急性早幼粒細(xì)胞白血病患者治療前后血漿硫化氫濃度變化及意義

范 凌,劉東艷，范 靜,陳立鋒,王 平,李 琦,郭力榮，張 斌，佟長(zhǎng)青

(1.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院血液內(nèi)科，河北 張家口 075000;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100700；3.河北省張家口市第六醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 張家口 075000;4.河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理教研室，河北 張家口 075000;5.河北省張家口市優(yōu)撫醫(yī)院泌尿外科，河北 張家口 075000;6.河北省張家口市第一醫(yī)院腎內(nèi)科和血液內(nèi)科，河北 張家口 075000)

急性早幼粒細(xì)胞白血病患者治療前后血漿硫化氫濃度變化及意義

范 凌1,劉東艷2，范 靜3,陳立鋒4,王 平5,李 琦1,郭力榮6，張 斌1，佟長(zhǎng)青1

(1.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院血液內(nèi)科，河北 張家口 075000;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100700；3.河北省張家口市第六醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 張家口 075000;4.河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理教研室，河北 張家口 075000;5.河北省張家口市優(yōu)撫醫(yī)院泌尿外科，河北 張家口 075000;6.河北省張家口市第一醫(yī)院腎內(nèi)科和血液內(nèi)科，河北 張家口 075000)

目的 探討急性早幼粒細(xì)胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)患者治療前后血漿H2S濃度變化及意義。方法 隨機(jī)選取初治APL住院患者26例為病例組，健康體檢者26例為對(duì)照組。去蛋白法測(cè)定血漿H2S濃度，比較病例組患者急性發(fā)病期、臨床緩解期血漿H2S濃度與健康對(duì)照組之間的差異。結(jié)果 病例組患者急性發(fā)病期血漿H2S濃度明顯升高，與臨床緩解期和對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；病例組經(jīng)治療后進(jìn)入臨床緩解期的患者血漿H2S濃度下降，接近健康對(duì)照組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)。結(jié)論 內(nèi)源性H2S參與了APL發(fā)生發(fā)展的病理生理過(guò)程。

急性早幼粒細(xì)胞白血病；硫化氫；血漿

目前研究發(fā)現(xiàn)氣體信號(hào)分子H2S在人體具有重要的生理和病理生理調(diào)節(jié)作用，并與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)[1-5]。但有關(guān)H2S與急性早幼粒細(xì)胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)關(guān)系的研究報(bào)道少見(jiàn)。我們檢測(cè)了初治APL患者治療前后血漿H2S濃度的變化，探討H2S在APL發(fā)病過(guò)程中的作用及意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2014-01-01—2014-12-31河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院收治的初治APL住院患者26例為病例組，診斷及療效判斷均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[6]，其中男12例，女14例；年齡19～52歲，中位年齡35歲；經(jīng)治療后，臨床緩解病例22例，其中男9例，女13例。選取同期體檢中心健康體檢者26例為對(duì)照組，其中男12例，女14例；年齡22～50歲，中位年齡36歲。均排除心、腦、肺等主要臟器疾病。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 晨起抽取空腹靜脈血2 mL，置EDTA-K2抗凝管，3 000 r·min-1離心10 min，吸血漿至EP管，置-75℃低溫冰箱保存，待測(cè)H2S濃度。病例組中22例臨床緩解病例治療緩解后抽血復(fù)查。

1.2.2 測(cè)定方法 測(cè)定前血清標(biāo)本室溫復(fù)融，3 000 r·min-1離心10 min，取上清液，去蛋白法檢測(cè)H2S濃度[6]。首先用不同濃度NaHS標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，直線回歸方程為：Y=1513.1X±2.362，r2=0.998。反應(yīng)在5 mL玻璃試管中完成，按序加入以下試劑：首先在玻璃試管中加入10 g·L-1醋酸鋅0.5 mL，然后加入血漿標(biāo)本0.1 mL，振蕩搖勻，再依次加入20 mmol·L-1對(duì)苯二胺鹽酸鹽0.5 mL和30 mmol·L-1三氯化鐵0.5 mL，室溫孵育20 min使其充分反應(yīng)，再加入1 mL 10%三氯醋酸使蛋白沉淀，最后加入2.5 mL蒸餾水補(bǔ)足體積至5mL，再次充分混勻，6 000 r·min-1離心5 min，吸出上清液，722分光光度計(jì)在670 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，根據(jù)繪好的H2S標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出上清液中H2S含量，單位:μmol·L-1。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

APL患者急性發(fā)病期H2S濃度為(88.32±7.12)μmol·L-1，臨床緩解期H2S濃度為(46.75±5.94)μmol·L-1；正常對(duì)照組H2S濃度為(45.8±6.11)μmol·L-1。病例組急性發(fā)病期與正常對(duì)照組相比H2S含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；臨床緩解期與急性發(fā)病期相比H2S含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；臨床緩解期與正常對(duì)照組相比H2S含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

H2S是毒性氣體，近年研究發(fā)現(xiàn)H2S在人體內(nèi)也有產(chǎn)生，是人類發(fā)現(xiàn)的第三個(gè)氣體信使分子，是在體內(nèi)由含硫氨基酸如同型半胱氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸等在磷酸吡多醛-5’-磷酸依賴性酶(包括CBS、CSE)、半胱氨酸轉(zhuǎn)移酶等催化作用下產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物[6]。有研究表明內(nèi)源性H2S參與了許多臨床疾病的病理生理過(guò)程，例如腎病、左心室肥厚、腦梗死、腫瘤、胰腺炎等[1-5]。

本研究發(fā)現(xiàn)APL急性發(fā)病期患者血漿H2S濃度明顯升高，經(jīng)治療緩解后H2S濃度回降至接近正常對(duì)照組，表明內(nèi)源性硫化氫H2S參與了APL的病理生理過(guò)程。其機(jī)制我們認(rèn)為可能為：①某種原因?qū)е律蒆2S的原料(如同型半胱氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸)增加；②生成H2S的酶(如CBS、CSE等)生成增多和(或)活性升高；③H2S在體內(nèi)的清除速度減緩。研究發(fā)現(xiàn)H2S對(duì)多種癌細(xì)胞增殖與凋亡有調(diào)節(jié)作用[7-12]，在APL急性發(fā)病期，可能由于某種負(fù)反饋機(jī)制的存在，導(dǎo)致H2S濃度升高，升高的H2S促進(jìn)了APL細(xì)胞凋亡并抑制了其增殖，減緩了APL的發(fā)展速度，是機(jī)體自我保護(hù)機(jī)制之一。臨床緩解期患者血漿H2S濃度降至接近正常水平，表明了這種負(fù)反饋機(jī)制的存在。至于確切原因，有待進(jìn)一步深入研究。

[1]Feliers D,Lee H J,Kasinath B S.Hydrogen sulfide in renal physiology and disease[J].Antioxid Redox Signal.2016,25(13):720-731.

[2]楊銳,賈強(qiáng),劉小粉,王元元,高琴,馬善峰.硫化氫對(duì)糖尿病大鼠心肌肌球蛋白輕鏈激酶表達(dá)的影響[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2016,(4):353-358.

[3]任彩麗,趙紅崗,蔡德亮,等.腦梗死患者血漿中內(nèi)源性硫化氫含量的變化[J].中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志,2010,36(1):43-45.

[4]李明,王天曉.內(nèi)源性硫化氫在腫瘤中的研究進(jìn)展[J].河南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2014,33(3):226-228.

[5]盧根林,吳愛(ài)兵,王宏賓.急性胰腺炎患者內(nèi)源性硫化氫水平的變化及與凝血功能的關(guān)系[J].中華危重病急救醫(yī)學(xué),2016,28(3):217-220.

[6]張之南，沈悌．血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)[M]．2版．北京：科學(xué)出版社，1998：103-121．

[7]Zhao W M,Zhang J,Lu Y J,et al.The vasorelaxant effect of H2S as a novel endogenous gaseous KATP channel opener[J].EMBO J,2001,20(21):6008-6016.

[8]于志剛,鄭宏磊,冉學(xué)紅,等.急性白血病患者血漿H2S水平測(cè)定臨床意義分析[J].中華腫瘤防治雜志,2012,19(20):1587-1589.

[9]林嘉瑩,武兆忠,蘇杭,等.外源性硫化氫單獨(dú)或聯(lián)合131I對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(21):3513-3516.

[10]陳寧,王珊珊,陳玉涵,等.外源性硫化氫對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG2自噬的影響[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015,36(1):116-120.

[11]楊云,董琳,黃圣旺,等.硫化氫下調(diào)MMP-9的表達(dá)抑制肝癌HepG2細(xì)胞的遷移[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2013,29(12):1676-1679.

[12]洪敏.硫化氫對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和遷移的影響[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,34(5):699-703.

[責(zé)任編輯：李薊龍 英文編輯：劉彥哲]

Changes and Significance of Plasma Hydrogen Sulfide Concentration before and after Treatment in Patients with Acute Promyelocytic Leukemia

FAN Ling1，LIU Dong-yan2,FAN Jing3，CHEN Li-feng4，WANG Ping5, LI Qi1,GUO Li-rong6,ZHANG Bin1,TONG Chang-qin1
(1.Department of Hematology,The First Affiliated Hospital of Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China;2.Department of Laboratory Medicine,Dongzhimen Hospital of Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100700,China;3.Department of Obstetrics and Gynecology,The Sixth Hospital of Zhangjiakou City,Zhangjiakou,Hebei 075000,China;4.Department of Physiology,School of Basic Medicine,Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China;5.Department of Urology,Special Care Hospital of Zhangjiakou City,Zhangjiakou,Hebei 075000,China;6.Department of Internal Medicine and Hematology,The First Hospital of Zhangjiakou City,Zhangjiakou,Hebei 075000,China)

Objectives To investigate the changes and significance of plasma H2S concentration before and after treatment in patients with acute promyelocytic APL leukemia(acute).Methods 26 hospitalized patients with APL were randomly selected as the case group,and 26 healthy persons as control group.H2S concentrations in plasma of patients and controls were determined by the method of deproteinization,and the significant differences were analyzed between the patients with acute stage,clinical remission and healthy control group.Results The concentration of H2S in plasma in acute stage patients significantly decreased,with statistical significance compared with clinical remission stage and control group(P<0.05);in clinical remission after treatment,H2S concentrations in the plasma of patients increased,close to those in the healthy control group,with no statistical significance(P>0.05).Conclusion Endogenous H2S may be involved in the pathophysiological process of the occurrence, development and outcome of APL.

acute myeloid leukemia;hydrogen sulfide;plasma

張家口市2014年度科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃項(xiàng)目(No.1421125D)

范凌(1979-)，女，河北張家口人，主治醫(yī)師，主要研究方向：血液病學(xué)。

R 733.71

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2017.04.006

來(lái)稿日期：2016-11-23