HPLC法測(cè)定行連續(xù)性腎臟替代治療超濾液中莫西沙星的含量及其應(yīng)用

黎春彤，李 翔，周 亮，王心慧，張美芳

HPLC法測(cè)定行連續(xù)性腎臟替代治療超濾液中莫西沙星的含量及其應(yīng)用

黎春彤，李 翔*，周 亮，王心慧，張美芳

目的 建立HPLC法測(cè)定行連續(xù)性腎臟替代治療重癥醫(yī)學(xué)科患者超濾液中莫西沙星的含量，反映濾器對(duì)莫西沙星的清除情況，為其給藥劑量調(diào)整提供可靠依據(jù)。方法 選用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸水溶液(40∶60)，設(shè)置流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為293 nm；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量10 μL；運(yùn)行時(shí)間6 min。結(jié)果 莫西沙星在2.000～60.00 μg/mL范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為98.74%(n=9)，RSD為0.76%。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，適用于行連續(xù)性腎臟替代治療超濾液中莫西沙星的含量測(cè)定，能夠反映濾器對(duì)莫西沙星的清除情況。

連續(xù)性腎臟替代治療；超濾液；莫西沙星；HPLC

0 引言

由細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體等多種病原微生物所致的感染性疾病遍布臨床各科，其中細(xì)菌性感染最為常見(jiàn)，因此，抗菌藥物成為臨床應(yīng)用最廣泛的藥物之一。莫西沙星為第4代新型氟喹諾酮類廣譜抗菌藥物，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌、厭氧菌及非典型病原體(支原體、衣原體、軍團(tuán)桿菌)均有良好的抗菌活性[1]，具有良好的安全性和耐受性，可作為糖尿病患者、老年患者以及腎損傷患者的選擇性藥物使用[2]。本課題組前期針對(duì)行連續(xù)性腎臟替代治療(Continuous renal replacement therapy，CRRT)患者的藥物清除情況改變進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)對(duì)這部分患者的CRRT超濾液進(jìn)行目標(biāo)藥物含量測(cè)定比對(duì)患者血藥濃度進(jìn)行監(jiān)測(cè)更具優(yōu)勢(shì)[3]，對(duì)患者無(wú)創(chuàng)，且樣品采集、前處理簡(jiǎn)單易行，含量測(cè)定迅速、結(jié)果準(zhǔn)確。安全性相對(duì)較好的莫西沙星在行CRRT患者中應(yīng)用較多，因此，本課題組對(duì)其在CRRT超濾液中含量測(cè)定進(jìn)行研究，據(jù)此反映藥物的清除情況，對(duì)患者的用藥劑量進(jìn)行調(diào)整。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀，四元泵，VWD檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器，ChemStation化學(xué)工作站(美國(guó)安捷倫公司)；AE240型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；pH計(jì)(上海梅特勒-托利多公司)，LGJ-10D普通型冷凍干燥機(jī)(上海創(chuàng)奕科教設(shè)備有限公司)。

莫西沙星標(biāo)準(zhǔn)品(德國(guó)拜耳公司，純度：96.8%，批號(hào)：R-1004-01G)；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)中所用水均為超純水，連續(xù)性腎臟替代治療超濾液(由本院ICU科室提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(40∶60)；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：293 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密量取莫西沙星標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，置50 mL容量瓶中，加純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得200 μg/mL的溶液，作為莫西沙星的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取莫西沙星對(duì)照品儲(chǔ)備液5.0 mL，置50 mL容量瓶中，加純化水稀釋至刻度，即得20.00 μg/mL的莫西沙星對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取行CRRT患者超濾液樣品1 mL，置離心管中，-20 ℃冷凍，轉(zhuǎn)移至冷凍干燥機(jī)中，制得凍干粉。加入200 μL純化水稀釋溶解，混勻，過(guò)濾，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取患者使用莫西沙星前的超濾液，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成陰性對(duì)照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，在供試品溶液和對(duì)照品溶液色譜圖中莫西沙星的保留時(shí)間一致，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系 精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，加超純水至刻度，搖勻，即得不同濃度的對(duì)照溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，以濃度為橫坐標(biāo)(X)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，得莫西沙星的回歸方程為Y=14.36 X+1.186，r=0.999 9，線性范圍為2.000～60.00 μg/mL。

圖1 超濾液中莫西沙星的HPLC圖譜

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積并計(jì)算，RSD為1.57%，表明所建立的方法精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取行CRRT患者超濾液樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣。結(jié)果莫西沙星的平均含量為18.69 μg/mL，RSD為0.38%(n=6)，表明所建立的方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述重復(fù)性試驗(yàn)樣品1份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算RSD為1.96%，表明行CRRT患者超濾液中，莫西沙星在實(shí)驗(yàn)條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 取行CRRT患者使用莫西沙星前的超濾液(陰性對(duì)照溶液)，分別精密量取濃度為20.00 μg/mL的對(duì)照品溶液0.8、1.0、1.2 mL各3份(n=9)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為98.74%，RSD為0.76%。見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 樣品測(cè)定 取行CRRT患者一次給莫西沙星(給藥劑量0.4 g)前1 h至給藥后11.5 h時(shí)間，每2.5小時(shí)取樣，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 超濾液樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 目前對(duì)莫西沙星的含量測(cè)定方法的報(bào)道較多，主要采用HPLC和LC-MS/MS方法測(cè)定[4-8]。高效液相方法簡(jiǎn)單、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，已越來(lái)越多地應(yīng)用于莫西沙星血藥濃度、莫西沙星注射液、胸腔積液中莫西沙星濃度的測(cè)定。參閱文獻(xiàn)后，選擇Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸水溶液(40∶60)，檢測(cè)波長(zhǎng)293 nm，柱溫25 ℃。試驗(yàn)驗(yàn)證，該色譜條件應(yīng)用于CRRT超濾液中莫西沙星的含量測(cè)定，操作簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。

3.2 樣品處理方法的選擇 本研究采集ICU患者行CRRT超濾液樣品檢測(cè)。文獻(xiàn)中對(duì)莫西沙星血漿樣品和胸腔積液樣品均采用了液液萃取、離心濃縮的方法，進(jìn)行純化和富集[4,6]。但由于本研究的樣品為超濾鹽溶液，體積較大，藥物濃度低，患者一次行CRRT治療時(shí)間長(zhǎng)，樣品數(shù)量較多，樣品富集和易于批量處理成為樣品前處理的一個(gè)難點(diǎn)。本試驗(yàn)考察了氮?dú)獯蹈伞㈦x心濃縮、冷凍干燥三種方法，經(jīng)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，冷凍干燥具有操作簡(jiǎn)單、處理時(shí)間短、可批量處理樣品等顯著優(yōu)勢(shì)，最終選擇了冷凍干燥處理方法。

3.3 抗菌藥物的選擇 抗菌藥物的合理應(yīng)用一直是各臨床科室廣泛關(guān)注的重點(diǎn)。而多項(xiàng)Meta分析結(jié)果顯示，莫西沙星是第四代氟喹諾酮類藥物，具有廣譜、高效、抗耐藥性強(qiáng)、不良反應(yīng)較小等優(yōu)勢(shì)，在腎功能不全患者中應(yīng)用較多[9-11]。本課題組前期對(duì)行CRRT患者的超濾液進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)行CRRT對(duì)藥物的清除情況影響較大，莫西沙星在這部分患者中應(yīng)用較多，因此，本研究對(duì)行CRRT患者使用莫西沙星后超濾液研究，為其劑量調(diào)整提供重要依據(jù)。

3.4 本方法應(yīng)用于ICU行CRRT患者一次給莫西沙星(給藥劑量0.4 g)前1 h至給藥后11.5 h的超濾液樣品測(cè)定，給藥后，超濾液中莫西沙星的濃度呈現(xiàn)先迅速提高、后緩慢下降的趨勢(shì)，在給藥9 h后下降明顯，預(yù)計(jì)與莫西沙星的血藥濃度呈正相關(guān)，11.5 h累計(jì)濾器清除莫西沙星0.14 g，濾器清除率高達(dá)35%，提示該患者的莫西沙星給藥劑量增加且給藥時(shí)間間隔縮短。

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Determination of moxifloxacin in ultra-filtrate liquid of continuous renal replacement therapy (CRRT) by HPLC and its application

LI Chun-tong,LI Xiang*,ZHOU Liang,WANG Xin-hui,ZHANG Mei-fang

(Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of moxifloxacin in continuous renal replacement therapy (CRRT) ultra-filtrate liquid of patients in intensive care unit,to reflex the clearance of the filter and to provide a basis for its dosage adjustment.Methods Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm) column was chosen for analysis.The mobile phase consisted of methanol and water (40∶60).The flow rate was 1.0 mL/min with the detection wavelength set at 293 nm;the temperature was set at 25 ℃;the injection volume was 10 μL;the running time was 6 min.Results A good linear correlation of moxifloxacin was observed within the range of 2.000～60.00 μg/mL (r=0.999 9).The average recovery was 98.74% (n=9),RSDwas 0.76%.Conclusion The method is rapid,convenient,accurate,robust and suitable for determination of moxifloxacin concentration in ultra-filtrate liquid of continuous renal replacement therapy (CRRT).It can be used to reflex its clearance by filter.

Continuous renal replacement therapy;Ultra-filtrate liquid;Moxifloxacin;HPLC

2016-08-03

解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科，北京100048

北京藥學(xué)會(huì)基金2014年研究項(xiàng)目

10.14053/j.cnki.ppcr.201703021

*通信作者