恩諾沙星誘導(dǎo)施氏鱘藥物性肝損傷模型的建立及復(fù)方中草藥保肝作用研究

欒學(xué)斌,王荻,劉紅柏

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院,江蘇無錫214081;2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所,黑龍江哈爾濱150070)

恩諾沙星誘導(dǎo)施氏鱘藥物性肝損傷模型的建立及復(fù)方中草藥保肝作用研究

欒學(xué)斌1、2,王荻2,劉紅柏1、2

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院,江蘇無錫214081;2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所,黑龍江哈爾濱150070)

為探究復(fù)方中草藥對(duì)施氏鱘Acipenser schrenckii藥物性肝損傷的保護(hù)作用,通過建立恩諾沙星肝損傷模型,在水溫 (15.5±1)℃下對(duì)3組自組中草藥復(fù)方的保肝作用進(jìn)行了篩選比較研究,試驗(yàn)設(shè)5組,對(duì)空白對(duì)照組及模型對(duì)照組1+齡施氏鱘以每天2%體質(zhì)量投喂基礎(chǔ)飼料,對(duì)3組復(fù)方中草藥組施氏鱘投喂相應(yīng)中草藥藥餌,試驗(yàn)進(jìn)行至第11天時(shí),復(fù)方中草藥組及模型對(duì)照組分別口灌160 mg/kg(體質(zhì)量)恩諾沙星,連續(xù)10 d,空白對(duì)照組以等量雙蒸水代替,口灌期間各組仍按原方式繼續(xù)投喂 (基礎(chǔ)飼料或藥餌),試驗(yàn)結(jié)束后,測(cè)定各組血清中與肝損傷相關(guān)的活性物質(zhì)含量及酶活性,并觀察肝組織病理變化情況。結(jié)果表明:與空白對(duì)照組相比,模型對(duì)照組供試鱘血清中T-AOC能力顯著下降 (P＜0.05),T-SOD活力極顯著下降 (P＜0.01),ALT、AST活力和MDA含量極顯著上升 (P＜0.01),肝組織切片顯示,器質(zhì)性病變明顯,肝損傷建模成功;3組復(fù)方中草藥均可升高供試鱘血清中T-SOD活力、T-AOC能力,降低MDA含量和AST、ALT活力;供試鱘血清生化指標(biāo)同其肝組織病理變化趨勢(shì)相吻合。研究表明,3組復(fù)方中草藥均能有效減輕恩諾沙星致施氏鱘肝細(xì)胞損傷,并對(duì)肝細(xì)胞恢復(fù)起到積極作用,尤其復(fù)方三中草藥效果明顯。

施氏鱘;中草藥;肝損傷;恩諾沙星

施氏鱘Acipenser schrenckii隸屬于鱘科Acipenseridae、鱘屬 Acipenser,主要分布于中國黑龍江流域[1-2],憑借其生長速度快、抗病力強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)價(jià)值高等優(yōu)勢(shì),已成為中國備受歡迎的養(yǎng)殖魚品種[3-4]。然而,病害頻發(fā)及養(yǎng)殖業(yè)者科學(xué)用藥知識(shí)匱乏,導(dǎo)致生產(chǎn)實(shí)踐中抗菌藥物的盲目使用。恩諾沙星作為廣譜抗菌、滲透性強(qiáng)的第三代喹諾酮類代表藥物,在水生動(dòng)物養(yǎng)殖過程中的應(yīng)用極其廣泛[5-6]。趙蕾等[6]、郭嬌嬌等[7]研究表明,恩諾沙星的不當(dāng)使用可導(dǎo)致銀鯽 Carassius auratus gibelio、鱘等魚類肝損傷。肝臟是魚體內(nèi)最大的實(shí)質(zhì)性器官,參與魚體分泌、消化、解毒和免疫等多種生命活動(dòng)[8]。魚類經(jīng)胃腸吸收的物質(zhì)幾乎全部進(jìn)入肝臟,并于其內(nèi)部進(jìn)行分解、轉(zhuǎn)化、合成和貯存,大幅度提高了肝臟受有毒物質(zhì)感染及損傷的機(jī)率[9-10]。

中草藥用于防治哺乳類動(dòng)物肝臟疾病的歷史悠久[11],而應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物方面的研究則起步較晚,目前仍處于摸索階段。研究表明,部分中草藥及其提取物對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的肝臟具有保護(hù)作用。有報(bào)道指出,當(dāng)歸Angelica sinensis[11]、枸杞Lycium chinense[12]、大黃Rheum officinale Baill[13]等中草藥提取物及部分中草藥復(fù)方[14]對(duì)建鯉Cyprinus carpio var. Jian、團(tuán)頭魴Megalobrama amblycephala Yih等水產(chǎn)動(dòng)物的肝臟也具有較好的保護(hù)作用。但施氏鱘藥物性肝損傷及適用于施氏鱘肝損傷修復(fù)的中草藥組方的篩選研究仍未見報(bào)道。

本試驗(yàn)中,首先摸索出恩諾沙星誘導(dǎo)供試鱘肝損傷的最適用藥時(shí)間及劑量,然后對(duì)供試鱘連續(xù)投喂拌飼中草藥藥餌,再加以口灌恩諾沙星,通過測(cè)定供試鱘血清中肝損傷相關(guān)的活性物質(zhì)含量及酶活性,以及觀察鱘肝組織病理變化情況,評(píng)價(jià)復(fù)方中草藥對(duì)施氏鱘藥物性肝損傷的保護(hù)作用,旨在為施氏鱘提供保肝中草藥組方以及為中草藥方劑在施氏鱘養(yǎng)殖中的科學(xué)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)供試鱘購自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院鱘魚繁育技術(shù)工程中心,為1+齡非免疫施氏鱘,體質(zhì)量為(100±2)g,飼養(yǎng)于室內(nèi)圓形水泥池 (半徑為1 m)中,以充分曝氣的地下水為水源,水溫為(15.5±1)℃。

試驗(yàn)用中藥飲片購自哈爾濱寶豐藥店;鹽酸恩諾沙星購自浙江國邦藥業(yè)有限公司,批準(zhǔn)文號(hào)浙獸藥字 (2003)X087212;總超氧化物歧化酶 (TSOD)、總抗氧化能力 (T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷草轉(zhuǎn)氨酶 (AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總蛋白 (TP)測(cè)定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所;伊紅、蘇木精染色液購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司;無水乙醇 (分析純)、二甲苯(分析純)購自天津市永大化學(xué)試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 恩諾沙星藥液的制備 準(zhǔn)確稱取鹽酸恩諾沙星,參照李紹戊等[15]的方法配制成50 g/L恩諾沙星藥液,避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 中草藥藥餌的制備 中草藥組方及每千克供試鱘給藥量如表1所示。按配比稱取3組復(fù)方中草藥,參照李超等[16]的方法制得水煎劑,待其常溫冷卻后,按比例加入到基礎(chǔ)飼料中攪拌均勻,置陰涼通風(fēng)處晾干,制得藥餌。

表1 中草藥組方及給藥量Tab.1 Ingredient and dose of the Chinese herbal medicines uesd in the experiment

1.2.3 藥物性肝損傷模型的構(gòu)建 參照趙蕾等[6]的方法,取部分供試鱘隨機(jī)分為4組,每組30尾鱘。試驗(yàn)組分別按40、80、160 mg/kg(體質(zhì)量,下同)劑量口灌恩諾沙星,連續(xù)10 d,對(duì)照組口灌等體積雙蒸水 (0 mg/kg)。于試驗(yàn)開始后第5、7、10天,按照孫裔雷等[17]的方法取供試鱘血清及肝組織,測(cè)定血清中ALT、AST活力及TP含量,同時(shí)參照白潔[18]的方法,制作肝組織病理切片并進(jìn)行H.E染色。

1.2.4 復(fù)方中草藥保肝試驗(yàn) 將供試鱘隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組和3組復(fù)方中草藥組(復(fù)方一、復(fù)方二、復(fù)方三),每組30尾鱘。停飼24 h后,空白對(duì)照組及模型對(duì)照組按每天2%體質(zhì)量投喂基礎(chǔ)飼料,3組復(fù)方中草藥組投喂相應(yīng)藥餌,連續(xù)投喂20 d。期間于第11天,按預(yù)試驗(yàn)建模所得的最適損傷劑量對(duì)復(fù)方中草藥組及模型對(duì)照組連續(xù)口灌恩諾沙星10 d(空白對(duì)照組以等量雙蒸水代替)。試驗(yàn)結(jié)束后,分別從各組隨機(jī)取供試鱘5尾,按照試劑盒說明書步驟,測(cè)定其血清中ALT、AST、T-SOD活力、TP、MDA含量和 TAOC能力,制作肝組織病理切片并進(jìn)行H.E染色。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 21軟件進(jìn)行單因素方差分析 (One-Way ANOVA)。

2 結(jié)果與分析

2.1 恩諾沙星藥物性肝損傷模型的建立

2.1.1 恩諾沙星對(duì)施氏鱘血清中ALT、AST活力及TP含量的影響 從圖1可見:與對(duì)照組 (0 mg/kg)相比,以160 mg/kg劑量連續(xù)口灌恩諾沙星7～10 d可導(dǎo)致鱘血清ALT、AST活力極顯著升高 (P＜0.01),連續(xù)口灌10 d后可導(dǎo)致TP含量極顯著降低 (P＜0.01);以80 mg/kg劑量連續(xù)口灌5 d可導(dǎo)致鱘血清TP含量顯著降低 (P＜0.05),連續(xù)口灌10 d后可導(dǎo)致 ALT、AST活力顯著升高(P＜0.05)、TP含量極顯著降低 (P＜0.01);以40 mg/kg劑量連續(xù)口灌10 d可導(dǎo)致鱘血清ALT活力極顯著升高 (P＜0.01)、AST活力顯著升高 (P＜0.05)。

圖1 恩諾沙星對(duì)施氏鱘血清中ALT、AST活力和TP含量的影響Fig.1 Effect of enrofloxacin on the activities of serum ALT and AST and total protein(TP)content in Amur sturgeon Acipenser schrenckii

2.1.2 恩諾沙星對(duì)施氏鱘肝組織病理變化的影響

圖2為連續(xù)口灌恩諾沙星10 d各組供試鱘肝臟組織病理切片。從圖2可見:0 mg/kg對(duì)照組肝細(xì)胞具有完整的肝索,肝細(xì)胞排列緊密,核近圓形,胞質(zhì)飽滿,組織致密 (圖2-B);80 mg/kg組雖偶有血細(xì)胞浸潤,但數(shù)量少、程度輕,與0 mg/kg對(duì)照組差異不明顯 (圖2-E);160 mg/kg組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)稀疏,肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)紊亂,同時(shí)伴有炎性細(xì)胞浸潤及細(xì)胞核固縮 (圖2-H),與0 mg/kg對(duì)照組差異明顯。

圖2 劑量篩選試驗(yàn)中鱘肝臟組織結(jié)構(gòu)觀察Fig.2 Histological observation of the liver of Amur sturgeon Acipenser schrenckiiin the dose sereening experiment

綜上所述,模型對(duì)照組按160 mg/kg劑量連續(xù)口灌恩諾沙星10 d,供試鱘血清中ALT、AST活力上升及TP含量降低,且其肝組織出現(xiàn)顯著器質(zhì)性損傷,恩諾沙星致施氏鱘肝損傷模型建立成功。

2.2 復(fù)方中草藥預(yù)防肝損傷

2.2.1 復(fù)方中草藥對(duì)施氏鱘血清中T-SOD活力、T-AOC能力和MDA含量的影響 從圖3可見:與空白對(duì)照組相比,模型對(duì)照組以160 mg/kg劑量口灌恩諾沙星10 d,可導(dǎo)致T-SOD活力極顯著降低(P＜0.01)、T-AOC能力顯著降低 (P＜0.05)、MDA含量極顯著升高 (P＜0.01);與模型對(duì)照組相比,3組復(fù)方中草藥均可導(dǎo)致T-SOD活力、TAOC能力不同程度的升高,且均對(duì)T-SOD活力影響極顯著 (P＜0.01),復(fù)方二、復(fù)方三對(duì)T-AOC能力影響極顯著 (P＜0.01),3組復(fù)方中草藥均可導(dǎo)致MDA含量顯著或極顯著降低 (P＜0.05或P＜0.01)。

圖3 復(fù)方中草藥對(duì)恩諾沙星致肝損傷的施氏鱘血清中T-SOD、T-AOC和MDA含量的影響Fig.3 Effect of Chinese herb medicines on the activities of serum T-SOD and T-AOC and MDA content in hepatic injury Amur sturgeon Acipenser schrenckii

2.2.2 復(fù)方中草藥對(duì)施氏鱘血清中AST、ALT活力的影響 從圖4可見:與空白對(duì)照組相比,模型對(duì)照組以160 mg/kg劑量口灌恩諾沙星10 d,可導(dǎo)致AST、ALT活力極顯著升高 (P＜0.01);與模型對(duì)照組相比,3組復(fù)方中草藥均可導(dǎo)致AST、ALT活力不同程度的降低,復(fù)方二、復(fù)方三對(duì)AST活力影響極顯著 (P＜0.01),對(duì)ALT活力影響顯著(P＜0.05)。

圖4 復(fù)方中草藥對(duì)恩諾沙星致肝損傷的施氏鱘血清中AST及ALT活性的影響Fig.4 Effect of Chinese herb medicines on the activities of AST and ALT in hepatic injury Amur sturgeon Acipenser schrenckii

2.2.3 復(fù)方中草藥對(duì)施氏鱘肝組織病理變化的影響 從圖5可見:空白對(duì)照組鱘肝細(xì)胞組織致密、結(jié)構(gòu)清晰,肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)及形態(tài)正常,細(xì)胞核大而圓,核邊界清晰,未見細(xì)胞腫脹及壞死;模型對(duì)照組鱘肝細(xì)胞存在炎性細(xì)胞浸潤、細(xì)胞核固縮等現(xiàn)象,且高倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn),肝細(xì)胞出現(xiàn)內(nèi)灶狀壞死、變形,另有部分肝細(xì)胞萎縮凋亡;與模型對(duì)照組相比,3組復(fù)方中草藥組鱘肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)均有不同程度的改善,細(xì)胞核邊界清晰,細(xì)胞空泡化程度減輕、無大片內(nèi)灶狀壞死,偶有炎性細(xì)胞浸潤,其中以復(fù)方三效果最明顯。

3 討論

3.1 恩諾沙星致施氏鱘肝損傷模型的建立

恩諾沙星廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物的病害防治,具有較好的抑菌殺菌效果,但其代謝緩慢、半衰期長,且施藥后于水產(chǎn)動(dòng)物肝臟中含量高、停滯期長[19-21]。Orman等[22]研究表明,恩諾沙星于肝臟內(nèi)部的主要代謝產(chǎn)物在醫(yī)學(xué)臨床上可誘發(fā)肝損傷。相關(guān)研究亦表明,恩諾沙星在殺滅細(xì)菌的同時(shí)促進(jìn)了大腸桿菌釋放內(nèi)毒素[23],內(nèi)毒素通過血液傳遞于肝組織,破壞肝臟細(xì)胞及線粒體,損害肝功能[24]。血漿蛋白質(zhì)由肝細(xì)胞合成與分泌,肝細(xì)胞損傷削弱其合成蛋白質(zhì)的能力,降低釋放于血液中的TP含量[25];此外,肝臟病變可導(dǎo)致其生物膜通透性變大,釋放出大量如AST、ALT等包漿酶,使血液中酶活力升高[26],故血液中TP含量、AST、ALT活力成為衡量機(jī)體肝損傷程度的常用指標(biāo)[27]。Suk等[28]研究表明,氧自由基損傷是藥物性、內(nèi)毒素性肝損傷的關(guān)鍵機(jī)制,血清中T-SOD活力、T-AOC能力和MDA含量可反映機(jī)體內(nèi)氧自由基含量及代謝速率,間接表明機(jī)體肝損傷情況。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,以80、160 mg/kg劑量的恩諾沙星口灌施氏鱘10 d,均可導(dǎo)致鱘血清中ALT、AST活力極顯著升高及TP含量極顯著降低;同時(shí),160 mg/kg劑量可使鱘肝臟形成器質(zhì)性損傷,破壞肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能,故本試驗(yàn)最終確定以160 mg/kg劑量對(duì)供試鱘連續(xù)口灌10 d恩諾沙星,建立肝損傷模型。

圖5 保肝試驗(yàn)中鱘肝臟組織結(jié)構(gòu)觀察Fig.5 Histological observation of the liver of Amur sturgeon Acipenser schrenckii in the protection experiment

3.2 復(fù)方中草藥對(duì)施氏鱘肝損傷的保護(hù)作用

T-AOC是機(jī)體抗氧化和清除自由基能力的總和[17],可間接反映機(jī)體自由基代謝狀態(tài)[29]。SOD廣泛存在于動(dòng)物機(jī)體內(nèi),是一種重要的氧自由基清除劑,SOD通過催化O-2·歧化為氧和過氧化氫,減少機(jī)體內(nèi)過高濃度的超氧陰離子自由基,提高機(jī)體免疫能力、保護(hù)細(xì)胞免受氧自由基毒害[30]。因此,T-AOC能力與T-SOD活力常被同時(shí)作為衡量機(jī)體抗氧化和清除氧自由基能力的指標(biāo)。此外,具有強(qiáng)生物毒性的MDA為脂質(zhì)過氧化反應(yīng)鏈?zhǔn)浇K止階段產(chǎn)生的小分子產(chǎn)物[31],是被普遍認(rèn)可的能反映氧自由基產(chǎn)生及引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的間接指標(biāo),其含量可以間接反映機(jī)體組織細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化程度及氧自由基的產(chǎn)生情況[32]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,3組復(fù)方中草藥均可導(dǎo)致供試鱘血清中T-SOD活力及T-AOC能力升高、MDA含量降低。究其原因,可能是3組復(fù)方中草藥含有的黃芩、甘草等藥材可以抑制機(jī)體對(duì)恩諾沙星的吸收,加速恩諾沙星的清除,同時(shí)提高機(jī)體清除自由基酶的活性,避免自由基引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng),保護(hù)肝細(xì)胞免受損傷,此結(jié)果同李素婷等[33]的研究結(jié)果相吻合。

生物體細(xì)胞膜含多種由不飽和脂肪酸構(gòu)成的脂質(zhì),而脂肪酸可同氧自由基發(fā)生氧化反應(yīng),改變細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),降低細(xì)胞膜流動(dòng)性,引發(fā)細(xì)胞膜蛋白變性[32]。當(dāng)肝細(xì)胞膜因脂質(zhì)過氧化反應(yīng)而功能受損、結(jié)構(gòu)破壞時(shí),細(xì)胞內(nèi)的ALT、AST等會(huì)釋放入血液[34],所以可通過檢測(cè)血清中ALT、AST的活力判斷藥物治療肝損傷的效果[35]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示, 3組復(fù)方中草藥均可導(dǎo)致供試鱘血清中ALT、AST活力降低,究其原因,可能是3組復(fù)方中草藥中含有的甘草、黃芩等藥材提高了供試鱘肝臟線粒體呼吸鏈復(fù)合體酶活性,并通過清除機(jī)體內(nèi)氧自由基來降低線粒體膜脂質(zhì)過氧化,減少線粒體腫脹度,恢復(fù)了線粒體結(jié)構(gòu)和功能的完整性[36-37]。相比較而言,AST的變化幅度更加明顯,可能是由于ALT大多位于細(xì)胞漿中,AST多位于線粒體、少部分位于細(xì)胞漿,而甘草、黃芩等對(duì)線粒體細(xì)胞膜的修復(fù)及細(xì)胞器功能的恢復(fù)更加有效[36-37]。此外,供試鱘血清生化指標(biāo)變化趨勢(shì),同供試鱘肝組織病理變化基本吻合。

4 結(jié)語

為探究復(fù)方中草藥對(duì)恩諾沙星致施氏鱘肝損傷的保護(hù)作用,本試驗(yàn)中首先摸索出恩諾沙星誘導(dǎo)施氏鱘肝損傷的最佳劑量及采樣時(shí)間分別為160 mg/kg、10 d,然后階段性投喂中草藥藥餌,并輔以口灌恩諾沙星構(gòu)建肝損傷模型。結(jié)果顯示,3組復(fù)方中草藥均能有效調(diào)動(dòng)供試鱘機(jī)體免疫相關(guān)酶活性、清除機(jī)體超氧陰離子自由基,以減輕藥物對(duì)鱘肝細(xì)胞的損傷,并對(duì)肝組織結(jié)構(gòu)及功能的恢復(fù)起到積極作用,尤其復(fù)方三中草藥效果最為顯著,可作為保護(hù)鱘藥物性肝損傷的中草藥組方加以深入研究。

[1] Wei Qiwei,Ke Fuen,Zhang Jueming,et al.Biology,fisheries,and conservation of sturgeons and paddlefish in China[J].Environmental Biology of Fishes,1997,48(1-4):241-255.

[2] Zhuang P,Kynard B,Zhang L,et al.Overview of biology and aquaculture of Amur sturgeon(Acipenser schrenckii)in China[J].Journal of Applied Ichthyology,2002,18(4-6):659-664.

[3] 孫裔雷,王荻,劉紅柏.復(fù)方中草藥對(duì)施氏鱘非特異性免疫功能的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2005,31(8):45-49.

[4] Wang Tingting,Sun Yongxin,Jin Liji,et al.Enhancement of nonspecific immune response in sea cucumber(Apostichopus japonicus)by Astragalus membranaceus and its polysaccharides[J].Fish &Shellfish Immunology,2009,27(6):757-762.

[5] 郭嬌嬌,宮智勇.恩諾沙星在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究進(jìn)展[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(4):290-292.

[6] 趙蕾,曹海鵬,陳輝,等.恩諾沙星對(duì)銀鯽急性毒性及血液生化指標(biāo)的影響[J].動(dòng)物學(xué)雜志,2013,48(3):446-450.

[7] 郭嬌嬌,楊虎,潘紅艷,等.恩諾沙星對(duì)鱘魚的急性毒性研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2010(20):311,315.

[8] 朱安妮.垂盆草對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷保護(hù)作用的研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2014:23.

[9] Amold H,Pluta H J,Braunbeck T.Sublethal effects of prolonged exposure to disulfoton in rainbow trout(Oncorhynchus mykiss):cytological alterations in the liver by a potent acetylcholine esterase inhibitor[J].Ecotoxicology and Environmental Safety,1996,34 (1):43-55.

[10] Moutouk K A,Braunbeck T,Houlihan D F.Quantitative analysis of alterations in liver ultrastructure of rainbow trout Oncorhynchus mykiss after administration of the aquaculture antibacterials oxolinic acid and flumequine[J].Diseases of Aquatic Organisms, 1997,29(1):21-34.

[11] 曹麗萍,賈睿,丁煒東,等.建鯉急性肝損傷模型的建立及當(dāng)歸提取物的保肝和抗氧化作用研究[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2012,27(6):551-557.

[12] 劉英娟,杜金梁,賈睿,等.枸杞多糖對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)建鯉原代肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2014,23(5):718-725.

[13] 明建華,謝駿,徐跑,等.大黃素、維生素C及其配伍對(duì)團(tuán)頭魴感染嗜水氣單胞菌后生理生化指標(biāo)的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2011,18(3):588-601.

[14] 李斌,唐毅,王志干,等.復(fù)方中草藥制劑對(duì)草魚肝膽綜合癥的防治研究[J].南方水產(chǎn)科學(xué),2011,7(2):35-41.

[15] 李紹戊,王荻,馬濤,等.恩諾沙星對(duì)小體鱘和史氏鱘體內(nèi)SOD活力影響的比較研究[J].水產(chǎn)學(xué)雜志,2011,24(2):37-40.

[16] 李超,張其中,朱成科,等.增強(qiáng)草魚免疫功能的復(fù)方中草藥免疫增強(qiáng)劑篩選[J].西南師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2012, 37(4):121-129.

[17] 孫裔雷,王荻,劉紅柏.復(fù)方中草藥對(duì)虹鱒抗氧化能力的影響[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2015,30(2):170-174.

[18] 白潔.葉下珠對(duì)魚類肝損傷保護(hù)機(jī)理的研究[D].福州:福建農(nóng)林大學(xué),2008:33.

[19] Anadón A,Matínez-Larra?aga M R,Díaz M J,et al.Pharmacokinetics and residues of enrofloxacin in chickens[J].American Journal of Veterinary Research,1995,56(4):501-506.

[20] Banholzer E,Heinritzi K,Steinhausen G.Pharmacokinetics of enroflocacin in slarghter pigs following different routes of administration[J].Journal of Vet Pharmacology Therapy,1997,20(1):48.

[21] Dosogne H,Meyer E,Sturk A,et al.Effect of enrofloxacin treatment on plasma endotoxin during bovine Escherichia coli mastitis [J].Inflammation Research,2002,51(4):201-205.

[22] Orman E S,Conjeevaram H S,Vuppalanchi R,et al.Clinical and histopathologic features of fluoroquinolone-induced liver injury [J].Clinical Gastroenterology and Hepatology,2011,9(6):517-523.

[23] Shinozuka Y,Uematsu K,Takagi M,et al.Comparison of the amounts of endotoxin released from Escherichia coli after exposure to antibiotics and ozone:an in vitro evaluation[J].Journal of Veterinary Medical Science,2008,70(4):419-422.

[24] Fan Junhua,Feng Guogang,Huang Lei,et al.Role of naofen in apoptosis of hepatocytes induced by lipopolysaccharide through mitochondrial signaling in rats[J].Hepatology Research,2012, 42(7):696-705.

[25] 賈睿.黃芪多糖對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)鯉魚肝(細(xì)胞)損傷的保護(hù)作用[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2011:48.

[26] 王子錫.肝膽疾病患者血清肝酶譜變化及分析[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,20(24):3044-3045.

[27] 郭凡溪,錢林東,劉騰飛,等.恩諾沙星聯(lián)合脂多糖致復(fù)合式雞肝損傷模型的建立[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(8):212-214.

[28] Suk K T,Kim D J.Drug-induced liver injury:present and future [J].Clinical and Molecular Hepatology,2012,18(3):249-257.

[29] 劉曉勇,張穎,齊茜,等.枯草芽孢桿菌對(duì)雜交鱘幼魚生長性能、消化酶活性及非特異性免疫的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué), 2011,18(6):1315-1320.

[30] 王吉橋,樊瑩瑩,徐振祥,等.飼料中β-胡蘿卜素和蝦青素添加量對(duì)仿刺參幼參生長及抗氧化能力的影響[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2012,27(3):215-220.

[31] 劉波,何慶國,唐永凱,等.饑餓脅迫對(duì)吉富羅非魚生長及生理生化指標(biāo)的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2009,16(2):230-237.

[32] 劉富萍,張琪,谷楠,等.谷胱甘肽及丙二醛在炎癥中表達(dá)的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)美學(xué)美容,2015,24(6):1001-1002.

[33] 李素婷,楊鶴梅,石艷華,等.黃芩莖葉總黃酮保肝作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2004,11(7):593-594.

[34] 賈睿,曹麗萍,杜金梁,等.水飛薊素對(duì)四氯化碳致鯽肝(細(xì)胞)損傷的保護(hù)和抗氧化作用[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2013,20 (3):551-560.

[35] 蘭鳳英,何靜春,趙穎,等.郁金抗四氯化碳致小鼠急性肝損傷的作用[J].中國康復(fù)理論與實(shí)踐,2007,13(5):444-445.

[36] 張改平,楊建雄.甘草提取物對(duì)鼠肝細(xì)胞線粒體氧化損傷的作用保護(hù)[J].生物加工過程,2011,9(1):50-54.

[37] 耿廣琴,楊志軍,楊秀娟,等.黃芩水煎液對(duì)CCl4肝損傷小鼠肝線粒體的影響[J].中國中醫(yī)藥科技,2015,22(6):641-643.

A model of drug-induced liver injury caused by enrofloxacin and protective effects of compound Chinese herbal medicines on livers in Amur sturgeon Acipenser schrenckii

LUAN Xue-bin1,2,WANG Di2,LIU Hong-bai1,2

(1.Wuxi Fisheries College,Nanjing Agricultural University,Wuxi 214081,China;2.Heilongjiang River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Harbin 150070,China)

After a trial on an inducing sturgeon liver injury model(M group)via requirement time and dose test, Amur sturgeon Acipenser schrenckii with body weight of(100±2)g were reared in a circular cement pond and fed the basal diet in the control group and diets containing Chinese herbal medicine compound(Chinese herbal medicine groups,CHM groups and drug-induced liver injury model group,M group)at daily feeding rate of 2%at water temperature of(15.5±1.0)℃ for 11 days.Then enrofloxacin was given to the Amur sturgeon in CHM groups and M group at a dose of 160 mg/kg body weight and equivalent double distilled water was given to the Amur sturgeon in control group by oral administration for 10 days to explore the protective effect of compound Chinese herbal medicines on drug-induced liver injury in Amur sturgeon.The levels of hepatic active materials and activities of enzymes in serum were detected and the hepatic histopathology was observed in the Amur sturgeon administrated above.Results showed that there were significantly lower serum level of total antioxidant capacity(T-AOC)(P＜0.05)and very significantly lower total superoxide dismutase(T-SOD)activities(P＜0.01),and very significantly higher activities of glutamic-pyruvic transaminase(ALT),and glutamic oxalacetic transaminase(AST)and malondialdehyde(MDA)level(P＜0.01)in the Amur sturgeon in M group than those in the control group,with obvious liver histopathology under a microscope,indicating that the liver was injured obviously and the liver injury model was established successfully.The Amur sturgeon in CHM groups had higher serum level of T-AOC and activities of T-SOD,and lower serum level of MDA and activities of AST and ALT,with the same characteristics of hepatic histopathology.The findings proved that Chinese herbal medicines inhibited the physical absorption of enrofloxacin, improved the ability of scavenging free radicals,and promoted hepatocyte recovery,especially compoundⅢ.

Acipenser schrenckii;Chinese herbal medicine;liver injury;enrofloxacin

S941.8

A

10.16535/j.cnki.dlhyxb.2017.01.003

2095-1388(2017)01-0013-07

2016-06-24

國家公益性行業(yè) (農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng) (201203085)

欒學(xué)斌 (1991—),男,碩士研究生。E-mail:luanxuebin97592@163.com

劉紅柏 (1970—),女,博士,研究員。E-mail:liuhongbai@sina.com