油梨和羊奶果果肉粗提物對α—葡萄糖苷酶的體外抑制

葛宇++曹劍秋++鐘利文++王甲水++林興娥++臧小平++馬蔚紅

摘 要 收集不同油梨和羊奶果資源，對油梨和羊奶果果肉粗提物進行α-葡萄糖苷酶的體外抑制活性實驗。結果表明：16份油梨果肉對α-葡萄糖苷酶抑制活性較弱，而9份羊奶果果肉對α-葡萄糖苷酶抑制活性較強，其中羊奶果6號對α-葡萄糖苷酶抑制活性最強，達到99.84%，僅次于阿卡波糖。

關鍵詞 油梨；羊奶果；α-葡萄糖苷酶；體外抑制

中圖分類號 S667.9 文獻標識碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2017.02.004

In vitro Inhibitory Effects of Crude Extracts from the Pulp of

Persea americana and Elaeagnus conferta on α-glucosidase

GE Yu1） CAO Jianqiu2） ZHONG Liwen2） WANG Jiashui1）

LIN Xinge1） ZANG Xiaoping1） MA Weihong1）

（1 Haikou Experimental Station， CATAS， Hainan， Haikou， 570102 China；

2 College of Horticulture and Landscape Architecture， Hainan University，

Hainan， Haikou， 570228 China）

Abstract Persea americana and Elaeagnus conferta germplasm resources were collected and their fruits were extracted and used to determine their inhibition of α-glucosidase in vitro. The results showed that the crude pulp extracts from 16 accessions of P. americana had a weak inhibitory activities against α-glucosidase while the crude pulp extracts from the 9 accessions of E. conferta had a high inhibitory activities against α-glucosidase. The crude pulp extract from Accession 6 of E. conferta was the highest in inhibition of α-glucosidase， with an inhibition rate of upto 99.84%， only next to that of acarbose.

Keywords Persea americana ； Elaeagnus conferta ； α-glucosidase ； Inhibition in vitro

油梨（Persea americana Mill.），又稱鱷梨、牛油果、酪梨等，屬于樟科（Lauraceae）油梨屬植物（Persea），起源于中美洲、墨西哥熱帶濕潤地區(qū)及海拔較高的山地森林或熱帶高原，是著名的熱帶、亞熱帶果樹，同時也是木本油料樹種之一[1]。油梨在海南、廣東、廣西、貴州、云南、臺灣等地均有栽培[2]。羊奶果為胡頹子科胡頹子屬蜜花胡頹子（Elaeagnus conferta Roxb.）的成熟果實。羊奶果屬多年生常綠攀緣植物，主要分布于越南、馬來西亞、印度和中國南部，成熟果實為鮮紅色至紫紅色，可作為鮮果生食也可加工成果脯、果汁、果酒等[3]。

油梨富含脂肪酸、膳食纖維、蛋白質等多種營養(yǎng)及活性成分，其中每百克鮮重中多酚含量為31.9 mg，總黃酮為26.4 mg[1，4]。前人研究發(fā)現(xiàn)，油梨果實中的多酚、黃酮類物質在降血糖方面有一定促進作用，可以延緩葡萄糖擴散、抑制α-葡萄糖苷酶活性，控制糖尿病患者的血糖水平[5-7]。羊奶果成熟果實含有大量的番茄紅素、β-胡蘿卜素和多酚類物質，其中每百克干重中番茄紅含量高達105 mg，β-胡蘿卜素含量為23.2 mg，每百克鮮重中單寧為45～60 mg，其番茄紅素含量是番茄果實的7倍，而其β-胡蘿卜素含量是目前已報道植物中含量最高的物種之一[8-9]。番茄紅素、β-胡蘿卜素和單寧可以提高抗氧化酶活力，從而達到降血糖作用[10-11]。另一方面，油梨和羊奶果均屬于水果中糖成分含量較低水果，適合糖尿病病人食用[1，8，12]。阿卡波糖片是一種新型口服降糖藥，在腸道內可降低多糖及蔗糖分解成葡萄糖，使糖的吸收相應減緩，具有降低飯后血糖的作用，但長期服用會產(chǎn)生副作用，常有胃腸脹氣和腸鳴音，偶有腹瀉，極少腹痛[13-14]。因此，開發(fā)或篩選無毒副作用的降血糖類藥物或食品很有必要。

本實驗選取16份油梨及9份羊奶果種質資源，分析其果實對α-葡萄糖苷酶的抑制活性，旨在為今后定向選育油梨和羊奶果新品種及深入研究利用其營養(yǎng)及功能性成分提供一定理論基礎和參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

油梨實驗材料于2016年7～8月間采自海南省儋州市中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院果樹基地、海南省白沙縣大嶺農(nóng)場、廣西南寧市廣西職業(yè)技術學院果樹基地及云南德宏州瑞麗市郊，共計16份（表1）。羊奶果實驗材料于2015年3月末采自云南德宏州經(jīng)濟作物技術推廣站種植基地、云南德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學研究所種植基地及云南德宏州瑞麗市郊，共計9份（表1）。

1.2 方法

1.2.1 油梨和羊奶果果肉粗提物的制備

將油梨和羊奶果果肉置于60℃烘箱中烘24 h，烘干后的果肉被打碎成干粉。準確稱取油梨和羊奶果果肉干粉10 g，加入20 mL蒸餾水，放入超聲清洗儀器超聲提取20 min，4 000 r/min離心10 min，取中層清液。再將殘渣重復提取2次，合并上清液，定容至100 mL，其濃度為100 mg/mL，4℃冰箱保存，待測。

1.2.2 主要試劑的配制

α-葡萄糖苷酶磷酸緩沖液（10 mmol/L，pH=6.8），甲液（10 mmol/L K2HPO4）：準確稱取2.28 g K2HPO4·3H2O溶于1 000 mL蒸餾水；乙液（10 mmol/L KH2PO4）：稱取 1.36 g KH2PO4，溶于1 000 mL蒸餾水。分別取甲液51 mL和乙液49 mL，混合，4℃常溫保存?zhèn)溆谩?/p>

α-葡萄糖苷酶酶液（20 mg/mL，酶活力2 U/mL）：取α-葡萄糖苷酶375 U溶于750 mL磷酸緩沖液（冷凍備用）。

PNPG溶液（2.5 mmol/L）：準確稱取7.53 mg PNPG溶于100 mL磷酸緩沖液（10 mmol/L）中。

Na2CO3溶液（0.2 mmol/L）：2.12 g碳酸鈉溶于100 mL蒸餾水中。

阿卡波糖溶液（20 mg/mL）：將阿卡波糖標準品配制成濃度為20 mg/mL的阿卡波糖溶液。

1.2.3 抑制α-葡萄糖苷酶活性試驗

油梨和羊奶果果肉粗提物對α-葡萄糖苷酶的抑制實驗參照Oboh等和Uysal等[7，15]的方法加以改進。加入50 μL 10 mmol/L磷酸緩沖液，10 μL α-葡萄糖苷酶溶液和50 μL 20 mg/mL樣品溶液，混勻后置于96孔板中，利用酶標儀，將混合溶液在37℃下反應15 min。然后加入100 μL 2.5 mmol/L葡萄糖苷溶液（PNPG），在37℃下繼續(xù)反應10 min。加入100 μL 0.2 mmol/L碳酸鈉溶液終止反應，于405 nm處測吸光值。實驗選用阿卡波糖標準品為油梨和羊奶果果肉粗提物陽性對照。

酶活性抑制率/%=[1-（A1-A2）/（A3-A4）] ×100。

式中，A1：加入α-葡萄糖苷酶與樣品溶液的吸光值；A2：不加α-葡萄糖苷酶但添加樣品溶液的吸光值；A3：加α-葡萄糖苷酶但不加樣品溶液的吸光值；A4：不加α-葡萄糖苷酶也不加樣品溶液的吸光值。

2 結果與分析

不同油梨和羊奶果果肉粗提物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性見表2。

由表2可知，16份油梨果肉提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性在0.01%～10.22%，抑制活性最高的為RLW-3。總體來看，油梨果肉抑制α-葡萄糖苷酶活性效果不明顯。9份羊奶果果肉提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性在14.97%～99.84%，超過50%抑制率的有5號、6號、9號和13號，最高的為6號?？傮w來看，羊奶果果肉抑制α-葡萄糖苷酶活性效果較為明顯。

綜合分析，羊奶果6號果肉提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性較強，接近阿卡波糖100%抑制活性效果。

3 結論與討論

Gallagher等[5]對比了10種具有治療糖尿病功效的植物水提物對葡萄糖擴散的抑制作用，發(fā)現(xiàn)油梨水提物的葡萄糖擴散抑制率為60%，位列第二，僅次于龍牙草。Oboh等[6]分別提取油梨果實與葉片的多酚物質，檢測其對α-葡萄糖苷酶的離體抑制作用。結果發(fā)現(xiàn)，果實具有抑制α-葡萄糖苷酶活性作用。本實驗所選取的16份油梨果肉粗提物對α-葡萄糖苷酶抑制活性較低，這可能是由于品種原因所導致的。本實驗中9份羊奶果果肉粗提物抑制α-葡萄糖苷酶活性作用遠高于油梨果肉，甚至羊奶果6號果肉的抑制率接近阿卡波糖的抑制率。

目前，中國一般都在中草藥上篩選抑制α-葡萄糖苷酶活性的物質，但這些植物中抑制酶活性物質大多與具有毒副作用的物質共存，必須經(jīng)過分離才能減少或除去其毒副作用，而植物中活性物質的分離、提純又較為復雜，故很難應用于醫(yī)學臨床治療[16-19]。水果是人們日常生活中的常用食物，從水果中開發(fā)降血糖功能成分既方便又能克服提取難的問題[20]。羊奶果中主要的降血糖物質是多酚與黃酮，其分離、提純要比大多數(shù)中草藥活性物質容易。因此，對于羊奶果降血糖的研究可以提高羊奶果附加值，對于增加果農(nóng)收入、增強國民體質等都具有重要意義。

參考文獻

[1] Dreher M L，Davenport A J. Hass Avocado Composition and Potential Health Effects[J]. Critical Reviews in Food Science and Nutrition，2013，53：738-750.

[2] 張 良，張德生，劉康德. 海南省油梨產(chǎn)業(yè)發(fā)展的環(huán)境分析與對策[J]. 中國農(nóng)業(yè)資源與區(qū)劃，2015：78-84.

[3] 張陽梅，袁志章，劉代興，等. 西雙版納羊奶果資源收集和評價初報[J].中國南方果樹，2015，44（3）：98-102.

[4] Villa-Rodríguez J A， Molina-Corral F J， Ayala-Zavala J F， et al. Effect of maturity stage on the content of fatty acids and antioxidant activity of ‘Hass avocado[J]. Food Research International， 2011， 44： 1 231-1 237.

[5] Devalaraja S， Jain S， Yadav H. Exotic fruits as therapeutic complements for diabetes， obesity and metabolic syndrome[J]. Food Research International， 44： 1 856-1 865.

[6] Gallagher A M， Flatt P R， Duffy G，et al. The effects of traditional antidiabetic plants on in vitro glucose diffusion[J]. Nutrition Research，23： 413-424.

[7] Oboh G， Isaac A T， Akinyemi A J， et al. Inhibition of key enzymes linked to type 2 diabetes and sodium nitroprusside induced lipid peroxidation in rats' pancreas by phenolic extracts of avocado pear leaves and fruit[J]. International journal of Biomedical science， 10： 208-216.

[8] 安家成. 南胡頹子的綜合開發(fā)利用[J]. 廣西林業(yè)科學，2003，32（3）：157-158.

[9] 胡海濤，金曉琴，成龍平，等. 密花胡頹子果實主要類胡蘿卜素組分及含量分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學，2014，47（8）：1652-1656.

[10] 江詠梅，馬愛國，孫永葉，等. 鎂和β-胡蘿卜素對2型糖尿病大鼠糖脂代謝影響[J]. 中國公共衛(wèi)生，2009，25（12）：1428-1429.

[11] 王恩芳，劉曙瑋. 番茄紅素通過激活PI3K/Akt信號通路對2型糖尿病小鼠治療機制研究[J]. 實用糖尿病雜志，2015，11（5）：35-37.

[12] Meyer M D， Terry L A. Development of a rapid method for the sequential extraction and subsequent quantification of fatty acids and sugars from avocado mesocarp tissue[J]. Journal of Agricultural Food Chemistry， 2008， 56：7 439-7 445.

[13] 李亞美，陳 黎. 對比伏格列波糖片與阿卡波糖片治療2型糖尿病的臨床效果[J]. 中國醫(yī)藥指南，2015，13（20）：31-33.

[14] 張 迎，劉 穎，張新明. 阿卡波糖片輔助治療2型糖尿病療效觀察[J]. 糖尿病新世界，2015，2：23.

[15] Uysal S， Zengin G， Aktumsek A， et al. Fatty acid composition， total sugar content and anti-diabetic activity of methanol and water extracts of nine different fruit tree leaves collected from Mediterranean region of Turkey[J]. International Journal of Food Properties，18：2 268-2 276.

[16] 金汀龍，陳霞波. 臨床常用中藥降糖作用研究進展[J]. 浙江中西醫(yī)結合雜志，2015，25（5）：526-528.

[17] 廖 格，張友源，宋希強，等. 觀賞石斛與藥用石斛HPLC指紋圖譜及生物活性的比較[J]. 熱帶生物學報，2015（4）：420-425.

[18] 彭俊霖，梅文莉，劉子琦，等. 麻楝枝干的化學成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究[J]. 熱帶亞熱帶植物學報，2016，24（1）：99-105.

[19] 鄭 巧，楊二磊，朱 影，等. 地錦草提取物對體外α-葡萄糖苷酶抑制及抗氧化活性研究[J]. 中成藥，2016，38（2）：252-257.

[20] 王 周，張馳翔，蒲 博，等. 45種蔬菜水果對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性研究[J]. 食品科技，2015，40（3）：20-22.

① 基金項目：海南省自然科學基金（No.20163096）；農(nóng)業(yè)部物種資源保護（農(nóng)作物）項目（No.1251416305010）。

收稿日期：2016-09-06；責任編輯/葉慶亮；編輯部E-mail： rdnk@163.com。

② 葛 宇（1982～），助理研究員，博士，主要從事熱帶園藝植物育種與生物技術，E-mail： geyu@catas.cn。

③ 通訊作者。E-mail： zjwhma@163.com。