解脲支原體及人型支原體對宮頸炎致病性的相關(guān)性分析

黃水慧 牛戰(zhàn)琴

宮頸炎是育齡期婦女宮頸最常見的疾病之一，國內(nèi)有文獻(xiàn)報(bào)道說女性中有60%～80%的人一生中曾患過宮頸炎[1]。部分患者的病原體至今尚不清楚。目前，對于解脲支原體(Ureapiasma urealyticum，Uu)及人型支原體(M.homimis，Mh)在宮頸炎發(fā)生、發(fā)展中是否起到作用而引起了國內(nèi)外重視。然而，對支原體在宮頸炎中的致病性的認(rèn)識比較混亂，一部分表現(xiàn)為“過度治療”，即給每位宮頸炎患者均做各型支原體檢測，只要有支原體陽性，就都給予抗支原體抗炎藥物治療，直至支原體轉(zhuǎn)陰，治療時間長，給患者造成了恐懼和負(fù)擔(dān)。另一部分表現(xiàn)為“過度輕視”，則不進(jìn)行任何支原體的檢測和治療。本文通過比較宮頸炎患者與非宮頸炎女性宮頸管解脲支原體及人型支原體檢出情況，分析兩者對宮頸炎致病的相關(guān)性，為臨床對宮頸炎患者進(jìn)行解脲支原體及人型支原體的診治提供參考。

材料與方法

1.試劑及儀器：解脲支原體和人型支原體培養(yǎng)鑒定藥敏一體化試劑盒[迪爾支原體(Uu/Mh)分離培養(yǎng)藥敏試劑盒，20人份/盒，珠海迪爾生物工程有限公司]；滅菌水(2 ml/支滅菌注射用水，北京市永康藥業(yè)有限公司)、生理鹽水(0.9%氯化鈉注射液，50 ml/袋，山東高威集團(tuán)醫(yī)用分子制品有限公司)；恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏SHP-080微生物生化培養(yǎng)箱，上海圣科儀器設(shè)備有限公司)；顯微鏡(MODEL CH20BIMF200 JAPAN OLYMPUS OPTICAL CO.LTD)。

2.研究對象：2015年1月—2015年10月就診于山西大醫(yī)院婦產(chǎn)科門診確診為宮頸炎的52例患者作為研究組，平均年齡為(32.9±4.3)歲，同期于山西大醫(yī)院婦產(chǎn)科門診就診非宮頸炎患者31例作為對照組，平均年齡為(31.6±5.6)歲。入選對象近1周未進(jìn)行過抗生素局部或全身用藥，宮頸未進(jìn)行任何處理，近3天內(nèi)無性生活。研究組中陰道炎患者(63.5%，33/52)與對照組中陰道炎患者(48.4%，15/31)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

研究組宮頸炎按照第八版婦產(chǎn)科教材宮頸炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，入組標(biāo)準(zhǔn)包括(1)有宮頸炎的臨床表現(xiàn)，陰道分泌物增多、瘙癢等，置窺器可見宮頸口附著黃色粘稠分泌物或?qū)m頸口流出稀薄黃色液體，或粘膜質(zhì)脆，易出血，或?qū)m頸充血、宮頸息肉；(2)外陰、陰道無充血，宮頸或陰道分泌物白細(xì)胞>10/高倍鏡視野；(3)同時行宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)及HPV檢測，結(jié)果提示無異常；(4)無糖尿病、免疫性疾病等其他疾病，無長期服用抗生素、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等藥物。

對照組入組標(biāo)準(zhǔn)包括(1)宮頸無充血、水腫，無宮頸息肉等改變；(2)宮頸口無異常分泌物附著及自宮頸口流出，宮頸周圍無異常分泌物附著；(3)同時行宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)及HPV檢測，結(jié)果提示無異常；(4)無糖尿病、免疫性疾病等其他疾病，無長期服用抗生素、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等藥物。

3.取材方法：無菌棉拭子在陰道側(cè)壁中上1/3處，取分泌物行涂片檢查。無菌棉拭子(頭端)深入宮頸口內(nèi)約1cm，旋轉(zhuǎn)1圈，停留60 s取出，置入無菌管行支原體培養(yǎng)及鑒定(整個操作過程中無菌棉拭子未接觸除宮頸外任何其他部位或物品)。

4.陰道分泌物涂片檢查：(1)病原菌檢測。在低倍鏡下直接查找病原菌,主要查找陰道毛滴蟲、假絲酵母菌菌絲及孢子、線索細(xì)胞等，并用以結(jié)合判斷陰道清潔度;(2)清潔度測定。在顯微鏡調(diào)至油鏡下陰道分泌物進(jìn)行分度，Ⅰ度主要為桿菌、可見大量的上皮細(xì)胞；Ⅱ度為部分桿菌，出現(xiàn)部分膿細(xì)胞和雜菌；Ⅲ度為少數(shù)的上皮細(xì)胞和桿菌，可見其他雜菌和大量的膿細(xì)胞；Ⅳ度未見桿菌，少許上皮樣細(xì)胞，滿視野幾乎都是膿細(xì)胞和雜菌。

5.支原體培養(yǎng)：首先，將試劑盒放置在室溫中，使其溫度接近室溫；將含有宮頸分泌物的標(biāo)本分別置于解脲支原體培養(yǎng)基及人型支原體培養(yǎng)基中(注意整個過程中的無菌操作，避免標(biāo)本受污染，結(jié)果出現(xiàn)假陽性)；將培養(yǎng)瓶放置于35℃～37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培育24～48 h，觀察結(jié)果。

結(jié)果判讀嚴(yán)格按照試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)判讀，減少假陽性的出現(xiàn)，同時行藥敏實(shí)驗(yàn)。解脲支原體的培養(yǎng)液變?yōu)榍宄和该骷t色為陽性，若其不變色(黃色)為陰性，陰性者可繼續(xù)培養(yǎng)至48 h，若仍不變色，可判斷為陰性。人型支原體的培養(yǎng)液變?yōu)榍宄和该骷t色為陽性，若其不變色(黃色)為陰性，而陰性者標(biāo)本可培養(yǎng)至72 h，若仍不變色，可判斷為陰性。

結(jié)果

1.兩組支原體檢出情況比較：兩組支原體檢出比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組解脲支原體、人型支原體、解脲支原體合并人型支原體的檢出率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 研究組和對照組支原體檢出比較

2.兩組不同支原體檢出情況比較：兩組檢出的支原體主要是解脲支原體，其中研究組20例(71.4%)，對照組11例(68.8%)。單純?nèi)诵椭гw，研究組3例(10.7%)，對照組2例(12.5%)；解脲支原體合并人型支原體，研究組共計(jì)5例(17.9%)，對照組3例(18.7%)。見表2。

表2 研究組和對照組各支原體總體檢數(shù)和構(gòu)成比

3.各級陰道清潔度中宮頸支原體感染情況：宮頸支原體感染患者陰道清潔度主要在Ⅲ度以上，陰道清潔度為Ⅱ度陽性患者2例(10.5%)，Ⅲ度者22例(62.9%),IV度者20例(69.0%)。Ⅱ度支原體檢出率與Ⅲ度、IV度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ⅲ度支原體檢出率與IV度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表3 宮頸支原體感染在不同陰道清潔度的分布

注：分別與Ⅲ度、IV度比較，*P<0.05

討論

宮頸炎癥是婦科的一種常見多發(fā)疾病，對女性健康具有一定影響。部分患者甚至影響生活質(zhì)量，嚴(yán)重的宮頸炎還可引起病原微生物上行感染，引起子宮內(nèi)膜的炎癥、輸卵管炎、盆腔炎等，甚至可導(dǎo)致尿道炎等泌尿生殖道綜合癥[3-5]等疾病。因此，及時的診斷和治療非常重要。然而，由于部分宮頸炎患者的臨床癥狀不明顯，或與陰道炎癥狀相同及部分宮頸炎的病原菌至今不清楚，導(dǎo)致目前臨床上在診斷和治療宮頸炎方面存在很多誤區(qū)和不規(guī)范現(xiàn)象。再者，對宮頸炎病原微生物的認(rèn)識不夠，多為經(jīng)驗(yàn)性治療，不能針對相應(yīng)病原菌作出對癥治療。對于反復(fù)性、難治性宮頸炎的診治仍存在困難，難以確定其致病因素、病原微生物。因此，篩選出罹患宮頸炎的高危因素，明確宮頸炎癥的致病微生物，對于宮頸炎的診斷及治療十分重要。

支原體是缺乏細(xì)胞壁、細(xì)胞大小介于細(xì)菌與病毒之間的原核微生物，能自行繁殖、獨(dú)立存活。到目前，從人體分離出的支原體已達(dá)十多種，其中已經(jīng)肯定的對人具有致病作用的支原體有6種，包括肺炎支原體(M.pleuropneumonia，Mp)、發(fā)酵支原體(M.fermentaus，Mf)、梨支原體(Mycopiasma pirum，Mpi)、生殖支原體(M.genitalium，Mg)、解脲支原體、人型支原體。目前，已知的解脲支原體也具有一定的致病性，可導(dǎo)致非淋菌性尿道炎、絨毛膜羊膜炎、自然流產(chǎn)、新生兒肺炎、腦膜炎等，人型支原體目前已確定可引起盆腔感染、新生兒腦膜炎、腦膿腫等。而對于解脲支原體和人型支原體若寄居于宮頸，是否能引起宮頸炎癥這一課題受到國內(nèi)外研究的關(guān)注。

本文研究結(jié)果提示，研究組解脲支原體及人型支原體的檢出率和對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。解脲支原體及人型支原體可能為能夠寄生于宮頸的正常菌群之一，可為正常人攜帶。本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸支原體寄居中以單純解脲支原體為主，占70%左右，與國內(nèi)外多數(shù)研究者的報(bào)道相符[3-6]。解脲支原體屬于柔膜體綱微生物，主要寄生于泌尿生殖道，其分為14個血清型，根據(jù)分子生物學(xué)特征又分為A、B兩群，A群解脲支原體均含有16kDa和17kDa的多肽(2、4、5、7、8、9、10、11、12型)，B群的各血清型僅含有17kDa的多肽(1、3、6、14)，其中13血清型僅含有16kDa的多肽，且僅對Mn2+敏感，故可既列入A群，也可列入B群[7]。由于解脲支原體多種血清型的存在，本研究結(jié)果表明，宮頸解脲支原體(總體血清型)的寄居與宮頸炎癥的發(fā)生無明顯相關(guān)性，而14個血清型中是否部分可引起宮頸炎，而部分不具有致病性，還需將來做進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果提示，宮頸支原體的寄居與陰道分泌物的清潔度具有一定的相關(guān)性，清潔度級別高，支原體寄居率則增大。陰道清潔度是分泌物檢查的常規(guī)項(xiàng)目，是在顯微鏡觀察分泌物，來確定陰道的微生態(tài)狀況，可作為有無炎性反應(yīng)的判斷，部分還能對炎性反應(yīng)的原因做出診斷。陰道清潔度分為四度，其級別越高，陰道正常寄生菌越少，致病菌、雜菌、膿細(xì)胞越多。正常陰道內(nèi)并非無菌環(huán)境，其內(nèi)寄居者多種微生物，形成正常微生物群，維持陰道生態(tài)平衡。陰道正常的微生態(tài)中，是以桿菌為主，其數(shù)量可占陰道寄居所有微生物總數(shù)的95%以上，是育齡期女性正常微生物群的優(yōu)勢菌，其中又以能產(chǎn)生過氧化氫(H2O2)的乳酸桿菌最為優(yōu)勢[2]。在乳酸桿菌、雌激素及pH的共同調(diào)節(jié)下維持正常的陰道生態(tài)平衡。當(dāng)陰道受到病原微生物的感染，或寄生于陰道的條件致病菌增多并成為優(yōu)勢菌時，那么陰道的微生態(tài)將失去平衡，便可出現(xiàn)炎癥，陰道分泌物的檢測中結(jié)果表現(xiàn)為桿菌減少，尤其是乳酸桿菌，雜菌及白細(xì)胞數(shù)目的增多，有的可見典型的病原體，也就是說陰道的清潔度在一定程度上可反映陰道微生態(tài)的狀況，清潔度級別越高，陰道生態(tài)失衡可能越嚴(yán)重。也就是說當(dāng)陰道清潔度到Ⅲ、IV度時，陰道自凈作用下降，正常陰道微生態(tài)遭到破壞，其他菌群的寄生、感染的幾率就大大增加了，而宮頸與陰道是相延續(xù)的，支原體也就可能趁機(jī)寄生于宮頸，因此，出現(xiàn)了宮頸支原體的寄居與陰道清潔度的相關(guān)性。

綜上所述，宮頸炎患者及非宮頸炎女性宮頸均可有解脲支原體及人型支原體的寄居，二者無明顯差異?？傮w上來說，解脲支原體和人型支原體與宮頸炎癥的發(fā)生沒有明顯的相關(guān)性，但是由于解脲支原體可分多種血清型，故不能排除解脲支原體中某種血清型與宮頸炎癥發(fā)生的相關(guān)，為宮頸炎的致病微生物。解脲支原體及人型支原體在宮頸的寄生與陰道清潔度具有一定的相關(guān)，清潔度高，支原體寄生的幾率越高，也就是說其寄生與陰道微生態(tài)相關(guān)，當(dāng)陰道微生態(tài)遭到破壞而失去平衡時，解脲支原體及人型支原體在宮頸的寄居率升高。

本次課題的研究，只是進(jìn)行了解脲支原體和人型支原體定性的檢測，并沒有對其進(jìn)行定量檢測及解脲支原體的14個血清學(xué)型進(jìn)行分型檢測，存在一定局限性。對于解脲支原體分型檢測將是下一步研究的重點(diǎn)。

1 云玉香.淺談慢性宮頸炎的臨床治療進(jìn)展.當(dāng)代醫(yī)藥論叢,2014,12:11-12.

2 謝幸，茍文麗,主編.婦產(chǎn)科學(xué).第八版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2013.

3 陳建祎，陳玲玲，沈華.宮頸炎患者支原體感染相關(guān)因素分析及預(yù)防策略.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2015,22:200-202.

4 Taylor-Robinson D,Lamont RF.Mycoplasmas in pregnancy.BJOG,2011,118:164-174.

5 王子峰，陸麗.236例女性生殖道分泌物支原體培養(yǎng)及藥敏分析.中國醫(yī)藥指南,2016,14:25.

6 王曉麗,趙衛(wèi)東.女性泌尿生殖系統(tǒng)感染支原體的研究進(jìn)展.中國婦幼保健,2014,29:156-158.

7 曹玉璞,葉元康主編,支原體與支原體病.北京:人民衛(wèi)生出版社,2000.