒性?；W實驗表明，胚胎期服用大劑量豆腐果苷未觀察到對子代的神經(jīng)行為致畸效應(yīng)和腦組織學效應(yīng)[5]，其安全性較高。由于豆腐果苷具有止痛、抗驚厥、安眠和抗抑郁等作用[6,7]，目前作為用于治療抑郁癥的天然藥物正在被廣泛開發(fā)和應(yīng)用。本文對豆腐果苷的抗抑郁活性用兩種經(jīng)典動物抑郁模型進行研究，為豆腐果苷抗抑郁新藥的進一步開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

豆腐果苷，云南玉溪萬方天然藥物有限公司產(chǎn)品，批號040701，鹽酸丙米嗪(Imipramine hydrochloride，IMI)，為Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用蒸餾水配成所需濃度。

1.2 動物

昆明種小鼠，雄性，體質(zhì)量18-22 g，由昆明醫(yī)學院實驗動物中心提供，動物分籠飼養(yǎng)，自由采食。

1.3 儀器

ANC U580Svi sta攝像頭(深圳市奧尼電子工業(yè)有限公司)；JUNSD JS-306多功能秒表(深圳市JUNSD實業(yè)有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 分組及給藥

60只昆明種小鼠禁食16 h后隨機分成6組，分別為空白對照組(蒸餾水)，陽性對照組鹽酸丙米嗪(Imipramine hydrochloride，IMI，45 mg·kg-1)，豆腐果苷四種劑量組(20、30、40、50 mg·kg-1)，每組10只。于開始實驗前60 min，分別灌胃給予相應(yīng)藥物，每日1次，連續(xù)7 d。各組均按0.2 ml·(10 g)-1體質(zhì)量給藥。

豆腐果苷不同給藥時間對小鼠懸尾實驗的影響分組同上，于開始觀察前1、2、4、24 h前，各組分別灌胃蒸餾水，鹽酸丙米嗪(Imipramine hydrochloride，IMI，45 mg·kg-1)和不同劑量的豆腐果苷(20、30、40、50 mg·kg-1)，按0.2 ml·(10g)-1體質(zhì)量給藥。

1.4.2 小鼠懸尾實驗

參照Butterweck等[8]的方法，小鼠灌胃給藥60 min后，用膠布將小鼠尾在距尾尖2 cm處粘在一根水平木棍上，使動物成倒掛狀態(tài)，其頭部離桌面約5 cm，懸掛兩側(cè)用木板隔開動物視線。開始時小鼠頭部上下左右游動，一段時間后因失望而使活動減少，即出現(xiàn)間斷性不動。觀察6 min，記錄后5 min內(nèi)的累計不動時間。

1.4.3 強迫小鼠游泳實驗

參照Butterweck等的方法，小鼠灌胃給藥60 min后，將小鼠置于高30 cm，直徑18 cm，水深10 cm的玻璃水缸中，水溫25±2℃，觀察小鼠6 min，記錄后4 min內(nèi)的累計不動時間。

1.4.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 豆腐果苷對小鼠懸尾實驗的影響

在經(jīng)典的小鼠懸尾抑郁模型中，陽性對照組IMI與空白對照組相比，可顯著縮短懸尾不動時間(P<0.001)。豆腐果苷單次灌胃20、30、40、50 mg·kg-1，與空白對照組相比，30 mg·kg-1劑量顯著減少懸尾不動時間，見表1。

表1 豆腐果苷對小鼠懸尾實驗的影響±SD，n=10)

注：與空白對照組相比，**P<0.01，***P<0.001。

2.2 豆腐果苷不同給藥時間對小鼠懸尾實驗的影響

在經(jīng)典的小鼠懸尾抑郁模型中，陽性對照組IMI與空白對照組相比，可顯著縮短懸尾不動時間(P<0.001)。豆腐果苷單次灌胃20、30、40、50 mg·kg-1，與空白對照組相比，給藥1 h后，30 mg·kg-1劑量顯著減少懸尾不動時間(P<0.05)；給藥2 h后，40 mg·kg-1劑量顯著減少懸尾不動時間(P<0.05)；給藥4 h后，30 mg·kg-1劑量顯著減少懸尾不動時間(P<0.05)；給藥24 h后，40 mg·kg-1劑量顯著減少懸尾不動時間(P<0.05)，見表2。

表2 豆腐果苷不同給藥時間對小鼠懸尾實驗的影響±SD，n=10)

注：與空白對照組相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

2.3 豆腐果苷對強迫小鼠游泳實驗的影響

在經(jīng)典的小鼠強迫游泳抑郁模型中，陽性對照組IMI與空白對照組相比，可顯著縮短不動時間(P<0.05)；豆腐果苷單次灌胃20、30、40、50 mg·kg-1，與空白對照組相比，30、50 mg·kg-1劑量顯著減少不動時間(P<0.05)，見表3。

3 討論

小鼠懸尾實驗和強迫游泳實驗均屬于行為絕望模型，是目前評價抗抑郁作用效果最常用的抑郁動物模型。本研究采用小鼠懸尾模型和強迫游泳模型來評價豆腐果苷的抗抑郁活性，由于豆腐果苷具有明顯的鎮(zhèn)靜作用，不具有中樞興奮作用，因此可排除豆腐果苷在實驗中帶來的假陽性結(jié)果。實驗結(jié)果顯示，豆腐果苷具有毒性低，不良反應(yīng)輕，作用時間長等特點。豆腐果苷在灌胃給藥1小時后即可發(fā)揮藥效，其在體內(nèi)具有長效的作用，單次給藥的作用時間可達24小時。本實驗結(jié)果表明，豆腐果苷30 mg·kg-1劑量明顯縮短小鼠懸尾不動時間，30、50 mg·kg-1劑量明顯縮短小鼠強迫游泳不動時間。本研究采用這兩種實驗觀察豆腐果苷對小鼠行為絕望模型的影響，實驗表明豆腐果苷能明顯縮短小鼠懸尾不動時間和小鼠強迫游泳不動時間，具有一定的抗抑郁作用。

表3 豆腐果苷對強迫小鼠游泳實驗的影響±SD，n=10)

注：與空白對照組相比，*P<0.05。

小鼠懸尾實驗和強迫小鼠游泳實驗是行為藥理學實驗中用于篩選和觀察抗抑郁藥物作用效果的可靠實驗方法[9]。在小鼠懸尾實驗中，懸尾小鼠為克服不正常的體位而掙扎活動，但隨之陷入一動不動狀態(tài)，小鼠在懸尾模型中的不動狀態(tài)是其行為絕望和抑郁的表現(xiàn)。Porsolt等[10,11]在1977和1978年提出小鼠和大鼠的強迫游泳屬于行為絕望模型實驗，動物被迫在一有限的空間游泳，首先掙扎試圖逃跑，隨后處于一種漂浮不動的狀態(tài)，顯示為行為絕望，這種行為絕望狀態(tài)被認為與抑郁癥患者的癥狀相似。研究表明，當前大多數(shù)抗抑郁藥能縮短這種不動狀態(tài)時間，故這種模型被有效地應(yīng)用于評價抗抑郁藥的抗抑郁療效。本研究采用了這兩種經(jīng)典的動物抑郁模型考察豆腐果苷的抗抑郁作用，結(jié)果表明，豆腐果苷可明顯縮短懸尾實驗和強迫游泳實驗中小鼠的不動時間。豆腐果苷與丙咪嗪相比，其抗抑郁的作用時間更長，是一種有發(fā)展前景的抗抑郁新藥。

抑郁癥是一種危害人類身心健康的常見病，約13～20%的人一生中曾有過抑郁的體驗，其終生患病率為6.1～9.5%。隨著人們生活壓力的加大和工作節(jié)奏的加快，會有更多的人感到緊張，疲勞和郁悶，發(fā)病率會進一步增加。雖然市場上已有很多類型的抗抑郁藥可供選擇，但若能從天然植物化學成分或其類似物中尋找及研制出療效好，副作用小適合長期服用的抗抑郁藥，將具有極大的社會效益和經(jīng)濟效益。抑郁癥是全球性疾病，以顯著的持續(xù)性情緒低落為主要特征的精神障礙，常伴有相應(yīng)的思維和行為改變，目前藥物治療仍是抑郁病的主要治療手段之一，隨著長期使用現(xiàn)有治療藥的不良反應(yīng)出現(xiàn)，期盼著更多更好的新藥面世。豆腐果苷是一種安全有效的止痛、安眠和鎮(zhèn)靜藥，具有一定的抗抑郁作用，連續(xù)服用未發(fā)現(xiàn)毒副作用，具有臨床療效好藥物不良反應(yīng)少等優(yōu)點，其活性與金絲桃苷相當，藥效恒定，日益受到醫(yī)學專家的關(guān)注，具有潛在的藥用價值，必將在臨床治療中發(fā)揮更大的作用。研究表明豆腐果苷具有顯著的抗抑郁活性，其作用與其增強5-HT能神經(jīng)系統(tǒng)功能有關(guān)，因此有必要對豆腐果苷的抗抑郁機制進一步研究，為豆腐果苷的新藥開發(fā)奠定理論基礎(chǔ)，使其發(fā)展成為一種成熟的抗抑郁藥物。本研究采用小鼠懸尾實驗和強迫小鼠游泳實驗，探討了豆腐果苷的抗抑郁作用，今后對其他動物模型的抗抑郁活性及作用機制還有待進一步研究。

1 Tamminga CA, Nemeroff CB, Blakely RD, et al. Developing novel treatments for mood disorders accelerating discovery[J]. Biol Psychiatry, 2002, 52(6): 589-609.

2 Adell A, Castro E, Celada P, et al. Strategies for producing faster acting antidepressants[J]. Drug Discov Today, 2005, 10(8): 578-585.

3 Chen WX, Luo SD, Breimaier E. Helicid, αβ-allopyranoside fromHeliciaerraticahook[J].LiebigsAnnChem, 1981, 10: 1893-1895.

4 沙靜姝,毛洪奎. 豆腐果甙(昆明神衰果素)[J]. 藥學通報, 1987, 22(1): 27-30.

5 劉蘋,李建,納冬荃,等. 母鼠妊娠期服用豆腐果苷對仔代神經(jīng)行為學效應(yīng)[J]. 中草藥, 2002, 33(3): 238-242.

6ZhuQL,TangQ,LiY,etal.Synthesisandcalmactivityof[α-(2-Oxoalkyl)-α-(substitutedanilimo)methyl]phenyl-β-D-allopyranoside[J].ChinJOrganicChem, 2006, 26(9): 1264-1267.

7WangZ,HuLK,LuoZP,etal.Treamentforneuropathicpainofbenzaldehyde-O-β-D-arabinopyranoside[P].ChinesePatent:CN1634089, 2005, 07, 06.

8ButterweckV,WallA,Lieflnder-WulfU,etal.Effectsifthetotalextractandfractionsofhypericumperforatuminanimalassaysforantidepressantactivity[J].Pharmacopsychiatry, 1997, 30suppl2: 117-124.

9 張均田. 現(xiàn)代藥理實驗方法[M]. 北京: 北京醫(yī)科大學, 中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)合出版社, 1997, 1061-1062.

10PorsoltRD,AntonG,BlavetN,etal.Behaviouraldespairinrats:anewmodelsensitivetoantidepressivetreatments[J].EurJPharmacol, 1978, 47(4): 379-391.

11PorsoltRD,BertinA,JalfreM.Behaviouraldespairinmice:aprimaryscreeningtestforantidepressant[J].ArchIntPharmacodynTher, 1977, 229(2): 327-336.

Study on antidepressant activity of helicid

Yang Min1,2

(1.Key Laboratory of Medicinal Chemistry for Natural Resource,Yunnan University,Yunnan Kunming 650091; 2. Institute of Flavour and Fragrance, Yunnan Agriculture University,Yunnan Kunming 650051)

Objective：To study the antidepressant effect of helicid on mice behavioral despair models. Methods: Sixty Kunming male mice were randomly divided into six groups (n=10). The helicid groups of four doses (20, 30, 40, 50 mg·kg-1); positive control group (Imipramine hydrochloride, IMI, 45 mg·kg-1); the control group (distilled water). The drug was given by intragastric administration. By observing for six minutes, the accumulative immobility time of the final five minutes of dose group and control group was recorded in the mice tail suspension test; the accumulative immobility time of the final four minutes of dose group and control group was recorded in the mice forced swimming test. The antidepressant effect of helicid was evaluated with mice tail suspension test and mice forced swimming test. Results: Compared with control group, Helicid 30 mg·kg-1significantly reduced the accumulative immobility time in mice tail suspension test (P<0.05). Helicid 30 and 50 mg·kg-1reduced the accumulative immobility time in the mice forced swimming test (P<0.05). Conclusion: Helicid has the significant antidepressant effect.

Helicid; Antidepressant; Tail suspension test; Forced swimming test

楊敏，女，助理研究員，主要從事藥物的開發(fā)研究，Email：asmm1234@sina.com。

2016-11-20)