規(guī)模化豬場豬瘟免疫程序制定的探索

賀俊暢，張建遠(yuǎn)，2，謝有福，范麗哲，高士華

(1．河南省新大牧業(yè)有限公司，河南鄭州450000;2．河南省種豬育種中心，河南鄭州450000; 3．正陽華大養(yǎng)殖有限公司，河南駐馬店463000)

規(guī)?；i場豬瘟免疫程序制定的探索

賀俊暢1，張建遠(yuǎn)1，2，謝有福1，范麗哲1，高士華3

(1．河南省新大牧業(yè)有限公司，河南鄭州450000;2．河南省種豬育種中心，河南鄭州450000; 3．正陽華大養(yǎng)殖有限公司，河南駐馬店463000)

豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)感染引起的豬的急性、熱性、高度致死性傳染病，是嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一。多年來，我國廣泛接種豬瘟兔化弱毒疫苗，該病在我國已得到有效控制，但是散發(fā)病例仍有發(fā)生。引起發(fā)病的主要原因是由于免疫程序不合理，免疫效果不確實。制定免疫程序的關(guān)鍵是排除母源抗體干擾，確定合適的首免日齡。在母源抗體效價高時接種疫苗，一部分疫苗抗原會被母源抗體中和，達不到抗原刺激閾值，因而造成免疫效果不佳。隨著豬瘟疫苗質(zhì)量的提高和各場母豬免疫程序的各異，已經(jīng)沒有廣泛適用的初免時間［1］。本文通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測母豬抗體維持時間及母源抗體的消長規(guī)律，探索科學(xué)的仔豬初免時間，為控制CSF做指導(dǎo)。

1 材料與方法

1．1 試驗材料進口阻斷ELISA試劑盒，美國IDEXX公司生產(chǎn)，批號:99－43220 F301。傳代細(xì)胞源豬瘟活疫苗(7500RID/頭份)，廣東永順生物制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號2013060。

1．2 試驗動物河南某4 000頭規(guī)模化豬場母豬60頭，1～5胎次，每胎次12頭，3周齡仔豬90頭。

1．3 試驗方法按照4 mL/頭，通過前腔靜脈無菌采集實驗豬血樣，分離血清后，－20℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

嚴(yán)格按照IDEXX試劑盒操作說明書進行檢測。阻斷率=NC珋xA450－SA450/NC珋xA450*100。阻斷率＞=40%為陽性。阻斷率＜=30%為陰性。阻斷率介于30%～40%之間為可疑。

分組及采樣:每年在3、7、11月上旬母豬全群統(tǒng)一免疫3次，分別在母豬免疫后0、15、30、45、60、75、90、105、120 d采血，跟蹤母豬的抗體消長情況。

選取仔豬90頭，編號1～90，根據(jù)前期試驗的結(jié)果，從21 d開始檢測仔豬的抗體。根據(jù)抗體檢測結(jié)果，將90頭豬平均分3組，使每組開始時母源抗體陽性率相同，編號A、B、C組。然后每周采血1次，跟蹤各組母源抗體消長，各組分別在抗體陽性率達到60%、40%、20%時進行首免，見表2。

2 結(jié)果

2．1 母豬抗體檢測從豬群中選擇不同胎次母豬60頭，母豬每年免疫3次，每次間隔4個月，從免疫前開始采樣，免疫后每隔15 d采樣1次，抗體檢測結(jié)果如表1。

表1 母豬抗體跟蹤檢測

在4個月試驗期間母豬共淘汰3頭，由表1可知母豬在免疫前抗體陽性率在75%，免疫后2周陽性率有較大的提升，4周后陽性率達到最高水平93%，3個月后抗體陽性率下降7%，能夠維持在80%以上。

2．2 仔豬抗體檢測仔豬抗體水平的消長見表3。A組在4周齡時進行免疫，此時抗體陽性率較高，間隔3周后二免，可見在抗體水平比較高時免疫，抗體陽性率維持下降趨勢。直至育肥期結(jié)束，抗體陽性率一直維持較低水平，不能有效保護。據(jù)試劑盒廠家做的中和試驗報道，群體ELISA抗體阻斷值陽性率應(yīng)維持在70%以上水平才能有效保護。B組在6周齡，即抗體陽性率為40%時初免，3周后二免，首免對抗體提升作用不明顯，二免后抗體水平逐漸提高但是提升作用有限，直至育肥結(jié)束，群體陽性率為62%，全程仍不能有效保護。C組在9周齡進行免疫，此時群體抗體陽性率20%，免疫后3周抗體水平還未提升，但是在二次免疫后抗體快速提升，在育肥后期抗體水平較高，能夠完全保護。

表2 各組哺乳仔豬免疫時間

表3 各組哺乳仔豬抗體水平跟蹤

3 討論

3．1 母豬的免疫指導(dǎo)幾年國家實行政府采購疫苗政策后，豬瘟的免疫覆蓋率進一步提高，但是豬瘟仍有發(fā)生，根據(jù)筆者認(rèn)為豬瘟免疫的重點在于疫苗毒株、抗原含量和免疫時機。李玲偉［2］等應(yīng)用RT－PCR方法獲得2009年11個豬瘟病毒流行株E0基因全長序列，通過對11個流行毒株的序列分析表明，這些流行毒株均屬于2．1亞群，其中4株屬于2．1a亞群。11個流行毒株與HCLV E0基因的核苷酸和推導(dǎo)氨基酸序列同源性分別為82．3%～84．3%和86．4%～89．5%。雖然疫苗毒株和流行毒株核苷酸序列差異較大，但據(jù)中國動物衛(wèi)生監(jiān)察所的報告，現(xiàn)用疫苗毒株足以保護動物機體免受流行毒株攻擊?，F(xiàn)在疫苗廠家生產(chǎn)的疫苗抗原含量一般都高于國家標(biāo)準(zhǔn)3～5倍。所以疫苗品質(zhì)較有保證。而影響最大的應(yīng)該是免疫程序的不科學(xué)。母豬有跟胎免疫和全群免疫兩種策略，但是對于規(guī)?；i場，跟胎免疫不便于管理，易造成漏防［3］。所以全群免疫是較好選擇，由表1可見，在4個月的免疫間隔期豬群抗體陽性率低谷在免疫前，陽性率為75%，兩次普防之間抗體陽性率波動11%，一直處于保護水平。所以豬瘟普防適合規(guī)模化養(yǎng)殖。

3．2 仔豬首免日齡的選擇選定在仔豬持有的母源抗體不會影響疫苗的免疫效果而又能防御病毒感染的期間，即母源抗體為1∶8～1∶16時進行首免。仔豬20日齡前可得到母源抗體的保護，25日齡后保護力下降，至40日齡己完全喪失對強毒的抵抗力，45日齡前后母源抗體效價已降至1∶4～1∶8，因此25日齡和65日齡2次免疫的程序在一定時期內(nèi)為豬瘟防控做指導(dǎo)，但是豬瘟疫苗的品質(zhì)在不斷升級，至今仍有人固守于該程序，已經(jīng)遠(yuǎn)不能適應(yīng)疫病防控的需要。如蔡葵蒸等曾調(diào)查7日齡時抗體陽性率最高為80．0%，而本試驗調(diào)查21日齡時抗體陽性率80%。母源抗體對仔豬的免疫影響重大，仔豬免疫程序一定要根據(jù)母源抗體消長規(guī)律來制定，根據(jù)表3可見在仔豬抗體水平高時免疫會明顯中和疫苗抗原，造成免疫失敗。而抗體水平低時免疫又會有免疫空白期，造成很大風(fēng)險。所以有條件豬場免疫一定要調(diào)查母源抗體消長規(guī)律，根據(jù)中和抗體水平，選擇在SN水平為1∶16～1∶64時及時免疫。ELISA檢測結(jié)果則需要根據(jù)試劑盒與中和抗體的相關(guān)性來制定免疫方案［4］。本場使用IDEXX的試劑盒，選擇在抗體陽性率30%左右，即30%的哺乳仔豬能夠保護的第7周進行首免，3周后二免，效果良好。這點與羅勇等的結(jié)果有一定出入，這可能與研究背景有一定關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn)，哺乳仔豬的母源抗體越低，免疫刺激產(chǎn)生的抗體才能越高，保護時間更長。雖然會有一段免疫空白期，但是該豬場已經(jīng)連續(xù)3年未檢測到豬瘟抗原，豬瘟基本凈化，所以該程序適合本場。

機體消滅豬瘟病毒主要靠細(xì)胞免疫［5］?？贵w的產(chǎn)生需要時間，根據(jù)表3可見在群體陽性率已經(jīng)很低的情況下，一次免疫仍不足以引起有效的免疫應(yīng)答，所以初免主要誘導(dǎo)產(chǎn)生記憶細(xì)胞，為二免打下基礎(chǔ)，豬瘟抗體的產(chǎn)生需要4周左右時間，所以豬場也應(yīng)根據(jù)自己的感染壓力，在易感染階段前1個月及時免疫。

［1］李儒曙，李靜，陳活草，等．ELISA法探究仔豬CSFV母源抗體消漲規(guī)律［J］．上海畜牧獸醫(yī)通訊，2007(4):30－31．

［2］李玲偉，張志，吳發(fā)興，等．CSFV陜西分離株SXCDK全基因的克隆與分析［J］．西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報，2011，39(1):1－7．

［3］杜希珍，高麗娜．規(guī)?；i場母豬群豬瘟抗體血清學(xué)調(diào)查［J］．豬群保健，2009(6):86－88．

［4］Alfonso Clavijo，Min Lin，En－Min Zhou，et al．Application of Competitive Enzyme－Linked Immunosorbent Assay for the Serologic Diagnosis of Classical Swine Fever Virus Infection［J］．Journal of Veterinary Diagnostic，2001，13:357－360．

［5］和彥良，李真光，冷雪，等．豬瘟病毒感染后對機體免疫系統(tǒng)的影響［J］．中國畜牧獸醫(yī)，2011，38(12):177－181．

S852．65+1

B

0529-6005(2017)01-0043-02

2016－01－18

賀俊暢(1988-)，男，獸醫(yī)師，碩士，研究方向為動物傳染病學(xué)，E-mail:hjc@xindamuye.com

張建遠(yuǎn)，E-mail:zjy@xindamuye.com