微生物快速檢測試紙條檢測飼料原料微生物的實踐

富國文 胡禮平 蘭志剛 樊月圓 趙桂英*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院,云南昆明 650201; 2.昆明正大有限公司,云南昆明 650301)

微生物快速檢測試紙條檢測飼料原料微生物的實踐

富國文1胡禮平2蘭志剛2樊月圓1趙桂英1*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院,云南昆明 650201; 2.昆明正大有限公司,云南昆明 650301)

使用微生物快速檢測試紙條檢測飼料主要原料中的微生物，并與微生物標準檢測方法的檢測結果進行比較。結果顯示，微生物快速檢測試紙條與標準方法檢測結果差異不顯著。試驗表明，微生物快速檢測試紙條可以用于飼料原料中的微生物的檢測。

微生物 快速檢測試紙條 飼料原料

食品安全關系到全國人民“舌尖上的安全”，在動物性食品安全方面，吃上“放心肉”、“安全肉”成為迫切要求，而在保證動物性食品安全的一系列環(huán)節(jié)中飼料安全是其中一個重要組成部分[1]。在飼料生產(chǎn)過程中，對原料微生物的檢測不可或缺。微生物可以使飼料發(fā)生腐敗變質，降低營養(yǎng)價值，干擾動物機體的正常生理功能，嚴重者會污染畜產(chǎn)品，引起動物發(fā)病死亡，甚至導致人畜共患傳染病的傳播。為了降低微生物對飼料品質的影響，在我國飼料衛(wèi)生標準中將微生物指標作為一項重要內容。生產(chǎn)中主要采用標準檢測方法來檢測飼料原料中的微生物，一般需要2～5 d才能完成，既費時又費力。為了方便、快捷的對飼料原料中的微生物做出檢測，我們嘗試使用微生物快速檢測試紙條。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

飼料原料樣品于2016年10月21日采自昆明正大飼料有限公司原料庫。

1.1.2 儀器與試劑

電子天平、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、微量移液槍、菌落計數(shù)器、三角瓶、試管、平皿；微生物快速檢測試紙條購自廣東達元綠洲食品安全科技股份有限公司，其他均為國產(chǎn)分析純試劑。

1.2 方法

1.2.1 飼料原料中細菌總數(shù)與沙門氏菌的快速檢測

用電子天平稱取各樣品25 g，溶于225 ml滅菌生理鹽水中混合均勻，再取1 ml混懸液進行10倍梯度稀釋，分別制成10-1、10-2、10-3、10-4和10-5濃度的混懸液。將快速檢測試紙條上層膜不干膠標簽部分揭開，用無菌吸管吸取1 ml樣品勻液，均勻滴加到各試紙條上，迅速貼好上層膜并水平晃動檢測試紙條，使樣品勻液均勻吸附，倒置于恒溫培養(yǎng)箱內，36±1℃，培養(yǎng)24 h計算菌落數(shù)，每個樣品設3個重復。

1.2.2 飼料原料中霉菌的快速檢測

用電子天平稱取各樣品25 g，溶于225 ml滅菌蒸餾水中混合均勻，再取1 mL混懸液進行10倍梯度稀釋，分別制成10-1、10-2、10-3和10-4濃度的混懸液。將快速檢測試紙條上層膜揭開，用無菌吸管吸取1 ml樣品勻液，均勻滴加到試紙條上，迅速貼好上層膜，使樣品勻液均勻吸附，倒置于恒溫培養(yǎng)箱內，29±1℃，培養(yǎng)48 h計算霉菌數(shù)，每個樣品設3個重復。

1.2.3 飼料原料與飼料成品中微生物的標準檢測

菌落總數(shù)的測定按GB/T 13093-2006進行，沙門氏菌的測定按GB/T 13091-2002進行，霉菌總數(shù)的測定按GB/T 13092-2006進行。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析

挑選適宜菌落數(shù)的平板進行計數(shù)，計下各平板的菌落數(shù)后，求同一稀釋度各平板菌落數(shù)的平均值，再根據(jù)稀釋度求得各樣品的菌落數(shù)。用SPSS軟件分析菌落數(shù)的均值和標準差，并進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 飼料原料中細菌總數(shù)的檢測結果

快速檢測試紙條和標準方法檢測飼料原料中細菌總數(shù)的結果見表1。根據(jù)《GB 13078-2001 飼料衛(wèi)生標準》規(guī)定，飼料原料中的細菌總數(shù)不應超過2×106個/g。由表1中的檢測數(shù)據(jù)可以看出，本次檢測的飼料原料樣品均符合國家標準，使用快速檢測試紙條和使用標準方法檢測的結果差異不顯著（P＞0.05 ）。

表1 飼料原料中細菌總數(shù)檢測結果

2.2 飼料原料中沙門氏菌的檢測結果

快速檢測試紙條和標準方法檢測飼料原料中沙門氏菌的結果見表2。根據(jù)《GB 13078-2001 飼料衛(wèi)生標準》規(guī)定，飼料原料中不得檢出沙門氏菌。本次檢測中，使用快速檢測試紙條在豆粕和羽毛粉中檢出沙門氏菌，而使用標準方法則沒有檢出，說明在沙門氏菌的檢測方面，快速檢測試紙具有更好的檢測效果。

表2 飼料原料中沙門氏菌檢測結果

2.3 飼料原料中霉菌總數(shù)的檢測結果

快速檢測試紙條和標準方法檢測飼料原料中霉菌總數(shù)的結果見表3。根據(jù)《GB 13078-2001 飼料衛(wèi)生標準》規(guī)定，豆粕中霉菌總數(shù)不應超過5×104個/g，乳清粉中霉菌總數(shù)不應超過1×103個/ g，魚粉中霉菌總數(shù)不應超過3×103個/g，肉骨粉中霉菌總數(shù)不應超過2×104個/g。由表3中的檢測數(shù)據(jù)可以看出，本次檢測的飼料原料樣品均符合國家標準，使用快速檢測試紙條和使用標準方法檢測的結果差異不顯著（P＞0.05 ）。

表3 飼料原料中霉菌總數(shù)檢測結果

3 討論

飼料原料中含有豐富的營養(yǎng)物質，是微生物生長的天然培養(yǎng)基，一旦條件適合微生物就會大量繁殖，直接導致飼料中的營養(yǎng)物質分解，甚至會在飼料中產(chǎn)生具有強烈毒性和致癌性的毒素，因此，加強對飼料原料中微生物的控制對確保飼料安全具有重要作用[2]。飼料中含有的微生物種類繁多，主要包括細菌、霉菌、酵母菌等[3]，長期以來主要采用微生物標準檢測方法檢測飼料原料中的微生物，但該方法存在費時費力的問題，因此，近年來開發(fā)快速檢測方法成了研究的熱點。生物傳感器法、基因芯片法、聚合酶鏈式反應法、生物阻抗法、快速檢測儀法等多種檢測方法被相繼報道，但由于技術不成熟、對設備和技術要求高或價格昂貴等原因，均并未得到廣泛應用[4]。微生物快速檢測試紙條具有使用方便、檢測速度快、檢測準確度高和價格便宜等特點，在食品微生物的檢測方面被廣泛使用。

為了研究試紙條是否也適用于飼料原料中微生物的檢測，我們將微生物快速檢測試紙條的檢測結果與標準檢測方法檢測的結果進行了對比。從對比的結果可以看出，微生物快速檢測試紙條與標準檢測方法檢測的結果差異不顯著，其中沙門氏菌的檢測結果還要優(yōu)于標準檢測方法，也就是說微生物快速檢測試紙條適用于飼料中微生物的快速檢測。

[1] 魏淑英.飼料中微生物衛(wèi)生指標現(xiàn)狀的調查及控制[D].青島農(nóng)業(yè)大學，2009.

[2] 劉漢武.飼料安全與飼料微生物的檢測[J]. 內蒙古科技與經(jīng)濟，2010，209（7）：68-70.

[3] 李亞莉，楊天龍，廖奇，等.淺談微生物對飼料的影響[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2016，（2）：57-59.

[4] 劉小芳，王衛(wèi)國.飼料中有害微生物快速檢測技術新進展[J].糧食與飼料工業(yè)，2014，（1）：35-38.

富國文（1980-），男，遼寧西豐人，碩士研究生學歷，云南農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院，實驗師，主要從事養(yǎng)豬生產(chǎn)方面研究工作。

趙桂英

云南省2015年工業(yè)發(fā)展專項資金中有關技術改造省級財政補貼項目