雌二醇濃度測定方法研究進(jìn)展

黃泓軻+羅健瑋

摘 要 雌二醇在人體內(nèi)起著維持第二性征和調(diào)控副性器官的重要功能，其測定對多種疾病診斷具有重要意義。本文就現(xiàn)有測定雌二醇的各種方法進(jìn)行分析比較優(yōu)缺點(diǎn)，對雌二醇測定方法前景進(jìn)行展望。

關(guān)鍵詞 雌二醇 測定方法 色譜法

中圖分類號：O657.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.16400/j.cnki.kjdkx.2017.01.014

雌二醇（E2）是育齡婦女體內(nèi)卵巢或者黃體分泌的雌激素，由卵巢或前列腺分泌后，經(jīng)血流和組織液轉(zhuǎn)運(yùn)到靶組織（子宮、輸卵管、陰道、垂體等），能與血漿蛋白高度結(jié)合，在雌激素反應(yīng)組織內(nèi)能與特異性受體蛋白結(jié)合形成“活化”的復(fù)合體，維持第二性征和調(diào)控副性器官的功能，其主要藥理作用為：（1）促使子宮內(nèi)膜增生；（2）增強(qiáng)子宮平滑肌的收縮；（3）促使乳腺導(dǎo)管發(fā)育增生，但達(dá)到較大劑量時(shí)則抑制垂體前葉釋放催乳素，從而減少乳汁分泌；（4）抗雄激素作用；（5）降低血中膽固醇，并能增加鈣在骨中的沉著。

1 雌二醇測定的臨床意義

雌二醇在血液中的濃度主要受下丘腦-垂體-性腺軸調(diào)節(jié)控制，呈周期性波動(dòng)規(guī)律。雌二醇濃度過高或過低都會(huì)導(dǎo)致生殖及內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂，從而引發(fā)多種疾病，例如幼女性早熟、月經(jīng)紊亂、不孕不育、異位妊娠等。

（1）雌二醇在發(fā)育過程中的分泌與釋放，對于幼女性早熟的鑒定有著重要的診斷意義。①測定雌二醇水平可了解其影響程度，再結(jié)合其他輔助檢查，可以了解是原發(fā)性性早熟抑或是由卵巢腫瘤、垂體腫瘤引起。

（2）絕經(jīng)過渡期婦女由于體內(nèi)雌二醇水平的改變常常造成月經(jīng)周期紊亂，出血過多、過頻等生理癥狀。②目前臨床上進(jìn)行絕經(jīng)治療，主要是基于模仿月經(jīng)周期的雌孕激素水平來給藥。因而測定雌二醇水平對于臨床給藥劑量的選定和藥物的選用都具有十分重要的指導(dǎo)意義。

（3）雌二醇可以輔助不孕和月經(jīng)稀發(fā)的診斷以及確定卵巢衰竭狀態(tài)，廣泛用于監(jiān)測誘導(dǎo)排卵和體外受精方案。羅秀③等人通過實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)在黃體期補(bǔ)充雌二醇可以提高患者體外受精的成功率和胚胎移植周期的妊娠率。（4）早期診斷及治療異位妊娠是挽救患病婦女生命和保存患者生育能力的關(guān)鍵。Geveaert④等人發(fā)現(xiàn)異位妊娠時(shí)，孕婦血清雌二醇濃度低于正常宮內(nèi)孕者。由此可見，雌二醇的濃度檢測對于異位妊娠的早期診斷具有重要意義。

除了直接給生殖及內(nèi)分泌系統(tǒng)帶來巨大影響外，雌二醇也會(huì)對其他系統(tǒng)疾病帶來明顯的效應(yīng)。常見的一些疾病，如性激素依賴性腫瘤、老年癡呆癥等神經(jīng)損傷、肝硬化等疾病也與雌二醇有著十分重要的聯(lián)系。

（1）雌二醇濃度的變化是引發(fā)性激素依賴性腫瘤（如乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等）的原因之一。Ghosh⑤等人研究發(fā)現(xiàn)雌二醇的表達(dá)變化將對闡述卵巢癌的發(fā)病機(jī)制及診斷和預(yù)后判斷上的作用有著重大意義。若有雌二醇水平異常升高時(shí)，則可能是功能性卵巢腫瘤。

（2）流行病學(xué)研究顯示雌二醇可以延緩并降低老年癡呆癥（AD）的發(fā)病率。Rozovsky等人通過研究發(fā)現(xiàn)17 -E2>1 nmol/L時(shí)能發(fā)揮大腦保護(hù)作用，此研究提示雌二醇濃度與其大腦保護(hù)作用具有一定的相關(guān)性。

（3）雌二醇對肝臟有重要的保護(hù)作用，可以抑制肝纖維化的形成?？伦鹌舰薜热税l(fā)現(xiàn)雌二醇能降低結(jié)締組織生長因子（CTGF）和轉(zhuǎn)化生長因子- （TGF- ）的mRNA和蛋白表達(dá)。

由于雌二醇與體內(nèi)多種疾病的發(fā)生與治療密切相關(guān)，因此準(zhǔn)確地測定血液中雌二醇濃度對于疾病的診斷和治療具有極其重要的意義。

2 雌二醇測定方法研究進(jìn)展

隨著人們對體內(nèi)雌二醇濃度測定的越來越重視，用于體內(nèi)雌二醇測定的方法和儀器正以日新月異地速度發(fā)展著。目前用于體內(nèi)雌二醇測定的方法主要包括放射免疫分析法、酶聯(lián)免疫吸附分析法、免疫放射分析法、時(shí)間分辨熒光免疫分析、酶放大化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)發(fā)光法、色譜法、電化學(xué)傳感器法等。⑦

2.1 放射免疫分析法

放射免疫分析法是最常用的，也是最早建立的一種可以用于檢測體內(nèi)雌二醇濃度的免疫分析法。放射免疫分析法優(yōu)點(diǎn)突出：特異性強(qiáng)，不受周圍環(huán)境和樣本內(nèi)干擾物質(zhì)的影響；低本底和高靈敏度；與小分子量同位素的結(jié)合不影響免疫反應(yīng)；應(yīng)用范圍廣，具有完善的放射測量體系；操作簡便等。但其缺點(diǎn)也是顯而易見的：同位素的半衰期使得試劑盒穩(wěn)定性低；結(jié)合于抗原或抗體分子上的125I分子有限，過高會(huì)引起結(jié)合物的自照射分解；試劑的使用，購買以及廢物處理等均引起一定的輻射安全問題；實(shí)驗(yàn)容易產(chǎn)生交叉反應(yīng)、假陽性反應(yīng)，采血量大，反應(yīng)測定時(shí)間較長。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附分析法

曾經(jīng)認(rèn)為酶聯(lián)免疫吸附分析法可以完全取代放射免疫分析法，該方法特異性高、操作簡便、無污染。但是這種通過比色法或偏振光法進(jìn)行檢測的方法干擾大，易產(chǎn)生假陽性反應(yīng)，其靈敏度和穩(wěn)定性也未能高于放射免疫分析法。

2.3 免疫放射分析法

免疫放射分析法標(biāo)記抗體的比活度高，提高了分析的靈敏度（>l0-12～l0-9 mol/L）。反應(yīng)快，范圍廣，特異性高，穩(wěn)定度高的優(yōu)點(diǎn)讓免疫放射分析法越來越受到青睞，但是由于放射性標(biāo)記帶來的半衰期短和同位素污染成為該方法不可避免的負(fù)面影響。

2.4 時(shí)間分辨熒光免疫分析法

時(shí)間分辨熒光免疫分析法由于具有極高的分析靈敏度（l0-12～l0-9 mol/L）、寬闊的測量范圍、優(yōu)良的分析精密性和對多個(gè)待測物同時(shí)檢測的能力，成為方法學(xué)上最具優(yōu)勢的非放射免疫分析技術(shù)之一，但是昂貴的儀器價(jià)格，使得該方法的普及無法達(dá)到滿意的程度。

2.5 酶放大化學(xué)發(fā)光法

酶放大化學(xué)發(fā)光分析法靈敏度高（l0-12～l0-9 mol/L）、時(shí)間短、自動(dòng)化程度高、線性范圍寬、對環(huán)境無污染，其采用的化學(xué)發(fā)光法可與RIA媲美，是一種功能全，運(yùn)行平穩(wěn)，高效快速準(zhǔn)確的化學(xué)發(fā)光分析儀。但是化學(xué)發(fā)光分析儀價(jià)格昂貴，重要操作環(huán)節(jié)須由專業(yè)人員監(jiān)控，對機(jī)器運(yùn)行環(huán)境有一定要求，不利于臨床推廣。

2.6 電化學(xué)發(fā)光法

電化學(xué)發(fā)光法具有靈敏度高（l0-12～l0-9 mol/L）、儀器設(shè)備簡單、分析速度快、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，然而該方法采用非直接標(biāo)記，易造成交叉污染，易受環(huán)境因素干擾，并且設(shè)備價(jià)格昂貴，依然不適合廣大患者方便利用。

2.7 色譜法

常用于含量測定的色譜法主要有氣相色譜法和高效液相色譜法，準(zhǔn)確度高，分析時(shí)間短，但檢測靈敏度較差，無法用于痕量雌二醇的測定。因此為了提高檢測靈敏度，現(xiàn)在常用的色譜方法是氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）法。GC-MS/HPLC-MS法靈敏度極高（l0-14～l0-9 mol/L），檢出限低，分析時(shí)間短。但是該方法在測定之前需要對待測物質(zhì)進(jìn)行多種處理，儀器價(jià)格昂貴，并且需要專業(yè)人員才能操作，不利于臨床上廣泛使用。

2.8 電化學(xué)傳感器法

電化學(xué)傳感器具有靈敏度高（l0-12～l0-9 mol/L），特異性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，成本低，采血量少，使得電化學(xué)傳感器法成為一種迅速發(fā)展的雌二醇測定方法，具有廣泛應(yīng)用于臨床檢測的潛力。但是玻碳電極在每次測試前都需要重新修飾，不利于樣品的批量或者連續(xù)測定，加之待測樣品的前處理過程復(fù)雜，也影響了該方法的廣泛應(yīng)用。

3 雌二醇濃度測定方法發(fā)展方向

由于現(xiàn)有的用于檢測雌二醇的方法都具有各自不同的缺點(diǎn)，因而在臨床檢測上都受到一定的局限。在現(xiàn)有測定方法中由于傳感器具有成本低，靈敏度高，特異性強(qiáng)，穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于分析測試領(lǐng)域。隨著對體內(nèi)雌二醇濃度測定的越來越重視，雌二醇傳感器也將在科學(xué)技術(shù)發(fā)展的推動(dòng)下以日新月異的速度發(fā)展著。

項(xiàng)目來源：樂山市科技局2015年產(chǎn)學(xué)研合作項(xiàng)目《即拋型雌二醇傳感器的制備及其應(yīng)用研究》，項(xiàng)目編號15GZD131

注釋

① 王月影，崔麗君，邱輝.電化學(xué)發(fā)光法測定女童血清雌二醇在性早熟診斷中的應(yīng)用[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010.44（4）：394-395.

② Cheung A.M.， Chaudhry R.， Kapral M.， et a1.Perimenopausal and postmenopausal health [J].BMC Womens Health，2004.25（4 Suppl1）：S23.

③ 羅秀，余凡，印賢琴等.黃體期雌二醇預(yù)處理方案改善卵巢低反應(yīng)者體外受精胚胎移植結(jié)局的初步研究[J].生殖醫(yī)學(xué)雜志，2009.18（4）：341-344.

④ Geveaert O.， De Semt F.， Kirk E， et al.Predicting the outcome of pregnancies of unknown location：Bayesian networks with expert prior information eompartd to logistic regression[J].Human Reproduction，2006.21（7）：1824-1831.

⑤ Ghosh M. C.， Grass L.， Soosaipillai A.， et a1.Human kallikrein 6 degrades extracellular matrix proteins and may enhance the metastatic potential oftulnour cells[J].Tumour Biol，2004.25（4）：193-199.

⑥ 柯尊平，高愛梅，平潔等.17 -雌二醇對復(fù)合因素所致大鼠肝纖維化的膠原降解作用[J].西部醫(yī)學(xué)，2010.22（11）：1992-1994.

⑦ 呂時(shí)銘.生殖激素的測定與臨床應(yīng)用[J].醫(yī)師進(jìn)修雜志，2000.23（5）：11-13.